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赖燕: 作品数：22 被引量：46H指数：4; 供职机构：福建农林大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学更多>>

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含有多个应答逆境元件的合成启动子在水稻中的表达分析: 2013年; 存在于启动子中的各种顺式作用元件在基因应答逆境的过程中起重要的作用,对这些元件进行适当组合是构建诱导型合成启动子的重要可行途径之一。本研究利用多个逆境应答元件(S盒、D盒、Gst1盒、TCA盒和LURP1基因启动子的-85^-46区)和CaMV35S核心(-46-+8)序列相连,组成一个人工合成启动子PRBS,并构建了GUS为报告基因的转化载体,通过农杆菌介导的遗传转化方法获得其水稻转基因植株。利用T1代转基因水稻株系,通过检测GUS酶活性,研究了PRBS在不同逆境及外源激素作用下的表达特征。结果发现PRBS组成型表达水平低,可不同程度地应答稻瘟病病原菌侵染,机械损伤和外源激素(ABA、SA和MeJA)处理,表明PRBS可作为诱导型启动子用于水稻抗逆基因工程遗传改良。; 牟少亮蔡汉阳赖燕马洪丽何水林; 关键词：诱导型启动子生物胁迫 GUS 转基因水稻

辣椒非特异性脂质转移蛋白基因CaLTP1的克隆及表达分析: 2012年; 非特异性脂质转移蛋白(nsLTPs)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有多种生物学功能。从辣椒cDNA文库中筛选得到1个nsLTPs基因,命名为CaLTP1;序列分析结果表明:该基因全长cDNA序列为1 211 bp,推测编码1个包含129个氨基酸残基的前体蛋白。CaLTP1蛋白含有典型的脂质转移蛋白N-端信号肽,保守的AAI结构域和半胱氨酸位点。预测CaLTP1蛋白含有多种功能位点,包括3个CK2磷酸化位点,3个N-豆蔻酰化位点和1个PKC磷酸化位点。实时荧光定量分析组织特异性表达模式表明,CaLTP1在辣椒茎、叶、花中表达量升高。; 冯冬林赖燕何水林; 关键词：辣椒

辣椒CaROPGEF1 cDNA的分离及其结构和表达的初步分析: 2010年; ROP是植物特有的一类Rho相关GTPases,在植物体内通过GTP结合形式与GDP结合形式的切换而对生长发育和适应环境起调节作用.由GTP结合形式向GDP结合形式的转换主要依赖于鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchangefactor,GEF).本文以锁定于GDP结合形式的辣椒DN-CaROP1突变体为诱饵,采用ProQuestTM酵母双杂交体系,从辣椒幼苗cDNA文库中分离了辣椒GEF阳性克隆,其推导的氨基酸序列与其他植物中发现的GEF具有较高的同源性,并含典型的植物ROPGEF保守域DUF315及N端与C端的高度变化域,将之命名为CaROPGEF1;RT-PCR分析表明,CaROPGEF1在辣椒多种组织中均有表达;进一步酵母双杂交分析表明,CaROPGEF1可与GDP结合态的ROP结合,而不能与GTP结合态的ROP结合.上述结果暗示CaROPGEF1调节的ROP从DN态向CA态的转化在辣椒植株中频繁发生,可能参与辣椒ROP介导的生长、发育和对环境适应的调控.; 邱爱连蔡汉阳刘林林朱万里赖燕何水林张健; 关键词：辣椒 ROP 酵母双杂交

辣椒均一化全长cDNA文库的构建及若干重要基因的表达或功能分析: 辣椒(Capsicum annuum L.)是一种具有重要经济价值的茄科作物，而在生产过程中包括病害在内的各种生物和非生物逆境的发生严重地影响辣椒的产量和质量。培育，推广及应用抗逆品种是当前和今后解决辣椒品质问题的最为根...; 赖燕; 关键词：辣椒防御反应抗逆品种逆境应答

辣椒抗菌蛋白cDNA的分离与表达的初步分析: 2007年; 本研究从经辣椒疫霉侵染处理的辣椒叶片cDNA文库中分离获得了一个辣椒抗菌蛋白cDNA阳性克隆,其长度为255bp,含有长度为85个氨基酸的开放读码框架,与其它植物抗菌蛋白或几丁质酶有不同程度的同源性,推测为辣椒抗菌蛋白,命名为CansLTPS.cDNA-AFLP分析表明,CansLTPS的转录受UV-B照射和辣椒疫霉侵染的诱导,外源脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、水杨酸(SA)等可不同程度的诱导CansLTPS基因的转录,而MeJA处理对CansLTPS基因的转录表达影响不大,表明CansLTPS基因可应答生物和非生物逆境胁迫,其上游可能涉及ABA、ETH、SA等介入的信号传递途径.; 邱敏曹蕾贺俐王育娜徐波许先松赖燕林明何水林; 关键词：辣椒抗菌蛋白 CDNA克隆基因表达

水稻叶片cDNA-AFLP选择性扩增反应体系的优化被引量：11: 2008年; 在水稻Oryza sativa叶片响应稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis取食后的cDNA-AFLP试验中,对25μL体系中预扩增和选择性扩增的引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度及TaqDNA聚合酶用量4种反应条件影响因子进行不同梯度的优化研究。结果表明,PCR选择性扩增反应时,总反应液25μL体系中引物浓度为0.2μmol/L、dNTP浓度为0.2mmol/L、镁离子浓度为2.0mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为13.336n kat/25μL时,可得到更多鲜明可辨的TDFs。; 曹蕾林明王育娜许先松赖燕徐波何水林; 关键词：水稻 CDNA-AFLP

