郑重
- 作品数：16 被引量：79H指数：5
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目黑龙江省留学归国人员基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 改良透射电镜方法观察小鼠ICSI胚胎核仁超微结构
- 2011年
- 小鼠植入前胚胎的发育过程中,核仁经历从简单到复杂、从致密结构到网状结构的变化。对核仁超微结构的观察有助于揭示早期胚胎发育过程中核仁结构的动态变化及其特定阶段的功能。但由于核仁结构微小,数目较少,并且在胚胎中只处于卵裂球细胞核的内部,难以定位,因而给核仁的超微结构观察带来很大的困难。本实验探索了透射电镜观察小鼠植入前胚胎核仁的方法:先用琼脂对小鼠胚胎进行预包埋,在经过常规的透射电镜样品制备流程后,将整个胚胎先切成半薄切片;经过甲苯胺蓝染色后,选取含核仁结构的切片进行重包埋;最后再对回收来的半薄切片进行超薄切片,醋酸铀染色后上电镜观察;最终成功获得小鼠胚胎植入前发育不同时期核仁清晰的透射电镜图像。
- 郑重胡丽丽文刚张宝东雷蕾
- 关键词：小鼠胚胎核仁透射电镜
- 孤雌胚胎干细胞的组织相容性与印迹状态被引量：1
- 2010年
- 从孤雌胚胎建立的孤雌胚胎干细胞(pESCs)具有与受精的胚胎干细胞(fESCs)相似的全能性和自我更新能力,因免除了胚胎的破坏,所以避免了一些法律和伦理的相关问题。pESCs也具有其特殊的性质,即与卵母细胞供者是组织相容的,因此更适合于细胞与组织的替代治疗。另外,由于pESCs的特殊印迹模式,也为研究基因组印迹的分子机制提供了一个有价值的体外模型系统。
- 薛媛单智焱郑重雷蕾
- 关键词：孤雌胚胎干细胞组织相容性基因组印迹
- 体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响被引量：21
- 2007年
- 体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.
- 刘忠华田江天郑重王振坤宋军尹智高力马海鹍孔庆然孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：体细胞核移植体外成熟胎牛血清
- 东北民猪体细胞核移植及绿色荧光蛋白转基因猪研究
- 刘忠华李玉田王洪斌宋军尹智田江天郑重王振坤孔庆然孙爽马海鲲高力范洪刚
- 该研究针对猪体细胞核移植的特殊性，为建立稳定的体细胞核移植猪的技术体系以及基于体细胞核移植的转基因猪技术体系，主要开展了如下的研究内容：卵母细胞体外成熟培养体系建立；东北民猪、大白猪和长白猪体细胞采集培养及冷冻保存；体细...
- 关键词：
- 关键词：克隆猪核移植
- 利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞被引量：3
- 2009年
- 目的利用亮甲酚蓝（BCB）染色提高猪体外胚胎培养体系的效率。方法对猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析。结果着色组（BCB＋）猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ（MⅡ）期的比率（91.6%）显著高于未着色组（BCB-）（64.0%）和对照组猪卵母细胞（77.5%）（P〈0.05）;BCB＋孤雌猪胚胎的囊胚率（34.9%）显著高于BCB-（9.5%）和对照组（23.1%）（P〈0.05）;BCB＋核移植猪胚胎的囊胚率（23.0%）显著高于BCB-（5.0%）和对照组（14.1%）（P〈0.05）。结论BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法。
- 田江天王振坤郑重孙爽徐萌刘忠华
- 关键词：卵母细胞核移植
- 小鼠克隆胚胎致密时卵裂球数目以及微绒毛分布研究
- 李超波王振东郑重胡丽丽钟淑琦雷蕾
- 小鼠核移植胚胎中rDNA活性和核仁变化的研究
- 目的：研究供体细胞的rDNA状态对核移植(NT)胚胎内rDNA活性以及rRNA合成和加工的影响。 方法：通过建立了B6D2F1品系小鼠的胚胎干细胞(embryonic stem cells，ESCs)、颗粒细胞(cum...
- 郑重
- 关键词：供体细胞核移植胚胎核仁蛋白基因差异表达
- 文献传递
- 猪骨髓间充质干细胞的分离培养及核移植后重构胚胎发育能力的研究被引量：5
- 2008年
- 不同类型的细胞核移植效率不同,原因之一可能是不同类型细胞核移植后进行重编程的潜力不同。本实验对猪骨髓间充质干细胞(porcine bone marrow mesenchymal stem cells,pMSCs)体外分离培养的方法进行了优化,对猪骨髓间充质干细胞的增殖及生长特性进行了观察分析,并以其作为供体细胞进行核移植,对此类型细胞进行重编程的潜力进行了评估。结果表明用密度梯度离心法分离猪骨髓间充质干细胞优于全骨髓贴壁法;猪骨髓间充质干细胞数目在培养第6天达到峰值,传代培养10h时,贴壁率达到78.50%;传代培养后第4天分裂指数最高,为24.00‰;以猪骨髓间充质干细胞(pMSCs)和猪胎儿成纤维细胞(PF)分别作为供核细胞构建核移植胚胎,其体外囊胚发育率分别为14.63%与15.07%(P>0.05),孤雌对照组囊胚发育率为30.91%(P<0.05);而三组囊胚细胞数分别为30.67±17.7、24.1±6.5和25.8±11.4(P>0.05)。实验表明,体外培养的猪骨髓间充质干细胞生长增殖旺盛,生物学性状稳定,并适合作为核移植供体细胞。
- 王振坤田江天李秋明武美玲孔庆然郑重于学武雷蕾刘忠华
- 关键词：核移植
- 小鼠孤雌胚胎干细胞的建立及其向运动神经元分化的初探被引量：4
- 2011年
- 文章采用小鼠的孤雌囊胚建立胚胎干细胞系,探究其向运动神经元分化的可能,为临床治疗以及研究基因组印记与神经分化的的关系提供理论基础。结果表明:卵母细胞孤雌激活率达到93.26%,成功建立了8个孤雌胚胎干细胞系,建系率达到23.53%。克隆表达多潜能标记Oct4及细胞表面标记SSEA-1,有高水平的碱性磷酸酶活性,在细胞第10代和第30代时核型分析检测显示为正常的40条染色体。体内、外均分化出三胚层来源的细胞。联合应用全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)及细胞外基质,小鼠孤雌胚胎干细胞可被诱导表达运动神经元的标志性标记HB9、Olig2。
- 王振东薛媛单智焱郑重李雪吴嫣爽孙瑞珍石健李明杰刘忠华雷蕾
- 关键词：孤雌胚胎干细胞印记基因运动神经元分化维甲酸音猬因子
- 孤雌胚胎干细胞的建立及印记基因表达的分析
- 单智焱薛媛王振东郑重雷蕾
