魏枫
- 作品数：60 被引量：179H指数：8
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 新型树突状细胞疫苗的构建及功能的初步鉴定
- 2011年
- 目的:构建可同时实现沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激和肿瘤相关抗原负载的新型树突状细胞(DC)疫苗。方法:构建沉默SOCS1并共表达HMGB1及肿瘤相关抗原NY-ESO-1的质粒(p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1)。体外诱导单核细胞分化为DC,将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞。同时设立未转染组、shNC/GFP转染组和p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组。PCR和Western blot验证基因及蛋白表达后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC细胞分泌的肿瘤坏子因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1及IL-6的变化。结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确。成功将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞,并在基因和蛋白水平验证NY-ESO-1的正确表达,HMGB1可在胞浆内表达。SOCS1 shRNA质粒shS可沉默SOCS1表达。p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组DCTNF-α、IL-12、IL-1及IL-6分泌量较未转染组和shNC/GFP转染组升高(P<0.05)。结论:成功构建可同时实现沉默SOCS1、HMGB1刺激和肿瘤相关抗原负载的新型DC疫苗。
- 霍佳杨莉莉魏枫于津浦李慧任秀宝
- 关键词：细胞因子信号转导蛋白抑制因子树突细胞癌症疫苗质粒转染
- Serum HMGN1 is a novel clinical biomarker in non-small cell lung cancer
- Background: High-mobility group nucleosome-binding protein 1(HMGN1), a recently identified alarmin, is a non-h...
- 杨帆魏枫孙倩金昊王建任秀宝
- 关键词：NSCLCBIOMARKERELISA
- 文献传递
- 反义表皮生长因子受体对人肺癌细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的 观察反义表皮生长因子受体（EGFR）对人肺腺癌细胞系放射敏感性的影响。方法 在脂质体介导下用质粒pcDNA3-反义EGFR（pcDNA3-antiEGFR）转染spc-a-1细胞，并以未转染（对照组）和空质粒pcDNA3转染（pcDNA3组）细胞作对照。用G418筛选稳定表达的细胞克隆，以RT-PCR和Western blot检测转染后EGFR的mRNA及蛋白表达抑制情况，流式细胞仪检测转染后细胞周期及单次照射8Gy后各组细胞凋亡比例。3组细胞分别给予6MVX射线照射0、2、4、6和8Gy，计算克隆形成率，拟合生长曲线。结果pcDNA3-antiEGFR组与对照组、pcDNA3组比较，EGFR mRNA和蛋白表达量明显减少，G2/M期比例分别为（29．53±1．91）％、（13．7±1．30）％和（12．40±1．34）％，单次照射8Gv后，3个组细胞的凋亡率分别为（39．24±1．57）％、（13．79±0．63）％和（15．02±0．85）％。与对照组相比较，pcDNA3-antiEGFR组细胞的阢、D0、Sq 、SF2值分别由2．11、2．49和0．84降至1．19、0．15和0．32，提示抑制EGFR表达，可降低spc-a-1细胞对射线所致亚致死性损伤的修复能力。结论 反义EGFR可以降低人肺癌spc-a-1细胞中EGFR的表达，改变细胞周期分布，促进凋亡，降低亚致死性损伤的修复能力，增加肺癌细胞系spc．a．1的放射敏感性。
- 王佩国刘志艳魏枫于津浦史玉荣王平
- 关键词：肺腺癌反义表皮生长因子受体
- iASPP真核表达载体的构建及其对NIH3T3细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的:构建iASPP真核表达载体,稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3)并检测其表达,观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。方法:设计引物以源克隆PCMV-iASPP为模板PCR扩增其中的CDS区,亚克隆入FLAG-pcDNA3.0,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆,经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选28 d,RT-PCR、West-ern blotting检测基因、蛋白表达;MTT法观察细胞增殖能力。结果:重组质粒鉴定正确,筛选所得阳性克隆中可以检测到iASPP基因的转录和表达,且该iASPP阳性表达细胞株增殖能力明显增强。结论:成功构建iASPP真核表达载体并成功构建稳定表达iASPP的NIH3T3细胞株,证明该基因的稳定表达在体外能显著增强NIH3T3细胞增殖能力。
- 孔凡铭张新伟于津浦魏枫李慧任秀宝
- 关键词：IASPPNIH3T3细胞P53
- VAV1蛋白与肿瘤浸润T淋巴细胞失能机制的实验研究
- 任秀宝魏枫苏延军杨蕴于津浦李慧安秀梅李润美
- Vav1是T细胞中重要的信号传导分子之一。本研究观察了原位肿瘤浸润T淋巴细胞（TIL-T）中Vav1的表达情况和肿瘤局部免疫抑制的关系。对原位TIL-T的研究结果发现： 来自恶性黑色素瘤的原位TIL-T其Vav1蛋白含...
