许闪闪
- 作品数：13 被引量：46H指数：3
- 供职机构：同济大学附属第十人民医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局青年科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肽聚葡糖对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究浆细胞异常增生的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞在受到肽聚葡糖(peptidoglycan,PGN)刺激后对细胞增殖的影响。方法利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析MM U266细胞株TLR2、IL-1β、IL-8、NF-κB、Stat3和TNF蛋白的mRNA水平,与23名正常人单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)mRNA比较。20μg/ml PGN与U266细胞共培养,分析TLR2和NF-κB蛋白mRNA的变化情况。Western印迹法检测该药对U266细胞NF-κB蛋白的影响。MTT、流式细胞术检测PGN刺激U266后增殖情况。结果与PBMCs相比,TLR2、IL-8、TNF在U266中表达显著降低,而NF-κB表达增加(P<0.05)。经PGN作用后,TLR2、NF-κB mRNA表达均增加,Western印迹法检测NF-κB蛋白表达明显增多。MTTT及细胞周期检测发现,PGN可使细胞由G_0/G_1期向前推进,促进细胞有丝分裂及增殖。结论PGN可能通过激活NF-κB通路促进U266增殖。
- 何丽梅李智许闪闪
- 关键词：多发性骨髓瘤TOLL样受体NF-ΚB
- 白血病诊断综合分析的重要意义被引量：21
- 2014年
- 目的证实白血病诊断综合分析的重要意义。方法通过血常规、骨髓细胞形态学、细胞化学染色、流式细胞学白血病免疫分型、细胞遗传学分析、分子生物学检测及骨髓病理诊断联合检查,对6例白血病,包括急性早幼粒细胞性白血病M3a、大颗粒淋巴细胞性白血病、多毛细胞白血病(HCL)、急性粒细胞性白血病部分分化型M2a、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和急性髓系白血病微分化型M0进行诊断。结果急性早幼粒细胞性白血病经骨髓细胞形态学、细胞化学染色后确诊;大颗粒淋巴细胞白血病经骨髓细胞形态学、细胞化学染色、流式细胞术检测后确诊;HCL经骨髓细胞形态学、细胞化学染色、流式细胞术和骨髓病理诊断确诊;急性粒细胞性白血病部分分化型经检查,骨髓细胞形态学、细胞化学染色和流式细胞术检查对该病例仍难以准确判断,最终行染色体核型分析和分子生物学检测帮助确诊。CLL经骨髓细胞形态学和流式细胞术确诊。急性髓系白血病微分化型经骨髓细胞形态学、细胞化学染色、流式细胞术检查和染色体核型分型综合确诊。结论综合运用多种检验项目对确诊环境改变、老龄化等原因引起的不典型白血病具有重要的临床意义。
- 黄静沁许闪闪李智郑特翁文浩王佳谊
- 关键词：白血病细胞形态学流式细胞学细胞遗传学分子生物学
- YY1基因在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞功能的影响
- 2012年
- 目的探讨YY1基因在肾癌组织中表达及小干扰RNA(siRNA)对人肾癌786-O细胞增殖和侵袭的影响。方法以Real-Time PCR检测转录因子YY1在20对肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将siRNA转染入人肾癌786-O细胞中,Real-Time PCR和Western印迹法检测YY1转染效率;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力,Real-Time PCR检测基质金属蛋白酶MMP9及钙黏附蛋白E-cadherin mRNA表达水平。结果与癌旁组织相比,20对癌组织中YY1 mRNA表达量显著增高(P<0.01)。转染人肾癌786-O后,siRNA-YY1组细胞YY1mRNA的表达抑制率达66%(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于siRNA-NC组。与NC组相比,siRNA-YY1组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01)。此外,与NC组相比,MMP9及E-cadherin mRNA水平有显著差异(P<0.01)。结论 YY1在肾癌组织中高表达,靶向沉默YY1可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力。YY1特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。
