邓公平
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导RNAi稳定抑制XIAP表达及对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的抑制效率及对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,建立XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株。方法:应用pGCSIL-PUR慢病毒载体构建针对XIAP的ShRNA载体,转染包装细胞293T,收集病毒上清转染胰腺癌细胞系SW1990,经嘌呤霉素(puromycin)筛选并扩大培养得到稳定克隆;实时荧光定量PCR和western-blot免疫印迹检测癌细胞内XIAP的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;caspase 3/7活性测定和DAPI染色检测细胞凋亡。结果:成功构建3个XIAP-ShRNA慢病毒载体(X1、X2、X3)及XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株,对XIAP的抑制效率均达70%以上;MTT检测显示X1、X3稳定抑制XIAP后胰腺癌细胞增殖明显减慢,但caspase 3/7活性及细胞凋亡并没有明显增加。结论:慢病毒载体介导的靶向XIAP的RNAi可有效抑制XIAP表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力;成功建立的XIAP表达稳定抑制的胰腺癌细胞株为进一步研究打下基础。
- 易小平江春宰红艳邓公平欧阳洋周达全纪连栋李宜雄
- 关键词：胰腺癌X-连锁凋亡抑制蛋白慢病毒载体
- shRNA稳定抑制XIAP和survivin表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对胰腺癌细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(survivin)的抑制作用及对胰腺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法:应用pGCSIL-PUR和pGCSIL-NEO分别构建针对XIAP和survivin的shRNA慢病毒载体,转染胰腺癌细胞株SW1990和Panc-1,经嘌呤霉素和新霉素筛选并扩大培养得到稳定转染株;实时荧光定量PCR和Western blot检测胰腺癌细胞内XIAP和survivin的表达;MTT法检测细胞增殖和化疗敏感性;caspase-3/7活性测定和DAPI染色分析细胞凋亡情况。结果:筛选XIAP和survivin的有效干扰靶点后,获得XIAP和survivin表达稳定抑制的SW1990和Panc-1细胞株。MTT检测显示稳定抑制XIAP或survivin后,两种胰腺癌细胞增殖均明显减弱,且两者联合抑制后作用增强;虽然抑制XIAP或survivin后对两种胰腺癌细胞凋亡无明显影响,但能明显增加其对化疗药物(5-FU,吉西他滨)的敏感性,且两者联合抑制后作用明显增强。结论:慢病毒载体介导的靶向XIAP和survivin的RNAi可有效抑制XIAP和survivin的表达,降低胰腺癌细胞的增殖能力并增强其对化疗药物的敏感性,且两者联合具有协同作用。
- 宰红艳江春易小平邓公平李宜雄
- 关键词：X-连锁凋亡抑制蛋白生存素
- 慢病毒载体介导RNAi靶向抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对survivin的抑制效率及对胰腺癌细胞SW1990凋亡的影响。方法应用pGCSIL-neo质粒构建3对针对survivin的慢病毒ShRNA载体,转染包装细胞293T,收集病毒上清转染胰腺癌细胞系SW1990,实时荧光定量PCR和western-blot免疫印迹检测癌细胞内survivin的表达;测定caspase3/7活性和DAPI染色检测细胞凋亡。结果成功构建3个survivin-ShRNA慢病毒载体,LV-shRNA-survivin-1对survivn的mRNA和蛋白表达抑制效率分别为73.50%和87.64%;与对照组相比,其caspase3/7活性升高14.5倍,细胞凋亡明显增加(11.95%)。结论慢病毒载体介导的Suvivin-ShRNA靶向转染可有效抑制survivin表达,并显著增加胰腺癌细胞的凋亡。
- 易小平江春宰红艳邓公平李宜雄
- 关键词：慢病毒载体细胞凋亡