辣椒应答疫霉差异表达基因cDNA分离技术平台建立与应用被引量：1: 2010年; 植物在逆境胁迫下大量基因的表达往往会发生改变,最终导致对逆境的诱导抗性。剖析逆境作用下差异表达基因的功能是阐明植物抗逆分子机制的重要途径,而获得逆境作用下差异表达基因的全长cDNA是上述研究的基础。建立获得辣椒应答疫霉侵染差异表达基因全长cDNA的技术平台:利用抑制性差减杂交技术构建辣椒叶片在疫霉侵染下的SSH文库,随机挑取150个克隆测序,获得24个功能已知的序列,BLASTN分析发现这些差异表达基因从功能上可分为能量代谢过程、信号传递、光合作用、抗逆反应等几种类型;利用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMARTTM(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)建库技术相结合的方法,构建了辣椒全长均一化cDNA文库,该文库含有1.8×106个独立克隆,插入片段平均长度为1.75kb,重组率为97%;基于SSH获得的差异表达基因序列设计特异性引物,从均一化文库中分离获得其相应的cDNA,结果表明:所获得的差异表达基因cDNA片段相对应的cDNA阳性克隆均为全长cDNA,所构建的SSH和均一化cDNA文库可较好地应用于辣椒应答疫霉等逆境差异表达基因全长cDNA的分离,为进一步开展差异表达基因的功能鉴定奠定基础。; 赖燕林明陈桂信徐波贺俐姜翠翠肖翔官德义何水林; 关键词：辣椒抑制差减杂交差异表达基因

辣椒推定WRKY基因cDNA的生物信息学分析被引量：1: 2008年; 【研究目的】该研究在利用同源克隆法分离到一个推定的辣椒WRKY转录因子的基础上,采用多种生物信息学方法对该序列进行特征分析和功能预测,以获得该基因及其编码蛋白更多的功能提示。【主要方法】应用B1ast、ORF Finder、Wolf Psort、DNAMAN等软件或数据库,进行序列的相似性比较,开放读码框预测、保守域和编码蛋白质的功能等分析。【研究结果】所得到的序列是WRKY基因家族中的一个全长cDNA序列,与其它植物具有较高的同源性,该基因编码的蛋白具有WRKY保守结构域和锌指结构特征,亚细胞定位预测结果显示该蛋白定位于细胞核,具有WRKY转录因子的三维结构特征。【结论】所获得序列为辣椒WRKY基因家族的新成员,具有WRKY转录因子家族的基本特征,进化上有高度保守性,可能在调控植物的生长发育以及干旱、高温、高盐等逆境应答过程中起重要调节作用。因此,这一辣椒WRKY新基因有进一步研究的价值。; 王育娜贺俐曹蕾赖燕牟少亮何水林; 关键词：辣椒 WRKY 转录因子生物信息学

紫外线照射辣椒叶片cDNA文库构建及部分防御信号基因cDNA的检测: 2008年; 对抗病的朝天椒地方品种,以紫外线(UV)处理叶片并提取叶片总RNA,采用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了一个cDNA文库.该文库含有2.6×106个独立的噬菌斑克隆,扩增后滴度达到1.5×109pfu.μL-1,随机挑取的噬菌斑PCR检测发现重组率达90.0%.在搜索、拼接与植物WRKY、bZIP、AP2和E2等重要调节基因同源的辣椒表达序列标签(ESTs),获得重叠群的基础上,分别设计上述基因ESTs重叠群特异性引物,以cDNA文库为模板进行PCR扩增.结果表明,部分上述基因cDNA存在于文库中.因此,本研究所构建的文库可用于进一步分离响应UV的重要调节基因cDNA的分离.; 官德义赖燕林明王育娜曹蕾何水林; 关键词：辣椒 CDNA文库紫外线

水稻Xa21基因启动子序列分析及其在不同条件下的表达特征: 2012年; 以水稻品种‘日本晴’(Oryza sativa‘Nipponbare’)为实验材料,根据GenBank上公布的同品种水稻的基因组DNA序列设计1对引物,对水稻Xa21基因启动子进行克隆并测序,通过PCR扩增获得的Xa21基因启动子序列长1 982 bp,其中除包含启动子基本元件外,还包含一些与逆境信号相关的元件(GCC-box、A-box、TC-rich repeats、MBS、LTR和W-box等)。利用GUS组织化学染色和定量分析方法,研究了转基因水稻T1代株系不同器官和发育阶段Xa21基因启动子的表达特异性及其在不同逆境和激素处理条件下的表达特征,结果显示:在转基因水稻的叶、茎和根部均能检测到GUS活性,但根部GUS活性最高,特别是在根尖的中柱区活性最强;随苗龄增长(3叶期、5叶期和8至9叶期)叶片中GUS活性逐渐增加,8至9叶期GUS活性最高;机械损伤和100μmol.L-1茉莉酸甲酯(MeJA)处理可使叶片中GUS活性显著或极显著提高,而干旱、500μmol.L-1水杨酸(SA)和100μmol.L-1脱落酸(ABA)处理则对叶片中GUS活性无明显影响。研究结果表明:外界逆境胁迫对水稻Xa21基因启动子的表达有诱导作用;该启动子的表达受水稻发育阶段的调控并具有一定的器官组织特异性,在根中的表达量最高;其介导的抗病反应依赖于茉莉酸(JA)信号通路。; 牟少亮刘志钦赖燕蔡汉阳何水林; 关键词：水稻 GUS活性

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