- 关键词：
- 关键词：蛋白肿瘤浸润T淋巴细胞T细胞
- 癌基因iASPP-SV参与乳腺癌的形成被引量：1
- 2016年
- 背景与目的:p53凋亡刺激蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53,i ASPP)属于ASPP家族成员,其与p53结合,抑制p53靶基因的转录活性,抑制细胞凋亡,与肿瘤形成相关。先前该研究所在课题组发现了i ASPP的一个新亚型i ASPP剪切变异体(i ASPP splice variant,i ASPP-SV),其是包含407个氨基酸残基的核蛋白,能与p53结合、抑制p53的转录活性,但是其与乳腺癌细胞增殖的作用还不清楚。因此,该研究旨在探讨i ASPP-SV在乳腺癌发生、发展中的作用。方法:用5’-基因末端快速扩增(rapid amplification of c DNA ends,RACE)方法检测乳腺癌细胞系MCF-7的i ASPP-SV m RNA的5’末端序列。将p FLAG-i ASPP-SV和p FLAGi ASPP(828)分别转染HEK 293细胞,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测HEK293细胞及8种人类肿瘤细胞i ASPP-SV的表达情况。建立稳定表达FLAG-i ASPP-SV和FLAG-i ASPP(828)的NIH 3T3细胞系,细胞增殖分析、克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测i ASPP-SV、i ASPP(828)是否促进细胞增殖、是否是癌基因。用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reactive,RTFQ-PCR)的方法检测原发性乳腺癌i ASPP-SV和i ASPP(828)m RNA表达水平,确定人乳腺癌中i ASPP-SV是否上调。用荧光素酶报告基因实验检测i ASPP-SV、i ASPP(828)、p53与NF-κB/p65的关系。结果:5’-RACE方法显示,MCF-7细胞中的i ASPPSV由RAI序列(DQ986418.1)编码。Western blot实验显示,多种人类肿瘤细胞系表达内源性i ASPP-SV。细胞增殖分析、克隆形成实验和软琼脂集落形成实验证实i ASPP-SV与i ASPP(828)能促进肿瘤细胞增殖,是癌基因。RTFQ-PCR实验显示,p53野生型乳腺癌组织i ASPP-SV表达水平的中位值比p53突变型显著升高。荧光素酶报告基因实验证实i ASPP-SV、i ASPP(828)能抑制NF-κB/p65转录,因此i ASPP可能是双功能蛋白。结论:i ASPP-SV可能作为乳腺癌治疗的有效靶点。
- 董一楠孔凡铭张新伟魏枫孙倩
- 关键词：P53NF-ΚB乳腺癌
- 粒巨细胞集落刺激因子分泌性同种异体肺癌细胞疫苗与自体疫苗抗肺癌免疫保护作用比较被引量：1
- 2008年
- 目的探讨粒-巨细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因修饰同种异体和自体瘤苗诱导抗肿瘤免疫反应的差异。方法以接种Lewis肺癌细胞系的C57BL小鼠为动物模型。将含小鼠GM-CSF重组质粒转染小鼠肺癌细胞系LA795和LLC细胞，制备同种异体和自体瘤苗。分别免疫荷瘤小鼠，检测淋巴细胞的活化；脾细胞及其中的CD8^＋T细胞的杀伤活性。结果GM—CSF分泌性LA795和LLC瘤苗接种后，小鼠成瘤时间明显较晚，生存期明显延长，脾淋巴细胞活化比例显著升高（P〈0．01）；脾细胞及CD8^＋T细胞的杀伤活性明显升高（P〈0．05）；同种异体和自体瘤苗在诱导淋巴细胞活化及杀伤活性方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论GM-CSF分泌性同种异体和自体瘤苗均可诱导特异性抗肿瘤免疫反应。
- 姜宏景任秀宝李慧于津浦魏枫马明全
- 关键词：肺癌免疫治疗疫苗
- 新型肺癌DC疫苗的制备和抗肿瘤免疫活性研究
- 李慧苏延军黄宗堂曹水任秀宝魏枫于津浦张澎安秀梅
- DC疫苗是肿瘤免疫治疗的重要手段之一，并已显示出良好的应用前景，通过探讨更为有效、实用的抗原负载形式、细胞诱导方法、与其他免疫治疗手段的联合应用等，进一步提高DC疫苗的抗肿瘤免疫活性，有助于最终提高其临床应用效果，对于D...
