陈东华
- 作品数：10 被引量：56H指数：5
- 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响被引量：9
- 2007年
- 以精子存活率和精子密度作为判据,研究了低温(4℃)条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测,六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示,六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差,保存2d后精子即全部死亡,而两种无钙离子人工海水的保存效果较好,其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳,其保存6d后的精子存活率达92.19%,精子密度亦保持较高水平;故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液,研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示,不同精子密度的保存效果差异显著,其中以106～107个/mL的保存密度效果最好,在保存2d后精子存活率仍保持在95%以上;在7～10的范围内保存效果较好,保存15d后精子存活率均在90%以上;在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中,渗透压在750～850mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好,该条件下保存15d后精子存活率仍在75%以上.以上结果证实,中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为:精子密度为106～107个/mL,渗透压范围为750～850mOsmol/kg H2O,pH值为pH7～10.
- 陈东华周忠良范丽君曲迪赵云龙王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子渗透压精子存活率精子密度
- HgCl_2与CdCl_2对河蟹精子DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测研究被引量：7
- 2007年
- 采用单细胞凝胶电泳技术,研究了HgCl2和CdCl2对河蟹(Eriocheir sinensis)精子DNA损伤的影响.HgCl2和CdCl2各设置6个相同的浓度梯度,分别为0mmol/L,0.01mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,1mmol/L,5mmol/L,处理温度为37℃(水浴),处理时间为1h;SCGE的检测指标为DNA拖尾长度和DNA损伤率.结果表明,对照组DNA未受损伤,在电场中核DNA几乎不泳动,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾现象;各处理组精子DNA均不同程度受损,电泳染色后均呈现彗星状荧光团,且随着HgCl2和CdCl2浓度的升高,河蟹精子DNA迁移距离和损伤率亦随之增加,DNA损伤程度与其浓度之间存在明显的"剂量-效应"关系.此外,本实验亦证实SCGE可用于河蟹精子DNA损伤的检测.
- 范丽君周忠良陈东华赵云龙孙菊香王群
- 关键词：河蟹单细胞凝胶电泳氯化汞氯化镉精子DNA
- 保存液中Ca^(2+)、Mg^(2+)、K^+对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子体外保存存活率的影响被引量：4
- 2007年
- 提要以伊红染色法检测样品精子存活率为依据,研究了4℃下5种保存液及Ca2+、Mg2+离子对中华绒螯蟹精子体外保存效果的影响。5种保存液分别为人工海水(ASW)、2倍钙离子人工海水(2×Ca2+-ASW)、无镁离子人工海水(Mg2+-FASW)、无钾离子人工海水(K+-FASW)、无钙离子人工海水(Ca2+-FASW),经4天保存后,各保存液中精子样品的存活率和精子密度均出现明显差异,K+-FASW、ASW及2×Ca2+-ASW三种保存液中的精子因发生顶体反应而大量死亡,而Mg2+-FASW、Ca2+-FASW的保存效果较好。在此基础上,进一步探讨了不同Mg2+和Ca2+浓度对精子存活率的影响,结果发现,经24h保存后各实验组精子存活率均随着两种离子浓度的增加而明显下降。上述结果表明:K+-FASW、ASW及2×Ca2+-ASW不适合精子保存,而Mg2+-FASW和Ca2+-FASW均可作为该蟹精子的保存液;Ca2+因可引起精子顶体反应而造成保存液中精子的大量死亡,其浓度与存活率呈明显的负相关;无K+的保存液中,Ca2+、Mg2+的存在与否对精子的保存效果起关键作用;无Mg2+人工海水之所以具有较好的保存效果,可能与Mg2+的缺乏而导致Ca2+逆浓度差转运受阻,避免了因Ca2+进入而诱发顶体反应有关。
- 陈东华李艳东贾林芝厉小波王立人孙菊香王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子保存液MG^2+K^+
- 伊红、PI染色法检测中华绒螯蟹活精子率
- 以伊红和 PI 两种染色法,结合光学显微镜和流式细胞仪对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子的存活率进行评价研究。将新鲜精子和60℃水浴处理致死精子以不同比例混合,配成含有死精子比例为0%、20%、40...
- 孙菊香范丽君贾林芝厉小波陈东华曲迪王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子活力碘化丙啶流式细胞仪
- 中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子低温保存的研究
- 1、保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响
在低温/(4℃/)下对中华绒螯蟹精子进行体外保存研究，探讨了六种保存液对精子体外保存中存活率的影响。以伊红染色法检测样品活精子率，并结合保...
