乐东海
- 作品数：13 被引量：45H指数：2
- 供职机构：宁波市第二医院更多>>
- 发文基金：宁波市自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM细胞迁移能力的对比研究
- 2013年
- 目的探讨乳腺癌细胞化疗继发耐药后细胞迁移能力的变化,并筛选出相关基因。方法以MCF-7细胞株为亲本细胞。采用阿霉素(ADM)低浓度持续加量诱导法建立对ADM耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM。应用ATP-TCA药物敏感检测法和xCELLligence/RT-CES实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM对多种化疗药物的耐药情况及细胞增殖能力。应用Transwell实验和xCELLligence/RT-CIM实时细胞电子分析系统检测人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM的细胞迁移能力。应用比较基因组芯片筛选出人乳腺癌细胞株MCF-7、MCF-7/ADM DNA拷贝数4倍差异的基因。结果撤药培养150d后,MCF-7/ADM细胞较亲本细胞MCF-7的ADM耐药指数为72.9,对其他化疗药物无明显的交叉耐药性。MCF-7/ADM细胞迁移能力较MCF-7明显降低(P<0.05)。MCF-7/ADM有12种基因DNA拷贝数是MCF-7的4倍,MCF-7有6种基因DNA拷贝数是MCF-7/ADM的4倍。结论乳腺癌细胞化疗继发耐药伴随细胞迁移能力明显降低,其相关基因的DNA拷贝数亦有明显差异。
- 陈平李克强毛联钢乐东海冯伟云
- 关键词：乳腺癌阿霉素化疗耐药细胞迁移
- 抑癌基因p15反义RNA高表达是急性髓系白血病细胞中的频发事件被引量：2
- 2016年
- 目的探讨急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia，AML）患者中抑癌基因p15反义RNA（p15AS）的表达及其临床意义。方法应用单链特异引物逆转录的实时定量PCR方法验证AML细胞系存在p15AS，分析43例AML患者和21例良性血液病患者（对照组）骨髓p15AS和p15mRNA的表达水平，并分析p15AS的表达量与AML临床特征的关系。应用流式细胞术检测AML患者和对照组骨髓中p15蛋白的表达。结果急性髓系白血病细胞系中存在p15AS高表达。与对照组相比，AML患者p15AS表达增加而p15mRNA表达下调（t=41．45，P=0．000；t=-24．76，P=0．000）。AML组骨髓细胞中p15蛋白的表达[13．2％（10．2％～18．50％）]较对照组E84．5％（80．25％～86．8％）]显著减少，差异有统计学意义（Z=-6．22，P=0．000）。P15AS表达水平与AML患者的性别、年龄、FAB分型、初诊白细胞计数、血小板数量、骨髓增生程度和细胞遗传学预后分组无相关性（均P〉0．05）。结论p15AS高表达可能是AML的常见事件，并可能在抑癌基因p15表观遗传沉默中具有重要作用。
- 廖于峰乐东海竺展坤
- 关键词：急性髓系白血病P15基因反义RNA
- Scinderin基因沉默对人胃癌细胞SGC-7901增殖、转移的影响被引量：2
- 2014年
- Scinderin是一种依赖Ca2+的肌动蛋白丝(F-actin)切割蛋白,在细胞分泌过程中发挥着重要作用。目前,针对scinderin在人类疾病尤其是肿瘤中的生物学功能研究报道的并不多。该实验通过构建scinderin-shRNA慢病毒载体并感染人胃癌细胞株SGC-7901,于荧光显微镜下观测感染效率,利用RT-qPCR和Western blot实验证实scinderin的沉默效果。运用实时细胞分析仪(RTCA)检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell小室检测细胞的迁移能力。结果显示,将构建好的病毒载体成功转入了胃癌细胞SGC-7901。感染scinderin-shRNA病毒载体后,scinderin的mRNA和蛋白质表达水平均受到不同程度的抑制(P<0.01),细胞的增殖和迁移能力均显著降低(P<0.05),细胞周期阻滞在G2/M期。该研究表明,胃癌细胞SGC-7901中scinderin低表达能有效抑制细胞的增殖和转移能力,这也为scinderin在胃癌演化过程中的机制研究奠定了实验基础。
- 陈晓敏乐东海李克强郭俊明陈平毛联刚冯伟云
- 关键词：胃癌增殖
- 鼻咽癌患者鼻咽拭子中EB病毒LMP1基因C末端的变异及序列分析被引量：3
- 2009年
- 目的研究LMP1基因C端区在宁波地区鼻咽癌患者中的变异状况,并探讨其在鼻咽癌中所起的作用。方法通过鼻咽拭子的方法采集鼻咽癌患者的病变黏膜上皮及分泌物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增鼻咽癌患者鼻咽拭子中的LMP1基因C末端,并对其进行序列分析。结果30例鼻咽癌患者的鼻咽拭子标本中有28例显示出阳性条带,且都存在序列变异,而正常对照标本无一扩增得到,特异性为100.0%。28例阳性标本中有7例标本存在30 bp的缺失突变,缺失率为25.0%。结论宁波地区的鼻咽癌鼻咽拭子中LMP1基因C端高变区30 bp的缺失型约占25.0%,不是主要流行型。
- 张琛张卓铭乐东海
- ATP-TCA在大肠癌化疗药物敏感性检测中的应用
- 2010年
- 目的:评估ATP-TCA肿瘤药敏检测法指导制定大肠癌化疗方案的可行性。方法:应用ATP-TCA肿瘤药敏检测法,检测28例大肠癌手术标本和19例大肠癌外周血标本对8种常用抗肿瘤药物的敏感性。结果:大肠癌对抗癌药物的敏感程度存在着异质性,联合用药的敏感率高于单药。外周血标本和手术标本检测结果具有一致性,检测结果与临床疗效基本相符。结论:ATP-TCA肿瘤药敏检测法可用于临床制定大肠癌个体化的化疗方案。
