邹金峰
- 作品数：14 被引量：52H指数：4
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞—杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
- 通过PCR方法扩增完整的Cap基因，按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体中，将筛选的阳性重组载体pF-CP，转化至含有杆状病毒穿梭载体和辆助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中，经过蓝白...
- 邹金峰相琪旺陈琳雷战孙慧魏宗王鑫姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒
- 山东地区禽源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因的检测被引量：15
- 2011年
- 采用K-B纸片法对224株大肠杆菌进行5种氨基糖苷类药物的药敏试验,采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度(MIC)的测定,三重PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)-Ib和aph(3’)-Ⅱa,普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果显示:山东省禽源大肠杆菌对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为84.4%、57.1%、55.8%、46.9%和40.2%;3种钝化酶基因ant(3’’)-Ia、aac(6’)和Ib、aph(3’)-Ⅱa的检出率依次为49.6%、25.0%和22.8%,介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%(26/224),只有1株大肠杆菌检测到armA基因,没有检测到rmtA,且3种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0;所检大肠杆菌中携带2种及2种以上耐药基因的菌株占33.5%(75/224),有1株大肠杆菌同时携带4种耐药基因。结果表明,氨基糖苷类钝化酶及16S甲基化酶广泛存在于禽源大肠杆菌菌中,其耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,表明还存在其他耐药机制。
- 孙慧雷战邹金峰魏宗王鑫谢之景姜世金
- 关键词：大肠杆菌耐药性
- 鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定被引量：4
- 2012年
- 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。
- 张兴晓邹金峰相琪旺王鑫陈琳谢之景姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒IFA
- 鸭圆环病毒核酸探针检测方法的建立及Cap蛋白核定位信号的研究
- 鸭圆环病毒/(Duck circovirus,DuCV/)是圆环病毒科/(Circoviridae/)圆环病毒属/(Circovirus/)的新成员。DuCV感染可导致鸭子羽毛凌乱、生长迟缓、体重减轻等症状。本研究建立了...
- 邹金峰
- 关键词：鸭圆环病毒杆状病毒表达系统间接免疫荧光核定位信号
- 文献传递
- B亚型禽偏肺病毒核酸探针的制备与应用
- 目的：为探明山东省禽偏肺病毒(aMPV)的流行情况，制备B亚型禽偏肺病毒棱酸探针对我省部分地区的商品肉鸡进行病原检测。
方法：根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒基因的保守序列，设计合成一对引物，利用...
- 陈琳刁有祥孙静邹金峰刘霞鞠小军
- 关键词：商品肉鸡
- 文献传递
- 鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用
- 用地高辛(DIG)标记本实验室保存的鸭圆环病毒(DuCV)传染性克隆制成核酸探针。特异性结果表明，该探针能与DuCV核酸发生特异性杂交，而与对照的鸭病毒性肝炎I型(DHV-1)病毒、鸭瘟病毒(DPV)的核酸杂交反应为阴性...
- 邹金峰相琪旺雷战孙慧聂兆晶魏宗王鑫姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒地高辛标记核酸探针PCR检测
- 禽偏肺病毒RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：19
- 2012年
- 根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒(aMPV)F基因的保守序列设计并合成1对引物,利用RT-PCR可以扩增出1条725bp的片段,进行特异性试验和敏感性试验,建立了禽偏肺病毒病的RT-PCR检测方法。特异性试验表明,建立的RT-PCR检测方法能够从禽偏肺病毒疫苗毒株VIR 115-B中扩增到725bp的特异性片段,而对H9N2亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验表明,该方法最低检出量的cDNA质量浓度为1.45μg/L;对山东省492份病料进行检测,阳性检出率为43.09%(212/492),随机挑取11份进行克隆测序及序列分析,结果显示所扩增到的阳性产物均为B亚型的禽偏肺病毒。建立的禽偏肺病毒的RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高的特点。
- 陈琳刁有祥邹金峰
- 鸭圆环病毒ORF3基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2011年
- 为了解鸭圆环病毒(DuCV)不同分离株ORF3基因变异情况及分析其同源性,本研究从临床病料中分离10株DuCV,扩增ORF3基因并测定其序列。通过与已知序列比对分析发现,DuCV ORF3基因分为两种基因型,大小分别为237 bp和297 bp。ORF3基因同一基因型之间的核苷酸同源性为95.8%～100%,氨基酸同源性为88.6%～100%,而不同基因型之间的核苷酸同源性仅为87.8%～91.6%,氨基酸同源性仅为72.2%～81.0%。
- 魏宗邹金峰雷战孙慧王鑫相琪旺赵钦姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒ORF3基因基因型
- B亚型禽偏肺病毒重组G蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2013年
- 以纯化的B亚型禽偏肺病毒(aMPV)疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA方法。将构建好的重组质粒转入Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达,获得重组G蛋白。利用亲和层析法对表达产物进行纯化,并用Western-blotting对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组G蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测B亚型aMPV抗体的间接ELISA诊断方法。结果显示,成功表达并纯化了B亚型aMPV疫苗株(VIR-115B)重组G蛋白,Western-blotting检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组G蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组G蛋白与新城疫、禽流感(H9N2)、传染性支气管炎和传染性法氏囊阳性血清均不发生交叉反应。该方法与法国IDEXX公司生产的aMPV抗体检测试剂盒符合率为96.0%。采用本试验建立的间接ELISA方法对山东省7个地区鸡场的1 139份鸡血清进行了检测,结果表明,山东省部分地区aMPV的抗体阳性率为37.05%。本试验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实山东省部分地区存在aMPV感染现象。这一研究为aMPV诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。
- 陈琳刁有祥邹金峰唐熠程彦丽欧全宾薛聪崔京腾鞠小军孙晓艳裴萍萍
- 关键词：B亚型间接ELISA
- 鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用
- 用地高辛(DIG)标记本实验室保存的鸭圆环病毒(DuCV)传染性克隆制成核酸探针。特异性结果表明，该探针能与DuCV核酸发生特异性杂交，而与对照的鸭病毒性肝炎I型(DHV-1)病毒、鸭瘟病毒(DPV)的核酸杂交反应为阴性...
- 邹金峰相琪旺雷战孙慧聂兆晶魏宗王鑫姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒地高辛标记核酸探针PCR检测