- 陈东华
- 关键词：中华绒鳌蟹精子精子密度冷冻保护剂单细胞凝胶电泳雄性生殖系统
- 文献传递
- 利用不同保存液长期保存中华绒螯蟹精子的质量检测
- 测定中华绒螯蟹贮精囊内的精于在不同培养液下存活时间的长短,建立一套简单的体外观察、保存精子的方法,并试图找到体外最能近似的模拟其体内生存环境的保存液。
- 陈东华王群
- 文献传递
- 伊红、PI染色法检测中华绒螯蟹活精子率被引量：10
- 2007年
- 以伊红和PI两种染色法,结合光学显微镜和流式细胞仪对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的存活率进行评价研究。将新鲜精子和60℃水浴处理致死精子以不同比例混合,配成含有死精子比例为0%、20%、40%、60%、80%、100%的6个浓度梯度,将其作为"理论死亡率",分别用上述两种染色法进行检测。结果表明:伊红能有效区分死、活精子,其实测精子死亡率与"理论死亡率"之间具有明显的相关性,相关系数为R=0.98(P<0.01);经PI染色后通过流式细胞仪分析发现,其实测精子死亡率与"理论死亡率"同样具有极好的相关性,相关系数为R=0.99(P<0.01)。对伊红和PI两种染色法进行相关性比较分析,认为PI染色流式细胞仪检测法在检测中华绒螯蟹精子活力方面更具灵敏性,结果更可靠。
- 孙菊香范丽君贾林芝厉小波陈东华曲迪王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子活力碘化丙啶流式细胞仪
- 红螯螯虾雄性生殖系统的生化组成及精子代谢被引量：11
- 2005年
- 通过对红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)雄性生殖系统各组织的生化测定和乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、延胡索酸还原酶(FR)的活性测定发现,红螯螯虾精荚(含精子)中的糖类和蛋白质含量丰富,分别为18.264和12.846 mg/g(FW),总脂含量相对较低,仅为1.613 mg/g(FW);精子(含初级精荚壁)亦以糖类和蛋白质含量较高,分别达到5.227和8.475 mg/g(FW),总脂含量因过低而未能测出,但精子的上述物质含量均显著低于精荚。酶活性测定发现,LDH酶活性以精巢、输精管和射精管较高,其中又以前输精管最高,为1 426.258 U/(g protein),可能与其功能相关;精子和精荚LDH活性极显著低于输精管,含量分别为87.375和36.215 U/(g protein),两者间差异显著;FR活性在精荚和精子中较高,两者分别达到19.945和15.732 U/(mg protein),显著高于生殖系统其他组织器官,但均未检测到SDH酶活性,故其SDH/FR的比值趋向于0。而生化物质的组织化学以及酶组化定位的结果进一步证实了上述结果。此外,LDH同工酶酶谱结果证实,精荚仅含有一条厌氧型LDHA编码亚基占优势的同工酶谱带。所有实验结果表明,红螯螯虾精子代谢的方式以厌氧型为主,其代谢底物主要为糖类,为厌氧型糖酵解,其代谢底物由次级精荚壁提供。
- 丁银娣王群李恺陈东华
- 关键词：红螯螯虾雄性生殖系统生化成分同工酶
- 中华绒螯蟹精子线粒体的检测被引量：2
- 2007年
- 以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肌肉、鳃和精巢为对照,从线粒体标志酶SDH活性、线粒体特异性荧光探针(Rh123)以及线粒体16S rDNA PCR扩增3个途径,探讨了该蟹精子线粒体的存在状况。研究发现,肌肉和鳃SDH酶活性较高,精巢SDH酶活性显著低于肌肉和鳃,而精子SDH酶活性则无法检测到。使用Rh123检测发现,精巢中有较强的荧光,而精子中则无法观察到。通过GenBank中的中华绒螯蟹线粒体16S rDNA序列设计引物,利用PCR扩增方法,以beta-actin做内参,检测了中华绒螯蟹肌肉、鳃、精巢和精子中线粒体16S rDNA扩增情况,发现各组织或细胞beta-actin扩增片段大小、条带宽度和亮度基本一致,表明各模板DNA量基本一致;而在同一DNA浓度下,16S rDNA的扩增片段长度虽一致,但其产物量存在明显差异,精子16S rDNA产物量显著低于其他3种组织,其条带宽度和亮度很弱;16S rD-NA扩增产物经测序分析及比对证明与已有序列完全吻合。上述结果表明,中华绒螯蟹精子中存在线粒体,但其线粒体的数量极显著低于精巢和其他组织,这也是利用灵敏度较低的SDH酶活性和Rh123探针以及常规的组织学和超微结构观察法难以检测到其精子线粒体的原因。[中国水产科学,2007,14(1):139-143]
- 范丽君周忠良陈东华赵云龙王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子线粒体SDH
- 冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响被引量：17
- 2008年
- 本文以甘油、二甲亚砜(DMSO)为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子,液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为107个/mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测精子DNA损伤。实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂(每种保护剂的体积百分比分别为5%、10%、12.5%、15%)和两种保护剂组合(两种保护剂在同一实验组中的体积百分比含量均为5%、10%)。结果显示,12.5%甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62.60%。在此基础上,以10%甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min 5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预冷时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱。
- 陈东华李艳东贾林芝厉小波王立人曲迪王群
- 关键词：河蟹精子冷冻保存冷冻保护剂二甲亚砜单细胞凝胶电泳
