何江帅
- 作品数：6 被引量：17H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鲤胸腺素Tβ全长cDNA的克隆与序列分析
- 2010年
- 应用荧光DDRT-PCR从鲤外周血白细胞克隆了鲤胸腺素β(thymosinβ,Tβ)基因cDNA全序列。序列分析表明,TβcDNA全长528bp,其完整的读码框架位于40～178bp,编码46个氨基酸,5'非编码区长39bp,3'非编码区长为348bp,且具有Poly(A)加尾信号(AATAAA),将该基因序列递呈GenBank,注册序列号为AY457946。氨基酸序列同源性分析显示,鲤Tβ氨基酸序列与鲤Tβa、斑马鱼Tβa及斑马鱼Tβ-2同源性均为84%。在系统发生树上,鲤Tβ与鲤、斑马鱼、白斑狗鱼和鲑Tβa及斑马鱼Tβ2聚类。
- 丰培金王文东李伟何江帅张俊辉杨振国卢强
- 关键词：白细胞
- 牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立被引量：6
- 2010年
- 用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。
- 李伟李伟孟日增石建平何江帅赵晓
- 关键词：IBRV原核表达间接ELISA
- 鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析被引量：8
- 2011年
- [目的]进行鲤鱼白细胞介素-1β(IL-1β)全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析。[方法]利用DD-RTPCR方法获得差异表达cDNA片段,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行筛选,克隆了鲤鱼IL-1β的全长cDNA,并进行了序列分析和差异表达分析。[结果]获得的阳性克隆含有1个大小为831 bp编码276个氨基酸的完整开放阅读框。聚类分析表明,鲤鱼IL-1β氨基酸序列与日本鲤鱼紧密聚为一支,氨基酸序列的同源性达95%,之后聚类顺序依次为鲫鱼、斑马鱼、猪、牛、马、人和小鼠。差异表达分析表明,经有丝分裂原刺激后前期(4 h)白细胞中IL-1β的表达量显著增大,但随着时间推移(12,24 h)并非一直较同期大,表达量总体趋势成峰形。[结论]为进一步研究IL-1β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应、应急反应和免疫应答的作用机制奠定了基础。
- 何江帅卢强李伟赵晓冯祥汝陈义龙
- 关键词：鲤鱼白细胞介素-1ΒCDNA克隆差异表达分析
- 鲤鱼白细胞介素-1β基因克隆、鉴定及时空转录分析
- 本研究应用核酸杂交法,以鲤鱼白细胞介素-1βcDNA部分片段为探针,筛选丝裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库,克隆了白细胞介素-1β全长cDNA序列,测得全长序列为1213bp,包含831bp的开放阅读框,推测编码2...
- 何江帅
- 关键词：鲤鱼白细胞介素-1ΒCDNA克隆基因组DNA转录分析
- 文献传递
- 鲤鱼肿瘤坏死因子α1基因cDNA的克隆及序列分析被引量：2
- 2011年
- 试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子α1(tumor necrosis factor alpha 1,TNFα1)EST序列为基础,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.9×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得3个阳性克隆。序列分析结果显示,该序列包含128 bp的5′非编码区(5-′UTR),423 bp的3′非编码区(3-′UTR),开放阅读框ORF长768 bp,共编码255个氨基酸,在其3′非编码区存在几个ATTTA不稳定基序。预测蛋白等电点为8.20,分子质量大小为28.1 ku。序列同源性比较结果表明,所获序列与GenBank上登录的鲤鱼TNFα基因的同源性达94%。蛋白质的序列和结构分析结果发现,其具有TNF家族的典型序列特征、1个跨膜区结构和1个假定的产生成熟肽的裂解位点。
- 赵晓何江帅冯祥汝陈义龙王彬李伟张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：鲤鱼克隆
- 鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析(摘要)(英文)被引量：1
- 2011年
- [目的]进行鲤鱼白细胞介素-1β(IL-1β)全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析。[方法]利用DD-RTPCR方法获得差异表达cDNA片段,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行筛选,克隆了鲤鱼IL-1β的全长cDNA,并进行了序列分析和差异表达分析。[结果]获得的阳性克隆含有1个大小为831bp编码276个氨基酸的完整开放阅读框。聚类分析表明,鲤鱼IL-1β氨基酸序列与日本鲤鱼紧密聚为一支,氨基酸序列的同源性达95%,之后聚类顺序依次为鲫鱼、斑马鱼、猪、牛、马、人和小鼠。差异表达分析表明,经有丝分裂原刺激后前期(2h)白细胞中IL-1β的表达量显著增大,但随着时间推移(12,24h)并非一直较同期大,表达量总体趋势成峰形。[结论]为进一步研究IL-1β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应、应急反应和免疫应答的作用机制奠定了基础。
- 何江帅卢强李伟赵晓冯祥汝陈义龙
- 关键词：鲤鱼白细胞介素-1ΒCDNA克隆差异表达分析
