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猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用被引量：7: 2011年; 以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。; 胡小华李刚史利军张坤贾凤芹; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒

H5N1禽流感病毒微磁粒捕捉系统和SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3: 2009年; 利用禽流感H1N1抗体包被微磁珠制备免疫磁珠,再通过抗原抗体反应得到了含有N1亚型的病毒,然后设计针对H5亚型的特异性引物,同时构建含有H5亚型HA基因部分序列的标准质粒,定量后作为模板,建立了可以检测H5亚型禽流感病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果表明,制备的免疫磁珠可以吸附4个血凝单位的H5N1流感病毒和5个血凝单位的H1N1流感病毒,而对H9N2亚型流感病毒无特异性结合,从而可以富集N1亚型的流感病毒。H5亚型RRT-PCR检测灵敏度可达到4.6拷贝/μL,线性范围达5个数量级;特异性强,与NDV和H1、H9亚型禽流感病毒不发生交叉反应。因此,利用该方法可以很好地检测H5N1禽流感病毒。; 张坤李刚贾凤芹; 关键词：H5N1禽流感病毒荧光定量RT-PCR

小反刍兽疫病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用被引量：4: 2009年; 本研究利用原核表达的小反刍兽疫病毒核衣壳(N)蛋白作为标准抗原蛋白,建立PPRV抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10 mg/L,血清最佳稀释度为1∶40,二抗的使用浓度为1∶200,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应时间为37℃15 min。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。经过临床样品检测证明,建立的检测方法可用于临床PPRV抗体的检测。; 贾凤芹李刚李伟史利军胡小华; 关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白间接酶联免疫吸附试验

猪病毒性免疫抑制病的危害及防控: 近年来随着中国养猪业的发展,猪病已成为规模化养猪生产中所面临的一大难题,其重要原因在于猪群普遍存在免疫抑制性疾病。免疫抑制是指由于免疫功能系统受到损害而导致动物机体暂时性或永久性免疫应答功能不全以及对疾病的高度易感。猪病...; 李刚史利军贾凤芹吴翠娟邱文英曾妮李伟; 关键词：PRRSV 抗原提呈细胞病毒性免疫抑制病 PCV 免疫抑制性疾病猪繁殖与呼吸综合征病毒; 文献传递

小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定被引量：1: 2009年; 根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。; 李伟李刚邱文英贾凤芹曾妮吴素丽; 关键词：小反刍兽疫病毒 H基因原核表达

小反刍兽疫病毒核衣壳（N）蛋白的原核表达: 小反刍兽疫/(peste des petits ruminants,PPR/)是由小反刍兽疫病毒/(peste des petits ruminants virus,PPRV/)引起的一种感染山羊、绵羊等小反刍兽类的急性...; 贾凤芹; 关键词：小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白原核表达; 文献传递

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贾凤芹