郑桂兰
- 作品数：18 被引量：91H指数：6
- 供职机构：清华大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金云南省省院省校合作项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程理学更多>>
- 黄柏酮微生物转化研究被引量：6
- 2007年
- 杨若林郑桂兰张荣庆
- 关键词：微生物转化底物特异性黄柏酶催化代谢过程甾体激素
- 简单节杆菌3-甾酮-△~1-脱氢酶基因的克隆表达及定点突变研究被引量：3
- 2017年
- 目的:将来源于简单节杆菌的3-甾酮-△~1-脱氢酶(3-ketosteroid-Delta(1)-dehydrogenase,KSDD)在大肠杆菌中进行表达,获得具有活性的脱氢酶;利用计算机预测KSDD的三级结构,并通过定点突变确定酶的关键位点以期优化脱氢酶的活性及性质。方法:克隆简单节杆菌编码KSDD的基因ksdd构建原核表达载体,以Escherichia coli BL21(DE3)为表达宿主构建重组菌并诱导表达,HPLC法检测重组酶催化4-AD脱氢的转化率;通过SWISS-MODEL同源建模分析KSDD结构,对预测的催化关键位点氨基酸残基进行定点突变并研究突变后重组酶的活性变化。结果:成功构建了表达脱氢酶KSDD的重组菌E.coli pET-22-ksdd,21℃下诱导表达后,重组酶对4-AD的转化率为27%;通过SWISS-MODEL同源建模预测出脱氢酶结构并对4个关键位点进行定点突变设计,获得突变子Y120R、Y320L、Y488F和G492Y。突变子Y120R和Y488F失活,证明其为酶的活性位点;突变子Y320L的转化率与野生型基本一致,但37℃反应条件下稳定性有所提高;突变子G492Y对4-AD的转化率是野生型的1.2倍,37℃条件下稳定性有所提高,是突变后氨基酸位点疏水性增加和周围静电作用改变所导致。结论:目前对简单节杆菌3-甾酮-△~1-脱氢酶结构分析及催化机理相关的研究较少,本研究验证了KSDD的活性位点,优化了酶的稳定性,为进一步对酶的性质进行定向改造打下了基础。
- 李婕余磊赵晓雅郑桂兰王洪钟
- 关键词：简单节杆菌同源建模定点突变
- N-脱氧核糖转移酶Ⅱ催化合成克拉屈滨及其定向进化被引量：1
- 2019年
- 目的:使用表达N-脱氧核糖转移酶Ⅱ (Nucleoside deoxyribose transferase, NDT)的大肠杆菌重组工程菌E.coli BL21/pET-NDT,作为催化剂,合成克拉屈滨(Cladribine)。同时构建高通量的酶活筛选体系,利用其改造NDT,以期提高克拉屈滨的合成效率。方法:首先用野生型NDT催化克拉屈滨的合成。接着以黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶联合作用来检测NDT酶活。最后构建NDT随机突变体库,并筛选出突变体。结果:在10%DMSO的体系中,野生型NDT催化2-氯腺嘌呤合成克拉屈滨的转化率达到93%。同时使用构建的筛选体系在突变体库中筛选到了酶活发生改变的突变体。结论:本研究使用NDT作为催化剂,成功地一步合成了克拉屈滨。同时本研究构建的高通量筛选方法成功应用于改造NDT的酶学性质,为拓展NDT合成核苷类似物的能力提供了一种新的方法。
- 李京美李骥璇余磊郑桂兰王洪钟
- 关键词：高通量筛选
- 一种酮类化合物及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种酮类化合物及其制备方法与应用。其目的是提供一种新的具有抗肿瘤活性的酮类化合物。本发明所提供的酮类化合物是式(I)化合物。其制备方法是黑曲霉(Aspergillus niger)转化梣酮，并自发酵液中提取式...
