郭仕英
- 作品数：13 被引量：22H指数：3
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金江苏省“135”重点学科科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带Egr-1基因调控序列的TK基因的腺病毒载体的构建被引量：5
- 2006年
- 目的:构建以GFP做标志基因的放射敏感基因Egr-1调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpssimplexvirusthymidinekinase,TK)的腺病毒载体。方法:以PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板扩增Egr-1,插入到pAdTrack的XbaI和XhoI位点,构建重组质粒pAdTrack/Egr-1;与pET酶切获得TKcDNA相连,构成pAdTrack/Egr-1-TK;用PmeI酶切后与pAdEasy-1混合,应用细菌内同源重组法获得重组表达质粒pAdEgr-1-TK。结果:重组表达质粒pAdEgr-1-TK的酶切鉴定符合预期结果,感染肿瘤细胞可见绿色荧光表达。结论:通过细菌内同源重组成功构建含GFP做标志基因的pAdEgr-1-TK重组表达质粒,为研究Egr-1调控自杀基因及对肿瘤细胞进行灭活打下了基础。
- 刘金龙郭仕英刘训良李朝军杜青郭治源夏建国
- 关键词：腺病毒载体EGR-1
- 肝癌细胞BEL-7402中STAT3的组成性活性及对细胞迁移影响的研究被引量：1
- 2005年
- 信号转导和转录激活因子(STATs,Signaltransducersandactivatorsoftranscription)是JAK-STATs信号途径中一类重要的DNA结合蛋白,其异常表达和活化与多种肿瘤相关。本文研究发现,在肝癌细胞BEL-7402中STAT3具有组成性活性,能够持续地磷酸化,并转移入细胞核中行使功能。同时,我们成功构建了绿色荧光蛋白(GFP)标记的STAT3野生型(WT)/突变体(CYF)融合质粒,将其转入细胞,以荧光素酶报告系统验证了融合蛋白的活性;通过测定绿色荧光为标记的细胞迁移距离的方法证实,过表达野生型STAT3对肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移有促进作用,而突变体STAT3能够降低癌细胞的迁移。
- 杨润琳潘飞燕袁俊郭仕英张宏霞赵东红李朝军
- 关键词：肝癌细胞BEL-7402STAT3细胞迁移转录激活因子
- 人TIMP1基因腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞BEL-7402中的实验研究
- 腺病毒载体/(Adenoviral vector/)是目前重要的基因转移载体之一。作为真核基因表达载体，腺病毒载体可装载长达7.5kb的外源DNA，复制效率高，制备高滴度病毒粒子较简便；腺病毒具有广泛的宿主系统，既能感染...
- 郭仕英
- 关键词：组织金属蛋白酶抑制因子肝癌细胞黏附MTT
- 文献传递
- 辐射调控自杀基因的腺病毒载体在胰腺癌细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 早期生长反应基因-1（Egrd）启动子可由电离辐射诱导，使得转导基因的表达可从时间与空间上进行调控，由此驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（TK）在胰腺癌细胞中高效表达，提高杀伤胰腺癌细胞的效率，本研究旨在观察辐射调控下的自杀基因的腺病毒载体在胰腺癌细胞中的表达。
- 刘金龙郭仕英刘训良杜青夏建国李朝军
- 关键词：胰腺癌细胞腺病毒载体自杀基因早期生长反应基因胸苷激酶基因单纯疱疹病毒
- 人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响被引量：5
- 2006年
- 目的构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响。方法采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE。经测序检测后,用PmeI酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组。经PacI酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒。利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度。用Western blot检测目的基因的表达。采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响。结果成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体。Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达。收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL。转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少。结论hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用。
- 周立华薛斌郭仕英史一欢温传俊李朝军
- 关键词：腺病毒载体同源重组细胞周期
