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许荣华: 作品数：35 被引量：117H指数：6; 供职机构：海南医学院附属医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金海南省自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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结肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu中microRNA表达的初步研究被引量：4: 2013年; 目的建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关的microRNA。方法采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线;用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用microRNA芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中mi-croRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证。结果 LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,耐药株LoVo/5-FU细胞相对于其亲本LoVo细胞的耐药倍数为8.08。microRNA芯片的结果显示,耐药株LoVo/5-FU细胞与亲本LoVo细胞比较,有10个microRNA表达上调,13个microRNA表达下调;实时荧光定量pcr的结果进一步证实mir-210、mir196a、mir-1281在LoVo/5-FU中显著上调,而let-7f、mir-1228显著下调,其中mir-210在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异。结论 LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,筛选获得的差异miRNA可能通过调控其靶基因而参与人结肠癌细胞对5-Fu的耐药,为进一步研究microRNA在结肠癌耐药机制中的作用奠定基础。; 何冬雷谢小明刘玉夏立平许荣华; 关键词：结肠癌 5-氟尿嘧啶 LOVO

MicroRNA在胃癌中相关靶基因的研究进展被引量：3: 2016年; 胃癌是最常见的消化系统恶性肿瘤,在我国无论是发病率还是死亡率都位居前列。胃癌的发生和发展不仅是多因素参与的复杂病理过程,也是基因和环境共同作用的结果,就目前来讲缺乏有效的治疗方法。microRNA(miRNA)是一类进化上保守的非编码RNA,它的存在与胃癌的发生和发展有着密切的关系。近年来,有很多国内外学者经实验研究阐明了多种在胃癌组织中与miRNA有关的相关靶基因,并发现其靶基因与胃癌细胞的增殖、转移、侵袭、凋亡及对胃癌治疗的化疗药敏、放疗增敏有密切联系。如果在了解相关靶基因的基础上进行基因治疗或者运用药物靶向治疗的方法来抑制或者促进靶基因的表达,或许将会使胃癌的预防、诊断和治疗达到新的高度。; 邓慧鸣刘秘许荣华; 关键词：胃癌增殖凋亡

腺病毒介导MDA-7/IL-24选择性杀伤肝癌细胞HepG2的研究被引量：5: 2006年; 目的观察MDA-7/IL-24基因对肝癌的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2;用RT-PCR法观察MDA-7/IL-24基因的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度;4甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用;Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测2种细胞的凋亡;用流式细胞仪检测细胞周期。结果复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2和正常细胞L02中的高效表达;细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白的表达;MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞生长并可促进肝癌细胞的凋亡;MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞于G2/M期,能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无阻滞作用和毒性作用。结论复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,促使细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2,而对正常肝细胞L02无任何毒性作用。; 王从俊薛新波易继林陈堃郑建伟曾建平许荣华王炜煜吴在德; 关键词：基因疗法

短发夹状RNA抑制SMYD3基因在HepG2细胞中的表达被引量：5: 2006年; 目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。; 徐鋆耀陈立波徐鋆阳杨镇魏海燕许荣华; 关键词：RNA 肝细胞

Aβ肽损伤Alzheimer病细胞模型的建立及Cox-2的表达: 2010年; 目的研究以β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤原代培养海马神经元建立Alzheimer病细胞模型的方法及Cox-2在模型细胞中的表达。方法以原代培养的SD大鼠海马神经元为研究对象,以不同浓度Aβ25-35造海马神经元损伤模型,通过四唑盐(MTT)比色试验检测测定细胞存活率,免疫细胞化学法测定Cox-2的表达。结果 Aβ25-35在终浓度在5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时神经元形态有明显的变化,细胞存活率明显下降,Cox-2的表达增加,与对照组相比较差异有显著性(P<0.01)。结论 Aβ25-35诱导了原代培养海马神经元变性、死亡,使Cox-2的表达增加。Cox-2的异常高表达可能介导了神经元的损伤。; 郑俩燕许荣华倪志姚茂忠蔡美华王埮陈志斌; 关键词：海马神经元 Β淀粉样蛋白 ALZHEIMER病细胞培养