- 戴晓宇李克强杨峂毛联钢乐东海冯伟云
- 关键词：大肠癌化疗方案
- 鼻黏膜中Toll样受体5的表达被引量：2
- 2012年
- 目的研究鼻黏膜中Toll样受体5(Toll-likereceptor-5,TLR-5)的表达以了解TLR-5在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法鼻息肉和下鼻甲组织从接受鼻内镜手术治疗的慢性鼻及鼻窦炎和鼻中隔偏曲患者取得。应用免疫组化法检测17例鼻息肉和13例下鼻甲黏膜中TLR-5蛋白的表达,应用实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescentquantitative RT-PCR,real-time FQ-RT-PCR)检测14例鼻息肉和9例下鼻甲黏膜中TLR-5 mRNA的表达。结果在所有标本中均检测到TLR-5 mRNA和蛋白表达。免疫组化显示TLR-5蛋白主要表达于鼻黏膜上皮细胞和腺体上皮细胞。在细胞核和细胞浆中均有表达。在鼻黏膜上皮,染色最强的区域位于黏膜上皮表面一侧的细胞膜和细胞核。另外在间质单核样炎症细胞及NK细胞也有表达。鼻息肉组织中TLR-5蛋白表达指数5.529±0.653较下鼻甲2.346±0.619增高,差异有统计学意义(Z=-3.107,P=0.002)。结论本次研究确认了TLR-5在鼻黏膜和鼻息肉组织的表达,鼻息肉组织中TLR-5表达的增高可能与鼻息肉内持续的炎症状态有关。提示TLR-5有可能成为鼻息肉、慢性鼻及鼻窦炎一个新的治疗靶点。
- 汪际云黄春鑫乐东海胡宝华苗英李克强张顺王晓伟
- 关键词：鼻窦炎鼻息肉TOLL样受体5
- RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d’origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响。方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA。Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响。结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05)。Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28±1.34)、(8.93±1.20)μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07)μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性。
- 毛联钢李克强卓文莹戴晓宇余永明冯伟云乐东海
- 关键词：HT-29细胞RNAI耐药
- 新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响
- 2009年
- 目的:观察新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响。方法:以48例具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者为研究对象,采用RT-PCR技术,联合检测外周血中CK-19 mRNA、VEGF mRNA和hMAM mRNA的表达,观察新辅助化疗前后血微转移因子变化。结果:本组乳腺癌微转移因子阳性率在病理分级中差异无显著性意义(P>0.05);在分期中,分期越高阳性率越高(P<0.05);化疗方案可影响微转移因子阳性率的变化(P<0.01)。结论:通过检测乳腺癌患者外周血中微转移因子,有可能成为判断乳腺癌预后和指导治疗的指标。
- 和钢乐东海杨峂张顺李克强
- 关键词：乳腺癌新辅助化疗逆转录聚合酶链反应
- 鼻黏膜中Toll样受体5的表达
- 目的研究鼻黏膜中Toll样受体5(Toll-like receptor-5,TLR-5)的表达以了解Toll样受体5在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法人鼻息肉和下鼻甲组织从接受内窥镜手术治疗的慢性鼻窦炎和鼻中隔偏曲患者取得。...
- 汪际云黄春鑫乐东海胡宝华苗英李克强张顺王晓伟
- 关键词：鼻窦炎鼻息肉
- 文献传递
- 自杀基因ePNP的克隆及在人肝癌细胞HepG_2的表达
- 2010年
- 目的构建含大肠杆菌的嘌呤核苷酸磷酸化酶(ePNP)DNA的重组逆转录病毒载体,观察ePNP基因在人肝癌细胞株HepG2的表达。方法用PCR法获得ePNP亚克隆,构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,鉴定测序。脂质体法将逆转录病毒载体pDsRed-ePNP转染AmphoPackTM-293包装细胞,获得高滴度病毒并感染HepG2细胞。流式细胞术和荧光显微镜检测红色荧光蛋白(RFP)的表达。RT-PCR法检测ePNPmRNA的表达。ATP-生物荧光体外检测实验(ATP-TCA法)检测不同浓度Fludarabine对HepG2、HepG2/pDsRed和HepG2/ePNP细胞的杀伤作用。结果克隆的ePNP基因与文献报道一致,成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP。病毒包装后滴度为5E+4TU/mL。表达RFP的HepG2/ePNP阳性细胞率为97.1%。HepG2/ePNP细胞稳定表达ePNP。低浓度Fludarabine对HepG2/ePNP细胞毒效应明显。结论成功构建重组逆转录病毒载体pDsRed-ePNP,并且获得稳定表达ePNP基因的HepG2/ePNP人肝癌细胞株。
- 戴晓宇李克强乐东海毛联钢冯伟云
- 关键词：肝肿瘤人肝癌细胞株HEPG2自杀基因逆转录病毒载体
