陈苹
- 作品数：16 被引量：34H指数：3
- 供职机构：北京大学医学部生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“985工程”国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 玉米(Zea mays)精细胞及体细胞原生质体生物素标记表膜蛋白的比较
- 陈苹
- 钟状期成釉细胞的体外生长研究被引量：2
- 2009年
- 目的:通过对乳牙牙胚成釉细胞的体外培养生长情况的研究,了解成釉细胞的生长和分化过程。方法:解剖分离因疾病原因引产遗弃的19周胎儿下颌骨,半侧固定后拍摄数字X线影像,连续切片HE染色;另半侧未固定的组织分离乳牙牙胚成釉器,胶原酶消化法制成细胞悬液,采用差速贴壁和无血清培养基选择性培养成釉细胞。培养的乳牙胚成釉细胞通过细胞角蛋白14免疫细胞染色鉴定,并以RT-PCR方法检测釉质基质蛋白的表达。结果:X线影像显示牙胚冠部有硬组织形成,组织学乳牙牙胚处于钟状期,可见分化的成釉细胞分泌大量细胞外基质,釉牙本质界处釉质已矿化。无血清培养基中牙源性上皮的生长分化良好,细胞角蛋白14染色阳性,RT-PCR显示有釉蛋白、釉原蛋白和成釉蛋白的表达。结论:采用无血清培养基可以选择性的培养乳牙胚钟状期成釉细胞,能够较好反映成釉细胞的生长分化状态。钟状期分化的成釉细胞进入细胞外基质分泌活跃期,并在釉牙本质界处最早出现釉质的矿化。
- 田华吕平高岩陈苹周春燕高学军
- 关键词：成釉细胞体外培养基质蛋白
- 北京地区180名汉族新生儿HLA-G多态性分析
- 2004年
- 孟君石春林李涛余晓燕杨颖陈苹马康涛朱平周春燕
- 关键词：汉族新生儿人类白细胞抗原-GHLA-G
- 流式细胞分析测定猪外周血单个核细胞Gal α1,3 Gal水平(英文)
- 2010年
- 在考虑以猪器官作为供体对人进行异种器官移植时,α1,3半乳糖被认为是引起超急性免疫排斥的主要异种抗原.人们建立了各种方法以降低猪α1,3半乳糖水平,但是也有可能筛选得到在自然情况下α1,3半乳糖表达水平比较低的猪.为了研究在正常猪单个核细胞中α1,3半乳糖浓度分布的差异,利用鸡免疫球蛋白Y(ck-IgY)抗体通过流式细胞分析对正常猪的α1,3半乳糖水平的差异进行检测.取3～8周龄猪的全血,用肝素抗凝处理后经密度梯度离心获取外周血单个核细胞(PBMCs),与FITC标记的ck-IgY(10μg/ml)孵育,经流式细胞仪检测α1,3半乳糖水平.结果显示,相同周龄猪的α1,3半乳糖水平可有0.4～2.6倍差异,同一猪的水平在不同周龄有1.3～5.6倍差异.ck-IgY的特异性由棉籽糖和α1,3半乳二糖测定,棉籽糖(100μmol/L)可抑制70%ck-IgY结合,而α1,3半乳二糖(6.25μmol/L)可完全取消ck-IgY的结合,说明ck-IgY与猪单个核细胞是特异性结合.上述发现说明,ck-IgY是检测猪单个核细胞表面α1,3半乳糖的特异试剂,不同猪或是同一猪在不同时间的α1,3半乳糖水平有着明显的差异.
- 陈苹周春燕马康涛
- 关键词：异种抗原流式细胞分析
- 定向诱导小鼠ES细胞向心肌细胞的分化被引量：7
- 2005年
- 为了提高体外诱导ES细胞向心肌细胞分化的效率 ,对以往的诱导方法加以改进 ,采用直接悬浮培养和 0 8%DMSO诱导 ,建立了简便、高效的定向诱导ES细胞向心肌细胞分化的体系 .诱导第 9d起可见自发性、有节律跳动的类胚体出现 ,第 14d达到高峰 ,约有 70 %的拟胚体产生跳动 .用RT PCR的方法在跳动的拟胚体中检测到心肌细胞特异性标志物的表达 ,采用免疫荧光染色的方法在蛋白水平检测到心肌特异的α辅肌动蛋白 (α actinin)的表达 ,并可见清晰肌小节 ,表明在改进的体外诱导条件下ES细胞可分化为成熟的心肌细胞 .
