郭威
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 供职机构：南开大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌MCF-7细胞系转移亚克隆的筛选及其生物学特性研究被引量：13
- 2006年
- 目的 将乳腺癌MCF-7细胞接种SCID鼠，筛选具有高转移潜能的转移亚克隆，阐明其生物学特性。方法 接种培养的乳腺癌MCF-7细胞，取接种的SCID鼠肺组织做原代细胞培养，将获得的细胞命名为LM-MCF-7对该细胞进行生物学鉴定，研究其形态学、生长、细胞周期、染色体和乳腺癌特异性标志物等特征，与其亲本MCF-7细胞进行比较，检测二者肿瘤转移相关蛋白表达的差异。将LM-MCF-7细胞回接SCID鼠，观察其成瘤和转移的能力。结果 在接种MCF-7细胞第68天时处死SCID鼠，经肺组织原代细胞培养，成功获得了MCF-7细胞的转移亚克隆LM-MCF-7。在形态学上LM-MCF-7细胞为典型的上皮样多角形；应用流式细胞仪检测分析显示，G0／G1期细胞为53．40％，s期细胞为17．10％，G2＋M期细胞为23．20％；细胞群体平均倍增时间为20h±14h；染色体分析显示为人源性异倍体，其数量为16～123条；免疫细胞化学检测显示，乳腺癌特异性标志物CA15-3在LM-MCF-7细胞中呈阳性反应；Western印迹检测结果显示，与MCF-7细胞相比，LM-MCF-7细胞中肿瘤转移抑制基因nm23和细胞周期相关蛋白p27的表达水平明显下调，而与细胞运动有关的肌球蛋白轻链激酶（MLCK）及抗细胞凋亡蛋白bcl．2和survivin的表达水平明显上调。将该细胞株接种SCID小鼠，与亲本MCF-7细胞相比，成瘤时间由7．4d±1．3d缩短至5．0d±0．0d，在肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏等脏器有广泛转移。结论 LM-MCF-7细胞株是乳腺癌MCFG细胞的转移亚克隆，具有高转移潜能。
- 叶丽虹吴莲英郭威马宏涛张晓东
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞系
- 不同转移能力乳腺癌细胞株的差异表达蛋白研究被引量：3
- 2006年
- 背景与目的:肿瘤转移相关蛋白在肿瘤细胞转移过程中具有重要作用,本研究在建立高转移潜能乳腺癌细胞株LM-MCF-7的基础上,筛选乳腺癌细胞转移相关蛋白并探讨其功能。方法:应用蛋白质组学和免疫印迹等方法比较和筛选来源相同但具有不同转移能力的乳腺癌细胞株(MCF-7/LM-MCF-7)的蛋白质表达差异。将克隆有存活蛋白(survivin)的真核表达载体pcDNA3-Sur转染至MCF-7细胞,通过“伤口愈合”实验检测存活蛋白对乳腺癌细胞迁移的影响。结果:应用蛋白质组学技术获得8个有意义的蛋白质,分别有参与细胞骨架构成、物质代谢、细胞凋亡、蛋白折叠和蛋白质相互作用等功能。应用免疫印迹方法发现,在MCF-7细胞中nm23、p27表达水平较高,在LM-MCF-7中存活蛋白、肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)和Bcl-2表达水平较高。“伤口愈合”实验显示,存活蛋白过表达可明显增强MCF-7细胞的迁移能力。结论:不同转移能力的乳腺癌细胞株中存在与乳腺癌转移相关的蛋白质,存活蛋白与乳腺癌转移有密切的关系。
- 叶丽虹尤嘉琮郭威徐少峰吴莲英齐众张晓东
- 关键词：肿瘤转移蛋白质组学存活蛋白
- 花生四烯酸诱导肌球蛋白磷酸化被抑制的平滑肌细胞迁移的信号传导途径
- 2006年
- 在应用肌球蛋白轻链激酶特异抑制剂ML-7抑制了肌球蛋白轻链磷酸化后,花生四烯酸(arachidonicacid,AA)仍可诱导兔血管平滑肌细胞(SM3)发生迁移.为了进一步阐明其信号传导途径,应用多种信号抑制剂,采用免疫印迹、Boyden小室和提取细胞膜蛋白等实验方法,对上述迁移作用的信号传导途径进行了深入的研究.结果显示,PTX(Gi蛋白抑制剂)、U73122(PLC抑制剂)、staurosporine(PKC抑制剂)、PD98059(ERK1/2抑制剂)和SB203580(p38抑制剂)分别可拮抗上述AA诱导的SM3细胞迁移作用,而SP600125(JNK抑制剂)的作用较弱.免疫印迹结果显示,AA可提高SM3细胞中PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK信号的磷酸化水平,呈时间依赖性,PTX或U73122可抑制上述作用;staurosporine可抑制由AA引起的ERK1/2和JNK的磷酸化水平增强,但对p38的磷酸化水平无影响.还发现AA可促进PLCβ2的细胞膜移位,PTX可抑制其作用.上述结果表明,当肌球蛋白轻链的磷酸化被抑制后,AA可通过Gi蛋白的活化促进PLCβ2向细胞膜移位,进而通过激活PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK等信号转导途径而诱导SM3细胞发生迁移.
- 吴晶辉叶婷婷王洪辉周晓雷米达吴莲英王长晔郭威张伟英张晓东叶丽虹
- 关键词：花生四烯酸平滑肌细胞细胞迁移信号传导途径
- 平滑肌细胞迁移的肌球蛋白轻链非磷酸化途径被引量：5
- 2005年
- 为了阐明平滑肌细胞迁移存在肌球蛋白轻链非磷酸化调节途径,研究花生四烯酸(arachidonicacid,AA)对肌球蛋白轻链非磷酸化状态下平滑肌细胞迁移的影响及其相关的信号传导途径.经Boyden小室跨膜迁移实验发现,AA对培养的兔血管平滑肌SM3细胞具有明显的诱导迁移作用.然而,当预先用10μmolL肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)特异性抑制剂ML7作用SM3细胞后,发现AA对SM3细胞仍然具有明显的诱导迁移作用,并呈剂量依赖性,这种诱导作用可被细胞外信号调节激酶12(ERK12)的特异性抑制剂PD98059或磷脂酶C(PLC)的特异性抑制剂U73122所拮抗.此外,Ⅱ型肌球蛋白抑制剂blebbistatin(BLB)可部分抑制“非磷酸化”状态下AA的诱导迁移作用.经Western印迹检测显示,10μmolLML7可完全抑制SM3细胞中20kD肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化,并且加入AA后MLC20仍为非磷酸化状态.应用免疫荧光染色法观察肌动蛋白在SM3细胞中分布的变化,发现在AA作用下肌动蛋白呈细胞边缘聚集现象,有伪足形成,细胞形态表现为迁移状态.预先用ML7作用后再加入AA,肌动蛋白的分布与上述结果相同.研究结果初步表明,在平滑肌细胞迁移的作用途径中,在MLC磷酸化调节途径受到抑制时,AA可诱导MLC非磷酸化的平滑肌细胞发生迁移,其分子机理可能与ERK12和PLC信号传导途径有关,非磷酸化的肌球蛋白直接参与了该迁移过程.
- 叶丽虹郭威赵铁军张伟英叶婷婷吴晶辉张晓东
- 关键词：花生四烯酸平滑肌细胞肌球蛋白轻链激酶迁移
