韩中博
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 肿瘤细胞自噬的诱导及其细胞周期分析
- 韩中博
- 文献传递
- 香烟烟雾提取物对人呼吸道上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响被引量：9
- 2006年
- 背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normalhumanbronchialepithelialcells,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况。方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测两种细胞活性。荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strandbreaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤。用免疫印迹检测γ-H2AX表达。同时,亚G1峰法(SubG1peak)和AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡。用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化。结果:MTT结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低。CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4h左右,然后逐渐降低。DNA损伤后平均12h可以出现凋亡。另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4h后方可出现。结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系。
- 付强成静韩中博李小兰陈小燕张鹏肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：Γ-H2AX凋亡
- 正常人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系被引量：5
- 2007年
- 本研究检测凋亡受体Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ在人外周血淋巴细胞(PBL)增殖过程中的表达情况及其细胞周期特异性,并探讨其与凋亡受体途径介导的细胞周期特异性细胞凋亡的关联性。应用双参数流式细胞术检测人外周血淋巴细胞在G0期和经植物凝集素刺激(PHA)进入细胞周期后Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达情况以及细胞周期特异性,同时检测肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导人外周血淋巴细胞的凋亡。结果表明:经植物凝集素刺激24小时后的外周血淋巴细胞Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ表达率较G0期外周血淋巴细胞分别增加了(35.55±6.63)%,(30.63±2.66)%,(26.62±5.14)%,均具有显著性差异(P<0.01),而且主要表达在G1期;未经植物凝集素刺激的外周血淋巴细胞停留在G0期,TNF-α和anti-Fas诱导后没有发生凋亡,而刺激后进入细胞周期的淋巴细胞经TNF-α和anti-Fas诱导后发生凋亡,其凋亡主要在G1期。结论:凋亡受体在外周血淋巴细胞中的表达与凋亡受体途径介导的细胞凋亡有明显的量效关系,凋亡受体途径介导细胞凋亡的细胞周期特异性与凋亡受体表达的细胞周期特异性有关,细胞凋亡的发生与细胞是否进入细胞周期有关。
- 胡静何小军冯永东杨长永韩中博龚建平
- 关键词：细胞周期细胞凋亡人外周血淋巴细胞细胞增殖
- 肿瘤细胞自噬的诱导及其细胞周期分析被引量：10
- 2006年
- 背景与目的:自噬作为Ⅱ型程序性死亡——自噬性死亡过程中的主要现象,与细胞的自噬性死亡有着密切的关系。研究者们对凋亡与细胞周期的关系进行了深入而细致的研究,但对自噬性细胞死亡与细胞周期的关系却知之甚少。本研究的目的是探讨不同方法诱导的细胞自噬与细胞周期之间的关系。方法:用Hanks’液替代培养基的饥饿诱导和用长春新碱诱导两种方法分别处理对数生长期的HeLa细胞、SW480细胞以及经过和未经过植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激的健康人外周血淋巴细胞;应用激光共聚焦显微镜和透射电镜检测细胞自噬的发生,兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain3,MAP1-LC3-Ⅱ)/DNA双参数流式细胞术分析自噬细胞的细胞周期。结果:HeLa细胞和SW480细胞用饥饿和长春新碱两种方法诱导的细胞自噬在G1、S、G2/M期均可以发生,且自噬发生率随诱导时间的延长逐渐增加。处于静止期(未经PHA刺激)的外周血淋巴细胞没有自噬的发生,48h时LC3-Ⅱ表达率<2.62%(HanksL液饥饿诱导)或<6.16%(长春新碱诱导);经PHA刺激48h进入细胞周期的外周血淋巴细胞,2h时已有明显的自噬发生。结论:MAP1-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术是对细胞自噬与细胞周期进行同步分析的一种新的简便可靠的方法;细胞自噬只发生在细胞进入周期后,而静止期细胞对自噬诱导因素不敏感。
- 韩中博张鹏付强李小兰葛军娜陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：自噬细胞周期肿瘤程序性死亡流式细胞术