- 林钊贾竹青马康涛陈苹周春燕
- 关键词：胚胎干细胞细胞分化心肌细胞
- 人类胎儿骨髓间充质干细胞的白细胞抗原表达特征被引量：1
- 2006年
- 目的：对体外培养不同代数流产胎儿骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs）的人类白细胞抗原Ⅰ类（human leukocyte antigen，HLA-Ⅰ）和HLA-Ⅱ类抗原表达情况以及经过不同浓度干扰素γ（IFN-γ）作用后HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达变化进行观察，为建立干细胞库进行细胞移植提供体外实验证据。本研究经北京大学医学部伦理委员会批准。方法：胎儿MSCs取自23～24周流产胎儿，体外培养后取第5和第12代的细胞，流式细胞仪分析HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达水平。经过终质量浓度为5μg／L或50μg／L的IFN-γ处理后，于24，48，72，96，120h检测HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原的表达；并用RT-PCR方法定性分析第13代细胞HLA-E和HLA-G的mRNA表达。结果：胎儿骨髓MSC表达HLA-Ⅰ类抗原，几乎不表达HLA-Ⅱ类抗原。IFN-γ可以上调MSCs的HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原。流式细胞分析显示HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞占总细胞的比例超过50％，但HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞不到10％。经过50μg／L的IFN-γ处理后，第5代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度与未经处理的细胞相比明显增加，且荧光强度随时间延长呈现递增趋势。第12代细胞HLA-Ⅰ类抗原阳性细胞百分率及荧光强度的上调幅度明显低于第5代细胞。相同浓度IFN-γ（50μg／L）作用于第5代和第12代细胞均可上调HLA-Ⅱ类抗原，第5代细胞于48h开始上调（59．9％），第12代细胞于72h开始上调（48．1％）。第12代细胞HLA-Ⅱ类抗原上调幅度低于第5代细胞。不同浓度IFN-γ（5μg/L和50μg／L）处理后，HLA-Ⅰ类抗原和HLA-Ⅱ类抗原阳性细胞百分率均明显增加。RT-PCR结果显示，胎儿骨髓MSCs有HLA-E和HLA-G抗原的mRNA水平表达。结论：胎儿骨髓MSCs可以被IFN-γ诱导上调HLA-Ⅰ类和HLA-Ⅱ类抗原表达。体外培养传代能减低IFN-γ作用后的抗原上调幅度。胎儿骨髓M
- 陈晓路陈苹贾竹青刘羿男马康涛张永珍周春燕
- 关键词：骨髓细胞间质干细胞HLA抗原干扰素类
- TAp73调节肺腺癌细胞的血管生成能力依赖P53状态被引量：4
- 2017年
- TAp73是P53家族的一员,能够调节肿瘤的生成、侵袭和转移。但是,TAp73调节肿瘤血管生成的作用备受争议。本研究将外源TAp73转染至P53基因表达状态不同的两株肺腺癌细胞系H1299(P53-null)和A549(wt P53)中,观察TAp73对肿瘤血管生成的作用并探讨与P53基因的关系。首先,使用RT-PCR和Western印迹验证转染效率。细胞划痕实验表明,TAp73在A549细胞中促进细胞迁移,而在H1299细胞中抑制细胞迁移。体外HUVEC血管形成结果表明,TAp73在A549细胞中促进细胞血管形成,而在H1299细胞中抑制细胞血管形成。同时,血管生成抑制蛋白1(VASH1)的表达水平,也分别升高或降低。本文研究结果表明,TAp73对肺腺癌细胞血管生成的作用依赖于P53基因的状态:在野生型P53基因存在时,TAp73促进血管生成,而在缺失P53基因的情况下,TAp73抑制血管生成。本研究对于TAp73作为肿瘤的潜在治疗靶点具有重要意义。
- 吴蒙张志华张志林汤建华陈苹贾竹青王卫平周春燕
- 关键词：P53肺腺癌血管生成
- 心肌分化过程中经典Wnt信号促进Isl1表达被引量：1
- 2015年
- ISL1是第二生心区的分子标志,在心血管发育中发挥重要作用.在心脏发育过程中,Isl1的表达具有鲜明的时空特异性.本研究利用P19CL6畸胎瘤干细胞作为心肌分化模型,探讨了Isl1在心肌诱导分化过程中的时间特异性表达及经典Wnt信号通路对其的调控.研究发现,Isl1在心肌分化早期高表达,于诱导第4 d到达高峰,随后快速下调.其表达趋势与经典Wnt通路的激活模式具有时间上的同步性.通过加入Wnt3a蛋白及Li Cl激活经典Wnt通路,能够促进Isl1基因的表达,而Wnt通路抑制分子Frizzled-4/Fc和DKK1能够下调Isl1表达.β-catenin过表达及RNAi实验也获得相似的结果.染色质免疫共沉淀实验证实,Wnt通路效应分子LEF1,在细胞分化第4 d与其在Isl1基因启动子上游-2 300 bp处的结合增强,因而促进了Isl1基因的表达.本研究表明,经典Wnt信号能够通过LEF1/β-catenin与Isl1启动子特异结合,调控Isl1基因在心肌早期分化阶段的表达.
