陈娟
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备被引量：1
- 2007年
- 目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20d死亡;3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×102IU、1.90×104IU、1.91×104IU。结论牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。
- 张爱民陈建泉刘思国沙红英徐旭俊吴友兵陈娟成国祥
- 关键词：奶山羊乳腺表达
- 活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响
- 2008年
- 采用活体穿刺技术(ovum pick up,OPU),分别间隔3/4(1周2次)、5、7、10、14 d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)制备克隆牛胚胎,重构胚体内培养7 d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示:①穿刺采集所有直径超过3mm的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5 d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7 d后进入晚期凋亡阶段,第7～10 d又起始1个新的卵泡波,第14 d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3/4 d(1周2次)为23.1%,间隔5 d组为15.0%,间隔7 d组为10.9%,间隔10 d组为4.9%,间隔14 d组为29.0%。结果显示:间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异,并对卵母细胞质量具有显著的影响。
- 王敬军田海滨丁利军陈娟徐旭俊沙红英陈建泉成国祥
- 关键词：奶牛活体采卵体细胞核移植
- 幼龄小鼠卵泡的超数及卵母细胞同步成熟的研究被引量：1
- 2005年
- 人工合成的雌性激素己烯雌酚可以促进出生18～20日龄左右的小鼠大量卵泡同步发育(有腔卵泡),每只小鼠可获得300枚左右的未成熟卵母细胞,并在体外成熟培养16h后,90%以上的卵母细胞排放第一极体,体外受精后2细胞的分裂率达到50%～65%,受精卵经体内培养后,发育到囊胚的比例达到50%以上。以上结果表明,幼龄小鼠卵巢卵母细胞能在外源的雌性激素作用下大量同步发育,并能在体外成熟、受精与发育至囊胚期胚胎。该研究结果不仅为深入探讨哺乳动物卵母细胞发育及成熟机制奠定基础,更重要的是为大家畜提供了一个重要的卵母细胞的来源途径。
- 沙红英沈晓晖陈娟刘思国陈建泉张爱民成国祥
- 关键词：卵泡卵母细胞颗粒细胞己烯雌酚体外成熟
- 山羊MII期卵母细胞胞质支持异种间克隆胚的着床前发育(英文)
- 2008年
- 研究去核山羊(Capra hircus)体内成熟的M II期卵母细胞与异种成年的哺乳动物(包括山羊、波尔山羊、牛、塔尔羊、熊猫)及人的成纤维细胞融合形成的体细胞核移植胚胎着床前的发育能力。结果显示这些异种体细胞核移植重构胚可以完成着床前发育,并形成囊胚。种内体细胞核移植胚的融合率和囊胚发育率分别为78.67%(557/708)和56.29%(264/469);亚种间或种间体细胞核移植胚的融合率和囊胚发育率分别为:波尔山羊78.18%(541/692)、33.90%(40/118),牛70.53%(146/207)、22.52%(25/111),塔尔羊53.51%(61/114)、5.26%(3/570),熊猫79.82%(1159/1452)、8.35%(75/898),人68.76%(317/461)、5.41%(16/296)。由此结果得出以下结论:(1)山羊M II期卵母细胞胞质与供核细胞之间的亲缘性不影响两者的融合率;(2)山羊M II期卵母细胞的胞质能支持异种间体细胞核移植胚的着床前发育;(3)亲缘关系近的种间核移植胚的囊胚发育率高于亲缘关系远的种间核移植胚的。
- 徐旭俊刘国辉陈建泉陈娟沙红英吴友兵张爱民成国祥
- 关键词：山羊胞质
- 奶牛卵泡超数同步发育及其卵母细胞的发育潜能
- 2008年
- 目的建立促奶牛卵泡超数同步发育的方法,并利用体细胞核移植和分子技术评价来自这些卵泡的卵母细胞发育潜能。方法用E2-P4对淘汰的高产奶牛进行联合处理后,分别对其实施不同组合的外源促性腺激素处理[FSH12h组,FSH48h组,FSH48h-LH6h组(简称LH6h组),FSH48h-LH26h组(简称LH26h组)]以促进其卵泡超数同步发育;然后从卵泡中回收COCs进行体外成熟,排放第一极体的卵供作优质种牛的体细胞核转移(nucleartransfer,NT)受体,以评价卵的发育潜能。结果E2-P4能成功地诱导奶牛卵巢中产生一个新的卵泡起始波,并能保证卵泡在外源促性腺激素作用下实现超数同步发育;上述四组不同组合外源促性腺激素处理的卵母细胞衍生的NT重构胚经体内培养7d后,后3组的囊胚发育率显著高于FSH12h组和对照组(P<0.01);将这些克隆囊胚移植同步发情的受体牛子宫后,仅LH26h组的卵所获得的克隆胚能实现全程发育(直至克隆小牛出生)。经RT-PCR分析颗粒细胞中FSHr、LHr和连接蛋白43(Connexin43,Cx43)等mRNA含量变化,以及Western印迹分析其Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化,证实该组卵巢提供的同步发育卵泡为早期闭锁卵泡。结论E2-P4-FSH48h-LH26h组合处理可人为调控牛卵泡的同步发育;处于早期闭锁状态卵泡的卵母细胞具备较高的发育潜能。
- 陈娟沙红英田海滨丁利军黄志军陈建泉葛来香徐旭俊吴友兵成国祥
- 关键词：奶牛
- 继代核移植能成倍提高来自奶山羊卵胞质体的异种间核移植重构胚的发育率(英文)
- 2007年
- 为了提高异种间核移植重构胚的发育率,本研究以体内排放的奶山羊成熟卵为供胞质的受体细胞,以人、兔、波尔山羊等的异种或亚种体细胞的原代核移植(Primary Somatic Cell Nuclear Transfer,PSCNT)重构早胚(8-16细胞期)的卵裂球作供核体,观察经亚种或异种卵胞质体短期"修饰"的核再移植产生的继代(Secondary SCNT,SSCNT)重构胚的着床前发育潜能。结果:人、兔、波尔山羊的继代桑椹/囊胚发育率均显著地高于其PSCNT胚胎(人,14.81%VS.7.79%;兔,23.53%VS.12.50%;波尔羊,55.35%VS.24.53%);这些早胚的各阶段发育时程仍遵循供核体动物正常受精卵的发育时程。结果启示:奶山羊成熟卵胞质对异种体细胞核亦具一定的去分化能力,能支持重构胚发育到囊胚;异种重构胚的发育特征是由供体核所决定的;继代核移植几乎能够成倍提高异种间重构胚的着床前发育率,提示核的去分化完全是在母型信息主导的调控之下完成的,而进一步发育的时序似乎是由核决定的;成倍延长在含母型信息主导调控环境中的时间能成倍提高SCNT重构胚的着床前发育率。
- 张爱民陈建泉沙红英陈娟徐旭俊吴友兵葛来香胡大为成国祥
- 关键词：奶山羊卵母细胞异种核移植