- 王明丽李智何丽梅徐晋豫许闪闪
- 关键词：肾肿瘤RNA干扰
- 人膀胱肿瘤DNA异常甲基化研究的临床意义
- 2009年
- 膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿外科肿瘤，无论其发病率或死亡率均占首位。DNA异常甲基化是肿瘤发生、发展过程中常见的表观遗传学改变，在膀胱肿瘤中扮演着重要角色。近年来，研究者对膀胱肿瘤DNA异常甲基化进行了大量的研究，为开辟膀胱肿瘤筛查、诊断和治疗的新途径奠定了实验基础。
- 许闪闪李智
- 关键词：膀胱肿瘤DNA甲基化表观遗传学
- 多发性骨髓瘤U266细胞株DNA甲基转移酶和甲基结合蛋白的表达被引量：1
- 2010年
- 目的检测多发性骨髓瘤（MM）细胞DNA甲基转移酶（DNMTs）及甲基结合结构域（MBD）蛋白[包括甲基CpG结合结构域蛋白（MeCP2）和MBD2]的表达状况,探索其在基因甲基化过程的作用。并观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和/或曲古霉素A（TSA）对DNMTs及MeCP2和MBD2的作用。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MMU266细胞株DNMTs（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及MeCP2和MBD2蛋白的mRNA水平,与10名正常人单个核细胞（PBMC）mRNA比较。4μmol/L5-Aza-CdR和/或0.1μmol/LTSA与U266细胞共培养,分析MBD2和MeCP2蛋白mRNA的变化情况。WesternBlot检测这2种药物对U266细胞MBD2蛋白的影响。结果各甲基化调控蛋白mRNA与PBMCmRNA相比,差异有统计学意义（P均〈0.05）。其中DNMTs和MBD2蛋白在U266细胞中表达升高,而MeCP2蛋白表达下降。经5-Aza-CdR和/或TSA作用后,MBD2表达下降,MeCP2升高。5-Aza-CdR在蛋白水平对MBD2的作用亦不显著;TSA可明显降低MBD2的表达,且具有时间依赖性。结论 DNMTs和MBD2、MeCP2蛋白在MMU266细胞中表达异常,可能与U266细胞多个抑癌基因启动子高甲基化相关。5-Aza-CdR和TSA可以逆转U266细胞MBD2和MeCP2的表达。
- 许闪闪李智何丽梅翁文浩于慧
- 关键词：多发性骨髓瘤表观遗传学DNA甲基转移酶
- 探讨白细胞减少症患者T淋巴细胞亚群等六项指标分布特征
- 2015年
- 目的调查了解白细胞减少症患者淋巴细胞亚群等6项指标的分布特征与临床意义。方法选择2013年1月至2014年12月期间在同济大学附属第十人民医院住院治疗的白细胞减少症患者103例（外周血WBC计数均＆lt;4.0×10~9/L）,按骨髓穿刺的粒系增生活跃与否分为骨髓粒系增生欠活跃组（阳性组23例）和骨髓粒系增生活跃组（阴性组80例）。回顾性分析两组白细胞减少症患者中的C反应蛋白（C reactive protein,CRP）、乳酸脱氢酶（lactate de hydrogenase,LDH）、血清总补体活性（complement Hemolytic activity,CH50）、补体C3（complement 3,C3）、红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate,ESR）、淋巴细胞亚群百分比等指标的差异与分布特征;及评价其对骨髓穿刺辅助诊断白细胞减少症原因的效能。结果 T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞和自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）在阳性组分别为（62.42±3.21）%、（21.39±2.39）%、（22.94±1.81）%,阴性组分别为（72.00±3.97）%、（29.73±4.02）%、（11.32±0.38）%,两组差异有统计学意义（t值分别为3.791、3.268、8.658,前两项P值均＆lt;0.05,后一项P＆lt;0.001）。阳性组的CRP（P_（50）=14.70）高于阴性组（P_（50）=4.25,U=7.008,P=0.03）。结论白细胞减少症骨髓粒系增生欠活跃患者中T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞比例降低、NK细胞比例升高,CRP表达增高,对辅助判断白细胞减少症患者骨髓穿刺粒系增生欠活跃有参考价值。
- 黄静沁许闪闪郑特孙奋勇
- 关键词：淋巴细胞亚群C反应蛋白
- 5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响
- 2009年
