伍丽华
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 靶向血管紧张素原的RNA干扰片段、其表达载体、混合克隆细胞株及其应用
- 本发明涉及一种靶向血管紧张素原的RNA干扰片段其序列为如序列表SEQ ID NO.1，还涉及其表达载体以及用于抑制肥胖的应用。由于本发明的干扰序列siR经过克隆入载体，转入前脂肪细胞中，血管紧张素原在转录后表达水平明显下...
- 黄志立张丽君伍丽华
- 文献传递
- 靶向人血管紧张素原小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定
- 2010年
- 背景:RNA干扰技术通过将具有一定结构特点、长19～25bp的双链小干扰RNA导入哺乳动物细胞,特异性降解与其序列具有同源性的mRNA分子,导致目的基因表达抑制。目的:拟构建针对人血管紧张素原mRNA的小干扰RNA表达载体,从而抑制肾素基因在脂肪细胞的表达。方法:从NCBI中查找人血管紧张素原基因全长mRNA序列(NM000029),利用GeneScript公司提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,自行设计靶向血管紧张素原的两条shRNA的DNA模板单链,合成靶向血管紧张素原基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的psiRNAT-U6.1/Neo质粒连接,在TOP10菌株中扩增,并测序鉴定。结果与结论:将含有血管紧张素原-mRNA目标序列19bp的双链DNA插入片段,连接到pRNAT-U6.1/Neo质粒形成重组质粒。EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,空载体得到351bp小片段,而人重组质粒得到397bp小片段,与预期相符。EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切后,空载体得到1条345bp小片段,而人重组载体没有得到小片段条带,与预期相符。测序结果表明psiRNAT-U6.1/Neo质粒已经插入人脂肪细胞的干扰合成片段,无碱基突变,成功构建了靶向血管紧张素原-小干扰RNA表达载体。
- 伍丽华杨汝德
- 关键词：血管紧张素系统血管紧张素原血管紧张素转换酶小干扰RNA质粒
- 双歧杆菌的基因组学与基因工程的新进展被引量：1
- 2008年
- 双歧杆菌是人类和动物体内非常重要的益生菌,有关双歧杆菌生理生化特性的研究已比较成熟。随着研究的不断深入,双歧杆菌的分子生物学研究也成为近年来研究的热点。综述了近年来有关双歧杆菌质粒分离、载体构建、基因组测序以及在基因治疗上的应用等研究进展。
- 伍丽华杨汝德
- 关键词：质粒基因组测序基因治疗
- 靶向人血管紧张素原的RNA干扰片段、表达载体与应用
- 本发明涉及一种针对人前脂肪细胞内血管紧张素原的RNA干扰片段，其序列为R1：TCCTGGGTGTTCCTTGGAA或R2：CTGGATGTTGCTGCTGAGA。本发明还提供一种上述RNA干扰片段的表达载体。本发明还提供...
- 张丽君黄志立吴晓明伍丽华
- 文献传递
- RNA干扰血管紧张素原基因表达对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:构建靶向血管紧张素原(AGT)基因的RNA干扰质粒,研究AGT基因对鼠前脂肪3T3-L1分化的影响。方法:设计靶向AGT的小分子RNA干扰片段(AGT-shRNA),以未靶向任何DNA的小分子RNA(Non-shRNA)为对照,利用载体psiRNA-U6.1/Neo构建重组表达质粒,转染鼠前脂肪细胞3T3-L1并筛选到稳定转染细胞株,RT-PCR和SDS-PAGE法分别检测AGT基因沉默效果,通过显微镜观察和脂肪细胞分化标志物检测来确定AGT基因干扰对3T3-L1细胞分化的影响。结果:成功构建AGT干扰质粒,与对照组比较,AGT基因转录水平受到显著抑制(P<0.05),AGT蛋白表达水平也仅为对照的43.86%。AGT基因干扰后3T3-L1细胞脂质水平和甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)活性仍随分化时间延长呈上升趋势,但增长量明显低于对照组(P<0.05)。结论:RNA干扰AGT基因可明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,提示脂肪组织中的肾素-血管紧张素系统(RAS)与脂肪代谢有重要关联。
- 黄志立张丽君伍丽华王妍杨汝德
- 关键词：血管紧张素原RNA干扰3T3-L1分化