- 张荣庆谢莉萍杨若林贾铁留王洪钟郑桂兰
- 文献传递
- 微生物转化法生产睾酮的发酵工艺改进
- 2007年
- 原发酵条件中的底物浓度过低,致使发酵液中的产物浓度不高,就提高底物浓度后的其它发酵条件进行了调整,通过正交实验,获得了最佳的发酵培养基配方,最后通过50 L放大发酵获得了成功,发酵液中产物浓度可达3 619 mg/L。
- 郑桂兰陈小明王洪钟
- 关键词：微生物转化睾酮正交实验
- 无定形碳酸钙结合蛋白对鼠前成骨细胞MC3T3-E1碱性磷酸酶活性的影响被引量：1
- 2012年
- 以MC3T3-E1细胞系为实验材料,探讨了真核表达的重组蛋白rACCBP对成骨细胞的作用。结果表明:rACCBP对MC3T3-E1的分化具有抑制作用,用含有0.001 g/mL rACCBP的DMEM培养液,培养8 d后细胞的ALP活性仅为7.187 U/mg,远低于参照的11.917 U/mg;rACCBP削弱了dexamethane和ascorbic acid对MC3T3-E1的诱导作用。
- 万翔孙娟苏境坦梁晓张文权郑桂兰谢莉萍王洪钟张贵友杜晓东张荣庆
- 关键词：生物矿化MC3T3-E1碱性磷酸酶
- 自诱导系统在酶促合成2’-脱氧胞苷中的应用被引量：6
- 2014年
- 旨在高效合成2’-脱氧胞苷(d Cyd)。DCyd作为一类重要的药物中间体,能够用于合成吉西他滨(d Fd C)、扎西他滨(dd C)等多种抗病毒或抗肿瘤的药物。采用ZYM-Fe-5052自诱导培养基对含有N-脱氧核糖转移酶II(NDT)的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,所得完整菌体直接用于催化合成d Cyd。结果表明,自诱导系统不仅无需额外添加诱导剂,还能够达到较高的菌体密度,且与LB诱导系统所得菌体在合成d Cyd方面具有同样高效的催化活性。2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶3时,产物转化率可高达86.5%。合成d Cyd的最适反应条件为:2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶1.5,p H6.5的磷酸缓冲液,1 mg/m L的菌体量,终体系10 m L,30℃条件下反应1 h,产物转化率可达71.9%。此方法还可用于制备其他核苷类似物,具有广泛的适用性和应用前景。
- 王玺段胜林熊舒莉郑桂兰张贵友王洪钟
- 关键词：生物催化核苷类似物
- 核桃油总黄酮含量的测定被引量：36
- 2002年
- 以芦丁为对照品 ,利用分光光度法测定了核桃油中的总黄酮含量 ,结果显示核桃油中的总黄酮含量为 2 4 6 7mg/10 0ml。
- 余旭亚王洪钟郑桂兰陈朝银张荣庆
- 关键词：核桃油总黄酮含量分光光度法
- 乙酰微小杆菌生物合成5-甲基尿苷的研究被引量：2
- 2011年
- 用乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)完整细胞作为酶源,催化鸟苷和胸腺嘧啶合成抗艾滋病药物关键中间体5-甲基尿苷,并对影响菌体生长和5-甲基尿苷转化率的因素进行了考察。采用紫外诱变方法获得高表达核苷磷酸化酶菌种,使5-甲基尿苷的转化率提高到了75.8%;对培养基进行了碳源和氮源的优化,结果表明,3 g/L葡萄糖、20 g/L玉米浆、4 g/L NH4Cl有利于菌体生长;通过响应曲面(Response Surface Methodology,RSM)法获得了较为合适的转化条件:0.03 g/L MnSO4加入到pH值为8.0的磷酸缓冲液,两种底物浓度均为67 mmol/L,反应温度为56℃。
- 上官俊龙苏境坦郑桂兰张文权张贵友谢莉萍王洪钟
- 关键词：紫外诱变培养基优化生物合成响应曲面法
- S-亚胺还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达系统的构建及手性胺的合成被引量：1
- 2019年
- 旨在构建S-亚胺还原酶(S-IRED)和葡萄糖脱氢酶(GDH)在大肠杆菌中的一菌双酶共表达系统,实现辅酶NADPH的再生,高效合成手性仲胺。利用无缝克隆的手段设计构建一种单质粒双启动子共表达系统,以全细胞为催化剂催化手性仲胺S-2-甲基吡咯烷(S-2MP)的合成,并研究温度、pH及有机溶剂对双酶反应的影响。成功构建了S-IRED和GDH的重组共表达质粒,实现了S-IRED与GDH在大肠杆菌中的胞内共表达,以亚胺2-甲基吡咯啉(2MPN)为模式底物,以工程菌全细胞催化手性仲胺S-2MP的合成,在低辅酶添加时催化手性胺的产率和光学纯度均高于95%。该双酶共表达体系的最适温度和pH分别为37℃和pH 8,10%以下的甲醇对双酶反应有正向促进作用。大肠杆菌胞内双酶共表达系统的构建实现了辅酶NADPH的原位再生,降低了亚胺还原酶催化合成手性胺的成本,为手性胺的规模制备奠定了基础。
- 李骥璇余磊李京美郑桂兰王洪钟
- 关键词：葡萄糖脱氢酶共表达手性胺
