谢来峰
- 作品数：10 被引量：27H指数：3
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省重大公益性科研项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：2
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌酶(lysozyme,LYZ)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT-PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白.初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.
- 丁博王磊谢来峰樊晋宇徐存拴
- 关键词：库普弗细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：4
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞,用RT-PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM.初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用.
- 张永晶谢来峰王磊樊晋宇徐存拴
- 关键词：肝星形细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：2
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation 14,CD14)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT-PCR定量窦内皮细胞的CD14和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白.初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用.
- 王泽王磊谢来峰樊晋宇徐存拴
- 关键词：窦内皮细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：1
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞(oval cell,OC).用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.
- 陆琼谢来峰王磊樊晋宇徐存拴
- 关键词：肝卵圆细胞免疫磁珠标记蛋白
- 液压转基因技术应用于大鼠肝脏转基因实验被引量：6
- 2009年
- 目的探讨液压转基因技术（HDT）应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法。方法以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP—C1，于注射后不同时间取大鼠（各4只）各肝叶制备玲冻切片，在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况。结果在一次性注射浓度为30mg／L质粒、注射速度为2ml／s、注射体积为大鼠体重9％的条件下，注射pEGFP-C1质粒后6h，绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高，占肝脏总细胞的20％以上，从24h起绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少，至72h时各肝叶均基本难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞。在上述最佳条件下，绿色荧光蛋白在各肝叶的表达情况是：蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为30％，左叶、中叶、右叶约为20％，尾状叶约为10％。结论液压转基因技术可应用于大鼠肝脏转基因，其适宜条件是：质粒溶液的浓度为30mg／L，注射量为大鼠体重的9％，注射速度为2ml／s，观察转染率的适宜时间是转基因后6～24h。
- 徐存拴邢雪琨谢来峰张明方方崔胜男王磊张富春
- 关键词：肝脏绿色荧光蛋白
- 树突状细胞在大鼠再生肝中分布及数量变化被引量：1
- 2009年
- 探讨树突状细胞在大鼠再生肝中分布及数量变化,为深入研究其在肝再生进程中的作用奠定基础。制作大鼠2/3肝切除模型(PH),用两步灌流法分散肝脏细胞,用Percoll密度梯度离心和ox62免疫磁珠分离相结合方法分离树突状细胞(DC),用免疫组织化学方法定性、定位CD86和CD103在再生肝(RL)、分散的肝脏细胞及分离的树突状细胞中分布,用蛋白免疫印迹方法定量树突状细胞的CD86和CD103,用RT-PCR定量分离的树突状细胞CD86和CD103的mRNA。结果表明,0h再生肝树突状细胞分布于肝血窦、中央静脉、胆管周围,12h在远离中央静脉和胆管的部位出现,24h呈弥散状分布,168h分布与对照相同;从肝切除后0、2、6、12、24、30、36、72、120、168h等10个时间点的大鼠再生肝中收获的树突状细胞平均数分别为每只大鼠1.55、1.59、1.87、2.46、1.49、2.73、3.87、6.04、6.52、8.40百万个,CD86和CD103阳性细胞数目、细胞活性均在95%以上。上述结果说明在肝再生进程中树突状细胞的分布由肝血窦、中央静脉、胆管周围逐渐向全肝弥散,24h弥散达到高峰,之后回落,至168h分布与对照相同,但其数量随肝再生进程而增加。
- 谢来峰王文博王磊王望徐存拴
- 关键词：大鼠再生肝树突状细胞标记蛋白
- 大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：1
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞(pit cell),用分化抗原簇8(cluster of differentiation8,CD8)和分化抗原簇56(cluster of differentiation 56,CD56)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT-PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56 mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白.初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95%以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用.
- 和春肖谢来峰王磊樊晋宇徐存拴
- 关键词：免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠胆管上皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：2
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%～90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transferase,GGT)和角蛋白19(cyto-keratin19,CK19)免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的胆管上皮细胞,用RT-PCR定量胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA,用蛋白免疫印迹定量胆管上皮细胞的GGT、角蛋白18(cytokeratin 18,CK18).初步证实分离的细胞中GGT和CK19阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离胆管上皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,方便适用.
- 李永霞王磊谢来峰樊晋宇徐存拴
- 关键词：胆管上皮细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化被引量：2
- 2009年
- 目的:系统了解大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化。方法:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片并镜检肝组织结构。结果:建模第1周大鼠肝脏中央静脉周围细胞内出现密集小脂滴,细胞有聚集和坏死现象。从第4周开始中央静脉周围脂变细胞越来越多,细胞内脂滴越来越大,细胞亦变大,同时出现炎症细胞浸润和纤维性增生。第8周时肝窦狭窄,肝叶的大部分细胞发生脂变,大脂滴居多,脂肪性肝炎和肝纤维化加重。第10周时脂变细胞达90%以上,其所含的绝大部分脂滴为大脂滴,将细胞核挤向一边。第12周时肝小叶结构完全消失,伴有假小叶形成和肝硬化早期症状。第15周时肝脏明显皱缩且与周围组织粘连严重,假小叶内出现纤维再分隔和肝细胞再生小结节,肝硬化加剧。脂变细胞内近80%的脂滴为大脂滴。第20周时肝脏颜色暗灰,肝叶完全粘连,结节明显,假小叶内的肝细胞干酪样坏死严重。结论:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型方便有效,肝组织结构和肝脏病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用。
- 谢来峰张延斌郭学强徐存拴
- 关键词：四氯化碳
- 大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：7
- 2008年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点.
- 王文博谢来峰王望王磊徐存拴
- 关键词：肝细胞基因表达标记蛋白