- 李彦明鲁华菲李涛陈苹马康涛周春燕贾竹青
- 关键词：心肌分化
- 氧化还原因子1促进乳鼠心肌成纤维细胞增殖被引量：1
- 2009年
- 目的:研究氧化还原因子1(redox factor 1,REF1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其可能的机制。方法:为证实REF1在乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用,构建重组Ref1野生型和突变型的腺病毒载体,感染乳鼠心肌成纤维细胞。通过RT-PCR和Western印迹检测Ref1以及与胶原合成相关的基因表达的改变,通过免疫荧光检测REF1核转位,利用MTT和流式细胞仪分析细胞增殖和细胞周期,用电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测REF1对转录因子活化蛋白1(activator protein 1,AP1)的DNA结合能力的影响。利用含25 mmol/L的葡萄糖培养基模拟高糖环境,观察对乳鼠心肌成纤维细胞增殖及REF1表达与活性的影响。结果:MTT比色法显示,感染野生型Ref1重组腺病毒的细胞在490 nm处的光密度值明显高于对照病毒组(0.671±0.044vs0.364±0.007,n=6,P<0.01)。流式细胞仪对细胞周期的分析表明,野生型Ref1能明显增加S期细胞的百分率(16.8%±0.62%vs9.04%±0.43%,n=3,P<0.05)。RT-PCR检测发现,野生型Ref1促进细胞Ⅰ型胶原(collagen I,ColⅠ)和Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)mRNA表达增多,但突变型Ref1对细胞的增殖和胶原的合成均没有明显影响。EMSA实验结果显示,感染野生型Ref1重组腺病毒的细胞AP1的DNA结合能力增强。高糖培养基培养乳鼠心肌成纤维细胞同样能增强AP1的DNA结合能力。高糖培养虽然对Ref1的表达水平没有影响,但增强了细胞中REF1的核转位,促进了细胞的增殖。结论:REF1促进乳鼠心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,其机制可能是通过上调AP1的DNA结合能力。
- 耿燕李涛胡晓青张晨光陈苹马康涛周春燕
- 关键词：成纤维细胞细胞增殖胶原
- 五指山小型猪单个核细胞表面α Gal抗原表达差异的分析
- 2010年
- 利用猪的器官为挽救脏器终末衰竭病人而进行的异种移植是有效救治病人的途径之一.由于猪细胞表面存在的α1,3半乳糖会引起超急性免疫排斥反应,导致移植器官最终被移植受体排斥.除人类和旧大陆猴外,所有哺乳动物细胞表面都有αGal半乳糖表达,但个体间表达量存在显著差异.为研究近交系五指山小型猪细胞表面α1,3半乳糖表达的个体差异,本实验利用FITC-isolectin进行荧光标记,通过流式细胞术以及激光共聚焦分析,对14例5月龄猪样本外周血单个核细胞表面的α1,3半乳糖水平进行检测.利用猪肾上皮PK15细胞确定FITC-isolectin标记的最适浓度为25ng/μl(细胞标记效率大于85%).结果显示,14头猪外周血单个核细胞表面α1,3半乳糖的表达差异范围在1.25～2.09倍之间,远低于普通非近交系猪的个体差异.本研究为利用近交系五指山小型猪作为异种器官移植的研究材料提供了基础数据.
- 陈苹刘羿男王卫平周春燕马康涛
- 关键词：异种抗原五指山小型猪
