井绪东
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：暨南大学医学院血液病研究所更多>>
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- 体外诱导大鼠骨髓及人胎盘间质干细胞向胆碱能样神经元分化的实验研究
- 目的: 培养扩增大鼠骨髓（bone marrow,BM）、人胎盘（placenta）间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）;探讨其定向诱导分化为胆碱能样神经元的有效条件。 ...
- 井绪东
- 关键词：胎盘分化胆碱能神经元
- 文献传递
- 人胎盘间充质干细胞体外向胆碱能样神经元的分化
- 2010年
- 背景:胎盘中含有与骨髓中类似的间充质干细胞,也可能具有多向分化能力。目的:探讨人胎盘间充质干细胞体外能否定向诱导分化为胆碱能样神经元。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第4代,先用胎牛血清+碱性成纤维细胞生长因子诱导培养2d,然后分为3组:方案Ⅰ加入含碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇、维甲酸、神经生长因子的DMEM/F12继续诱导19d;方案Ⅱ在其基础上,诱导液中另加入表皮生长因子、Heparin;阴性对照组仅加入含胎牛血清的DMEM/F12培养液,不添加任何诱导剂。结果与结论:胎盘组织消化后获得的贴壁细胞,经2周培养后逐渐形成扁平单层细胞,呈平行排列或漩涡样成簇生长,为梭形,传至第3代细胞形态较均一。第4代人胎盘间充质干细胞强表达CD44,CD29,不表达CD34,CD45,CD106及HLA-DR。人胎盘间充质干细胞经方案Ⅰ和方案Ⅱ诱导2周后,均可检测到nestin、chat mRNA的表达,且chat,Ache,nestin阳性率显著高于阴性对照组细胞(P<0.05)。与阴性对照组比较,经两种方案诱导的人胎盘间充质干细胞培养上清液中乙酰胆碱浓度均明显升高(P<0.05),且方案Ⅰ诱导组升高幅度明显大于方案Ⅱ诱导组(P<0.05)。提示联合多种生长因子分阶段进行诱导,人胎盘间充质干细胞可在体外分化为具有合成及释放降解乙酰胆碱能力的胆碱能样神经元细胞。
- 井绪东何冬梅张洹陈丽
- 关键词：分化胆碱能神经元胎盘间充质干细胞干细胞
- 诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶
- ＜正＞目的：探索大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs） 表达神经胆碱乙酰化转移酶（CHAT）,提供其向胆神经细胞分化的可能性
- 井绪东陈丽张洹
- 文献传递
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胆碱能样神经元被引量：2
- 2010年
- 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞能否分化为胆碱能样神经元。方法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),取2～4代MSCs,进行诱导其向胆碱能神经元分化。诱导方案:10%胎牛血清诱导2d;换液为DMEM/F12培养基,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、巯基乙醇(ME)、维甲酸(RA)、神经生长因子(NGF),诱导8d;加入表皮生长因子(EGF),肝素(Heparin)继续诱导8d。空白对照组不作任何处理。观察诱导后的形态变化。采用RT-PCR检测巢蛋白(nestin),核受体相关因子(Nurr1),胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA的表达,间接免疫荧光法检测表达nestin、ChAT、神经核蛋白(NeuN),乙酰胆碱酯酶(AchE)的阳性细胞。结果诱导后细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,突起形成;RT-PCR显示,诱导后的细胞高表达nestin、Nurr1、ChAT,且基因表达相对强度与未诱导的MSCs比较有显著差异(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,诱导后的细胞高表达nestin、ChAT、NeuN、AchE,且阳性细胞大于80%,而对照组除ChAT阳性细胞为1%外,其他均为阴性。结论大鼠MSCs可诱导为胆碱能样神经细胞。
- 井绪东张洹陈丽何冬梅
- 关键词：间充质干细胞胆碱能神经元
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达酪氨酸羟化酶
- ＜正＞目的：探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞 （mesenchymal stem cells,MSCs）表达酪氨酸羟化酶;探索为帕金森病治疗提供特异性分化的细胞的可能性。
- 陈丽井绪东何冬梅张洹
- 文献传递
- 大鼠骨髓间充质干细胞向多巴胺能样细胞的体外分化被引量：3
- 2008年