- 关键词：
- 关键词：DC疫苗抗肿瘤免疫活性肺癌
- 非小细胞肺癌组织微卫星不稳定与T淋巴细胞浸润的关系被引量：7
- 2016年
- 目的:分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织错配修复蛋白MLH1、MSH2和MSH6的表达和T淋巴细胞浸润情况,探讨微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)与NSCLC组织T淋巴细胞浸润的关系。方法:收集天津医科大学肿瘤医院2004年至2010年NSCLC组织标本100例,应用免疫组化法检测癌组织中MLH1、MSH2和MSH6的表达,以其中1种及1种以上蛋白表达阴性者判定为MSI;同时检测T淋巴细胞浸润情况,并分析MSI与NSCLC临床病理特征的关系。结果:NSCLC组织中MSI检出率24%,少于微卫星稳定(microsatellite stability,MSS)。MSI NSCLC组织中T淋巴细胞浸润明显高于MSS者。免疫组化结果显示:MSI NSCLC组织CD3^+、CD4^+、CD8^+ T淋巴细胞浸润数目明显多于MSS NSCLC组织,两者差异有统计学意义(P<0.05)。MSI与患者的年龄有关(P<0.05),而与患者的性别、肿瘤组织类型、肿瘤大小、淋巴结有无转移和肿瘤有无远处转移均无关(P>0.05)。结论:MSI影响NSCLC肿瘤免疫微环境,MSI的检测可为NSCLC免疫治疗效应提供预测指标。
- 桑友洲梅静思于文文张喜英魏枫于津浦任秀宝
- 关键词：非小细胞肺癌微卫星不稳定
- 肿瘤细胞来源胞外体的分离鉴定与功能检测被引量：1
- 2009年
- 目的:分离提纯和电镜鉴定乳腺癌细胞系MCF-7细胞分泌的胞外体,并观察其对淋巴细胞增殖的影响。方法:将细胞培养上清进行分步离心、浓缩、密度梯度离心获得纯化后的胞外体,并对胞外体进行透射电镜鉴定。将分离纯化的胞外体加入含有IL-2的淋巴细胞培养体系中,用MTT试验计算淋巴细胞的增殖率,观察胞外体对淋巴细胞增殖的影响。结果:从2×107个细胞可获得20mL纯化的胞外体,测得其总蛋白浓度为(1.84±0.01)g/L,经电镜鉴定MCF-7细胞来源的胞外体直径为55～70nm,为有膜包裹的囊泡状结构,大小较为均一,形态特征与观察到的多泡体的内部囊泡的大小和形态是一致的。MTT试验显示它能够抑制IL-2诱导的淋巴细胞增殖,并且随剂量增加抑制作用增强。结论:肿瘤细胞来源的胞外体可通过细胞培养上清分步离心浓缩纯化得到,其不仅具有胞外体的形态学特征,同时可对IL-2诱导的淋巴细胞增殖产生剂量依赖性的抑制作用。
- 崔焱于津浦李慧杨莉莉魏枫安秀梅任秀宝
- 关键词：乳腺肿瘤免疫耐受细胞分离