- 目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR)对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-tim e RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10-6、5×10-6、1×10-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显:5×10-6、1×10-5mol/L组分别为(34.09±0.79)、(28.55±1.76),与对照组(42.78±1.23)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。
- 冷俊翁文浩李智许闪闪李晶华
- 关键词：5-AZA-CDRAPAF-1基因膀胱肿瘤DNA甲基化
- miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭被引量：3
- 2012年
- 目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。
- 王明丽李智徐晋豫翁文浩许闪闪
- 关键词：MIR-34AYY1细胞增殖肾癌
- 血清游离脂肪酸水平与冠心病心肌损伤程度相关性研究被引量：9
- 2010年
- 目的探讨血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)作为一种非酯化的脂肪酸对心肌是否存在损伤作用,以及总胆固醇(total cholesterol,TCHO)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度胆固醇(high densisty lipoprotein,HDL)、低密度胆固醇(low densisty lipoprotein,LDL)对心肌损伤的影响。方法抽取189例冠心病患者血样,根据心肌肌钙蛋白T检测结果,将研究对象分为心肌损伤组(心肌肌钙蛋白T>0.08 ng/L)88例与非心肌损伤组(心肌肌钙蛋白T正常)101例,抽取正常人群93例为对照组,利用酶终点法测FFA,酶法测TCHO,GPO-PAP法测TG,免疫比浊法测HDL和LDL。结果冠心病心肌损伤组冠心病心肌损伤组FFA水平显著高于非心肌损伤组和对照组(P<0.05),而血样中其他指标如TCHO、TG、HDL、LDL差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线发现FFA曲线下面积为0.89。以0.65作为Cutoff值时,FFA诊断灵敏度可达71%,特异度达90%。冠心病患者的血脂正常组较血脂异常组的心肌损伤发生率显著降低(P<0.05),进一步统计分析显示FFA、TCHO、TG、LDL、HDL无相关性。结论血清FFA水平与心肌损伤明显相关,可作为冠心病患者心肌损伤的预测指标,而TCHO、TG、HDL、LDL与心肌损伤关系较小。FFA可成为监测心肌损伤独立的危险因素。
- 丁黎明翁文浩许闪闪沈振亚李智
- 关键词：游离脂肪酸心肌损伤甘油三酯冠心病
- Toll样受体mRNA在人肾癌细胞786—0和正常肾细胞HK-2中的表达及意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨Toll样受体（TLR）在肾癌发生、发展中的作用和意义。方法培养人肾癌细胞786-0（786-0实验组）和正常肾细胞HK-2（HK-2对照组）。实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PcR）检测TLR1～TLR10mRNA在786-0实验组及HK-2对照组细胞中的表达规律。结果786-0实验组和HK-2对照组细胞均表达TLRl～TLR6、TLR8～TLR10，而不表达TLR7。TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在786--0实验组表达均高于HK-2对照组细胞[（4．40±0．19）×10^-2、（1．77±0．24）×10^-2、（5．03±0．62）×10^-2、（3．93_4-0．86）×10^-2、（6．11±0．48）×10^-2、（1．89±0．47）×10^-2、（2．84±0．57）×10^-2比（0．84±0．27）×10^-2、（0．40±0．04）×10^-2、（0．95±0．73）×10^-2、（0．56±0．25）×10^-2、（0．49±0．16）×10^-2、（0．20±0．07）×10^-2、（0．27±0．08）×10^-2，P〈0．01]，而TLR3、TLR9在786-0实验组与HK-2对照组细胞的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TLR在人肾癌细胞和正常肾细胞细胞中的表达有差异，TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在人肾癌的发生、发展中可能发挥一定的作用。
- 于慧许闪闪程钦全何丽梅李智
- 关键词：肾肿瘤TOLL样受体荧光定量PCR
