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闫庆慧
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1
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供职机构:
哈尔滨医科大学附属第一医院
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发文基金:
哈尔滨医科大学附属第一医院科研基金
黑龙江省卫生厅科研项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
李丹
哈尔滨医科大学附属第一医院
赵秀梅
哈尔滨医科大学附属第一医院
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哈尔滨医科大学附属第一医院
郑建秋
哈尔滨医科大学附属第一医院
刘建巨
哈尔滨医科大学附属第一医院
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2011
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真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的构建及其在体内外细胞中的表达
2011年
目的构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)并了解其在体内外真核细胞中的表达。方法将带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况。结果我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽及HA抗原在内的一段cDNA片段,并成功地与真核表达载体PcDNA3.1(+)连接,经测序表明,其中含有的带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽的序列与Genebank上报道的序列完全一致。即我们成功构建了真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)。之后,在转染了该质粒的体外真核293T细胞的上清液中及骨骼肌注射了该质粒的鼠血液中,利用Western-blot法检测到了目的基因的蛋白质。结论带有白蛋白信号肽的真核表达质粒PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)增强了蛋白分泌表达能力,这为进一步应用该质粒治疗全身新生血管类病奠定了一定基础.
刘建巨
关继奎
王琳
赵秀梅
郑建秋
李丹
闫庆慧
关键词:
293T细胞
真核表达
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