- 目的探索大鼠骨髓间充质干细胞向多巴胺能样细胞分化。方法全骨髓培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞;体外培养至第3代,用碱性成纤维细胞生长因子,抗坏血酸和表皮生长因子诱导分化;免疫荧光法鉴定胞质中的多巴胺神经元相关蛋白的表达;RT-PCR鉴定多巴胺神经元相关基因的表达;ELISA法检测上清及胞质中的多巴胺。结果诱导后,免疫荧光法检测到诱导后的细胞表达多巴胺神经元相关蛋白:酪氨酸羟化酶、多巴胺转运蛋白和神经核蛋白;RT-PCR检测到诱导后的细胞表达多巴胺神经细胞相关基因TH、AADC;ELISA法检测到诱导后的上清及胞质中有多巴胺分泌。结论间充质干细胞具有向多巴胺能样细胞分化的能力。
- 陈丽何冬梅井绪东张洹房宝英
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化多巴胺
- 诱导干细胞向胰岛β样细胞分化的研究进展被引量：2
- 2007年
- β细胞替代治疗可能是目前唯一可以治愈1型糖尿病的方法,但可供移植的胰岛来源严重匮缺,阻碍了此疗法的临床应用。为此,调控干细胞分化为成熟的有功能的胰岛细胞成为近年来的研究热点。本文着重探讨了胰岛细胞发生发育的基因调控及几种生物活性分子体外诱导干细胞向胰岛β细胞分化的作用及其机理。
- 井绪东王跃春张洹
- 关键词：干细胞分化
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经样细胞分化的研究
- 目的：间充质干细胞具有高度的自我复制能力和多向分化潜能。本实验室前期的研究发现骨髓间充质干细胞(mesenehymal stem cells, MSCs)能分化成神经细胞,本实验拟进一步探索大鼠骨髓间充质干细胞体外能否定...
- 陈丽井绪东何冬梅张洹房宝英
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化
- 文献传递
- 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达酪氨酸羟化酶被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)表达酪氨酸羟化酶,为帕金森病细胞移植替代治疗提供特异性分化的细胞。方法:在无菌条件下从SD大鼠的股骨中分离骨髓间充质干细胞,体外培养传3代后,用表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和抗坏血酸诱导MSCs表达酪氨酸羟化酶。在镜下,观察MSCs在诱导前后的形态变化;用免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶的表达。结果:MSCs经诱导分化后,胞体逐渐变圆,并伸出神经轴突、树突样突起;免疫荧光化学表明细胞酪氨酸羟化酶染色呈强阳性反应。结论:SD大鼠骨髓间充质干细胞在体外能被定向诱导表达酪氨酸羟化酶,有可能为帕金森病治疗提供特异性分化的细胞。
- 陈丽井绪东何冬梅张洹房宝英
- 关键词：骨髓间充质干细胞酪氨酸羟化酶帕金森氏病
- 诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶被引量：3
- 2007年
- 目的:胆碱乙酰化转移酶是胆碱能神经系统功能变化的重要标记。观察大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶的情况,探讨其定向诱导分化为特异胆碱能神经元的有效条件。方法:实验于2006-09/2007-05在暨南大学医学院血液病研究完成。①实验方法:SD大鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下取股骨,从骨髓中分离间充质干细胞,待80%～90%融合后胰酶消化传代。体外培养传3代后,向胆碱乙酰化转移酶阳性神经细胞进行诱导分化。实验Ⅰ组:DMEM/F12+0.1mmol/L2-巯基乙醇+1mmol/L维甲酸诱导2d。实验Ⅱ组:体积分数为0.1的胎牛血清+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子+0.1mmol/L2-巯基乙醇预诱导2d,换液后再加入1mmol/L维甲酸、10μg/L表皮生长因子、10μg/L神经生长因子继续诱导7d。实验Ⅲ组:在Ⅱ组方案的基础上加入1250u/mLHeparin。空白对照组不作任何处理。②实验评估:观察间充质干细胞诱导后的形态变化;诱导9d,采用RT-PCR检测及凝胶电泳分析实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达;诱导2,9d,以CY3间接免疫荧光法检测各组胆碱乙酰化转移酶阳性细胞分化情况。结果:①骨髓间充质干细胞诱导后形态学变化:诱导1d细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,折光性及立体感增强,部分细胞可见突起开始形成;诱导2d细胞突起伸长,胞间或细胞与间质可形成连接;诱导9d细胞突起变粗,胞浆内分泌颗粒增加并见胞核。②胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达:诱导后的细胞高表达胆碱乙酰化转移酶mRNA。③胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞检测:实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率为80%～90%,明显高于实验Ⅰ组的50%～70%,且细胞生长状态较好;实验Ⅲ组细胞脱壁死亡率最高,亦有较高的胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率。结论:①鼠骨髓间充质干细胞能被转化为表达神经胆碱乙酰化转移酶的细胞。②
- 井绪东陈丽何冬梅张洹
- 关键词：间充质干细胞胆碱乙酰化转移酶