- 由Egr-1调控TK基因灭活胰腺癌细胞的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:观察对放射敏感的早期生长反应基因-1(early growth response-1,Egr-l)启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,TK)基因是否对胰腺癌细胞的杀伤作用有增敏效应。方法:以细菌内同源重组法构建含TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK,转染人胰腺癌细胞株PC-3,60Co-γ射线照射后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析各不同照射剂量组TK基因的mRNA的表达。加入前药丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV),MTT法检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果:经60Co-γ射线照射后,与对照组胰腺癌细胞(0.86±0.11)相比,前药GCV可明显提高对转染pAdEgr-1-TK胰腺癌细胞的杀伤效率(0.08±0.03)(P<0.001)。结论:由Egr-l启动子调控的TK自杀基因在γ射线作用下可以显著提高杀伤胰腺癌细胞的能力。
- 刘金龙钱清刘训良郭治源杜青郭仕英李朝军
- 关键词：胰腺癌Γ射线基因治疗EGR-1启动子
- 辐射调控性TK基因载体在胃癌细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的利用放射敏感基因早期生长反应基因1(Egr-l)启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(TK),观察其在胃癌细胞中的表达。方法以细菌内同源重组法构建含TK基因的腺病毒载体pAdEgr-1-TK,转染人胃癌细胞株MGC-803,分别以0、5、7.5、10、15、20Gy剂量γ射线照射,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析,比较TK基因的mRNA表达。结果转染后的胃癌细胞株经射线照射后其TK mRNA的表达较未照射组(56.4±1.46)%有明显提高,以10Gy最为显著(132.3±2.18)%,(P<0.01)。结论经γ射线照射后,射线激活Egr-l启动子可引起TK基因在胃癌细胞中高效表达,为进一步研究胃癌的放化疗提供了依据。
- 刘金龙刘训良郭仕英钱清杜青陈国玉
- 关键词：胃癌Γ射线自杀基因
- TIMP-1对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制被引量：2
- 2003年
- 构建含人组织金属蛋白酶抑制物TIMP1基因的表达载体 ,以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系1 BEL 740 2 ,研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响 .本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA ,通过RT PCR扩增获得TIMP1基因 ,并克隆到pcDNA6表达载体中 ,经酶切鉴定、序列测定结果正确后 ,转染人肝癌细胞系BEL 740 2 .采用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )、细胞生长曲线等方法 ,经数据统计分析发现 :TIMP1过表达能够抑制肝癌细胞BEL 740
- 郭仕英袁俊沈曦洪建军温传俊赵东红张锡然李朝军
- 关键词：肝癌MTT
- 辐射诱导性自杀基因对胰腺癌体内治疗效果的实验观察被引量：2
- 2008年
- 目的将PC-3胰腺癌细胞种植于balb/c裸小鼠皮下,建立移植瘤模型,观察pAdEgr-1-TK注入后在射线和前药GCV下对胰腺癌的治疗作用。方法PC-3胰腺癌细胞以1×107混以0.1 ml磷酸盐缓冲液(PBS)皮下接种于balb/c裸鼠皮下,每组6只,共4组24只,待肿瘤长至约0.6 cm时,分为4组,以PC-3组作为对照,PC-3/pAdE组注射同量混以PBS的pAdEgr-1,PC-3/pAdET(不放射)和PC-3/pAdET(放射)组将纯化腺病毒pAdEgr-1-TK以1×109 pfu/ml、0.1 ml/只直接注射到治疗组肿瘤体内,1次/d,连续3 d,同时,腹腔内每日注射GCV(25 mg/kg),连续14 d,即分两次间隔48 h行剂量为10 Gy的60Co-γ射线照射,观察各组动物肿瘤生长情况,每3天测量肿瘤体积[(长径×短径2)/2],治疗结束后,处死裸鼠,取瘤体称重,并在光镜下观察肿瘤的病理结果变化。结果4组细胞接种后,balb/c裸小鼠均成瘤,成瘤潜伏期无差异,成瘤率为100%,治疗前(60Co-γ射线照射+GCV),四组动物瘤体大小无差异(P=0.824),治疗后,观察对照组肿瘤生长迅速,治疗组肿瘤生长明显减慢,体积和质量PC-3/pAdET(放射)组均明显小于其他3组(P=0.000)。结论成功建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,体内实验证实Egr-1基因启动子在射线作用下可驱动下游TK自杀基因表达而对胰腺癌起治疗作用。
- 刘金龙刘训良钱清杜青郭仕英李朝军苗毅
- 关键词：胰腺肿瘤基因治疗EGR-1启动子
- 氟尿嘧啶与高能聚焦超声刀的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用
- 2007年
- 目的探讨化疗和物理治疗的结合在人回盲肠癌裸鼠肿瘤治疗中的作用。方法人回盲肠癌细胞HCT-8接种到BALB/C雌性裸小鼠腹部皮下,按预期方案进行氟尿嘧啶+高能聚焦超声刀治疗。采用免疫组织化学SP法对瘤组织进行检测。结果成功建立荷瘤小鼠模型。治疗后肿瘤体积无显著变化,局部组织出现焦化,而对照组肿瘤增长明显,无任何外观变化;且治疗后瘤组织中突变型p53蛋白的阳性率有明显下降。结论化疗药物氟尿嘧啶与物理治疗高能聚焦超声刀的有效结合对人回盲肠癌裸鼠肿瘤的治疗有一定效果。
- 袁俊洪建军郭仕英李朝军殷咏梅束永前
- 关键词：P53氟尿嘧啶高能聚焦超声刀
