郑峰 作品数:58 被引量:138 H指数:6 供职机构: 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析 被引量:1 2013年 目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长、增殖和侵袭特性的影响。方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)。用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力。结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖、克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多。结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用。 刘玉 唐小军 曹清 丁贵鹏 张慧林 王欢 郑峰 徐凛锋 林红关键词:NIH3T3 真核表达 江苏省中部地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查 被引量:6 2008年 目的了解江苏省中部地区正常猪群猪链球菌及主要致病血清型分布。方法采集江苏省中部地区正常屠宰猪样本303份,用聚合酶链反应(PCR)法进行猪链球菌及主要致病血清型的检测,并对3株分离的猪链球菌菌株进行系统的生物学和分子遗传学鉴定。结果303份猪标本中,2005年正常猪群中猪链球菌的携带率达88.0%,其中1(或14)型、2(或1/2)型、7型和9型携带率分别为9.6%、8.5%、11.3%、29.5%;2006年正常猪群中猪链球菌的携带率为82.5%,1(或14)型、2(或1/2)型、7型和9型携带率分别为17.6%、2.4%、25.8%、20.0%;3株分离菌株均为2型,2a毒力因子表现型为cps2^+/gdh^+/mrp^-/epf^-/sly^-/fops^+/orf2^+/89k^-,2f、14e毒力因子表现型均为cps2^+/gdh^+/mrp^-/epf/sly^-/fbps^-/orf2^-/89k;3株分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等高度敏感,但对阿米卡星和四环素有显著的耐药性;对BALB/c小鼠和家兔无明显致病性。结论江苏省中部地区正常猪群中猪链球菌携带率处于较高水平,多种血清型同时存在,毒力因子表型与流行毒力株有显著差异。 鞠爱萍 王长军 郑峰 潘秀珍 董亚青 葛俊超 陆承平 唐家琪关键词:猪链球菌 聚合酶链反应 流行病学 分子 2型猪链球菌89K毒力岛Ⅳ型分泌系统LAMP检测方法的建立 被引量:11 2014年 目的建立针对高致病性2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)89K毒力岛Ⅳ型分泌系统的环介导等温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。方法根据国内流行株特有89K毒力岛编码的Ⅳ型分泌系统(T4SS-89K)的virB4-89K基因保守区域设计并合成LAMP引物,通过优化反应体系和扩增条件建立T4SS-89K快速检测方法,对方法的特异性、敏感性进行评估。结果优化的LAMP反应体系具有良好的扩增效率,检测灵敏度为1.53×10^-1拷贝/反应,全部扩增检测可在60rain内完成;建立的LAMP法具有良好的特异性,与不含T4SS-89K的猪链球菌(包括1/2型、1型、3-33型),以及其他常见9种对照菌均不发生特异性扩增,而与1998和2005年疫情现场分离的高致病性SS2均可发生特异性扩增。结论建立的LAMP方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,可用于高致病性SS2快速检测。 张凤玉 胡丹 吕恒 张锦海 郝丽娜 龚秀芳 操敏 郑峰 耿美玲 朱进 李丙军 潘秀珍 王长军信号肽与猪链球菌GDH融合的DNA疫苗构建及体液免疫研究 被引量:4 2008年 目的设计、构建猪链球菌GDH真核表达载体并研究DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫。方法在猪链球菌保护性抗原GDH基因5′末端引入人IL-2信号肽序列,通过PCR进行拼接,得到的融合DNA片段经过酶切克隆入质粒pcDNA3.0,构建核酸疫苗重组质粒pcDNA3.0-gdh。通过肌肉注射途径将重组质粒pcDNA3.0-gdh免疫小鼠,经ELASA实验和Western blot进行检验。结果构建的表达载体在小鼠体内表达出正确的目的蛋白,能诱导体液免疫。结论构建的DNA疫苗能够引起体液免疫,为研究猪链球菌核酸疫苗提供分子工具。 潘秀珍 赵华梅 葛俊超 王长军 郑峰 李先富 唐家琪关键词:猪链球菌 DNA疫苗 信号肽 一株无毒2型猪链球菌及其制备方法、应用 本发明属细菌类,具体说是一株无毒2型猪链球菌及其制备方法,以及在猪链球菌病疫苗研制中的应用。一株无毒2型猪链球菌Streptococcus suis(Serotype 2)05JYS68,其在中国微生物菌种保藏管理委员会... 唐家琪 王长军 郑峰 潘秀珍文献传递 PPARγ与肥胖诱导的炎症反应 被引量:4 2015年 过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)是调节目的基因表达的核内受体转录因子超家族成员。PPARγ主要表达于脂肪组织及免疫系统,与脂肪细胞分化、机体免疫及胰岛素抵抗关系密切。近年来,PPARγ与炎症反应的关系逐渐成为研究热点。研究表明,肥胖往往伴随着低等级的慢性炎症反应。 许小明 郑峰 朱进 周玮关键词:过氧化物酶体增殖体激活受体Γ 肥胖 炎症 猪链球菌2型divIVA基因敲除突变株及其应用 本发明属于基因工程领域,涉及猪链球菌2型divIVA基因敲除突变株及其应用。所述突变株ΔdivIV制备方法为:利用同源重组基因敲除技术将S.suis 2野生株05ZYH33染色体上编码DivIVA蛋白的divIVA基因进... 潘秀珍 倪华 王长军 沈玉洁 胡丹 郑峰文献传递 炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析 2015年 目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。 许小明 郑峰 周婷婷 熊四平 刘鹏 王长军 冯振卿 周玮 朱进关键词:炭疽 活性分析 2型猪链球菌RevS基因敲除突变株生物学特征及致病性研究 2018年 比较2型猪链球菌(S.suis 2)ΔRevS突变株和05ZY/H33野生株生物学特性及致病性的差异.首先,通过吸光值测定和革兰染色比较△RevS突变株和05ZY/H33野生株的生长速度和菌体形态.分别对Balb/c及ICR(CD1)小鼠腹腔注射109 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33菌液,评估两种品系小鼠对S.suis 2的易感性.分别对Balb/c小鼠腹腔注射2.5×10~9,5.0×10~8,1.0×108,2.0×10~7,4.0×10~6 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33菌液,采用Reed法计算半数致死量.对Balb/c小鼠腹腔注射5.0×108 CFU·mL^(-1)的ΔRevS突变株和05ZY/H33野生株菌液,观察野生株和突变株对小鼠的影响.对仔猪耳缘静脉注射10~9 CFU·mL^(-1)的05ZY/H33野生株和ΔRevS突变株菌液,观察野生株和突变株对仔猪的影响.体外生物学特征分析表明,与野生株相比,突变株的生长速率和形态染色并未发现显著变化;Balb/c小鼠对S.suis 2 05ZY/H33的敏感性高于ICR(CD1)小鼠,05ZY/H33对Balb/c小鼠的LD50为4.2×10~7 CFU·mL^(-1).Balb/c小鼠攻毒试验结果显示,ΔRevS对小鼠的致病性明显减弱.仔猪攻毒试验结果显示,野生株和突变株都引发仔猪全部死亡,但ΔRevS引发仔猪死亡时间较晚.△RevS突变株保持了菌株的基本生物学特征,但对小鼠和仔猪两种动物模型的致病作用差异较大. 孙雯 郑峰关键词:半数致死量 猪链球菌2型强毒株sly基因敲除株构建及生物学特征分析 2017年 [目的]构建猪链球菌2型05ZYH33溶血素sly基因敲除突变株,比较突变株与野生株生物学特征。[方法]分别克隆sly上游序列L、下游序列R和壮观霉素抗性基因spcr,构建基因敲除质粒p UC18-LSR,并电转化入05ZYH33感受态细菌。用多重PCR、RT-PCR及Southern杂交对sly基因敲除突变株进行鉴定。比较突变株与野生株的生长速率和溶血现象。[结果]多重PCR和RT-PCR分别显示,野生株DNA和c DNA都能扩增出579 bp的sly内部片段,而突变株DNA和c DNA都未能扩增出此片段。Southern杂交显示,突变株中未见sly探针杂交条带。突变株生长速率较野毒株迟缓,溶血能力减弱,但依然存在。[结论]建立了高效稳定的电转化方法,成功构建出溶血能力减弱的双交换同源重组sly基因敲除突变株。 孙雯 郑峰关键词:猪链球菌2型 溶血素 基因敲除 野生株