外源性导入抑癌基因FHIT对肝癌细胞Hep3B生长的影响被引量：2: 2007年; 目的:研究外源性人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的高表达对人肝癌细胞Hep3B生长的影响.方法:构建一个包含FHIT基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/FHIT,体外转染人肝癌细胞Hep3B,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白印迹(Western blot)分别检测目的基因不同水平的表达,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术检测细胞转染前后的细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:转染pcDNA3.1(+)/FHIT后Hep3B细胞的FHIT-mRNA,FHIT蛋白表达阳性,转染后对Hep3B细胞的生长有抑制作用,早期细胞凋亡增加,与对照组比较差异有显著性(72.23±0.84 vs 54.36±0.78,53.17±0.52,P<0.05).结论:FHIT基因通过诱导肿瘤细胞发生凋亡并导致其发生G_1期阻滞,在肿瘤基因治疗方面发挥作用.; 许荣华郑武平孟津夏立平易继林; 关键词：肝癌基因治疗脆性组氨酸三联体

FHIT基因蛋白的表达与肝癌的临床关系被引量：2: 2004年; 目的　探讨脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因蛋白在原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )中表达的临床意义。方法　采用免疫组织化学S -P法检测FHIT基因蛋白在 46例肝癌组织及癌旁组织和 10例正常肝组织中的表达。结果　FHIT基因蛋白在正常肝组织及癌旁组织均为阳性表达 ,显著高于在肝癌中的阳性表达率 5 6.5 2 %。FHIT基因蛋白的丢失与肿瘤是否有门静脉癌栓、肿瘤组织分化程度明显相关 (P <0 .0 5 ) ,与肿瘤大小、有无包膜、甲胎蛋白是否阳性、是否感染乙型肝炎病毒、是否合并肝硬化等因素均无明显的相关性。结论　FHIT基因蛋白缺失在肝癌组织中是频发事件 ,且FHIT基因蛋白的缺失和肝癌的临床表现及预后有一定的关联。; 许荣华易继林; 关键词：FHIT基因肝细胞肝癌免疫组织化学

大鼠肝卵圆细胞向肝癌细胞分化过程中microRNA的变化被引量：1: 2014年; 目的利用生物芯片技术分析大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达变化,筛选调控分化的microRNAs,探讨肝癌发生的起源机制。方法用化学致癌剂3’-Me-DAB诱发SD大鼠肝卵圆细胞增生,采用密度梯度离心法分离、纯化肝卵圆细胞,行体外培养使其恶性分化并进行鉴定。提取分化过程中的microRNA进行microRNA基因芯片杂交,获得卵原细胞恶性分化过程中microRNA表达谱。同时利用种植模型及大鼠Y染色体特异性PCR技术,验证卵圆细胞可恶性分化为肝癌细胞。结果①激光扫描共聚焦显微镜显示,肝卵圆细胞胞浆和胞膜表达干细胞标志Thy-1及C-kit;②通过基因微阵列分析,卵原细胞恶性分化过程中有22个miRNA的改变显著,其中19个表达上调,3个表达下调;③卵原细胞种植模型的大鼠肝癌组织具有SRY基因的电泳条带。结论特定microRNA可能对大鼠肝卵圆细胞分化为肝癌细胞过程起到关键作用。; 许荣华何冬雷孟津夏立平王健; 关键词：肝卵圆细胞分化 MICRORNA

microRNA在两种不同来源的肝卵圆细胞中的差异表达被引量：2: 2014年; 目的分离纯化两种不同模型来源的卵圆细胞(HOCs)并初步筛选差异表达的microRNA。方法采用2-乙酰氨基芴(2-AAF)和2/3肝切除(PH)建立SD大鼠HOCs增殖模型,用化学致癌剂3'-甲基-4-二甲基偶氮苯(3'-Me-DAB)诱发SD大鼠肝卵圆细胞增生模型;分离纯化并鉴定两种不同模型来源的大鼠肝卵圆细胞;用microRNA芯片技术检测HOCs/AAF与HOCs/DAB中microRNA的表达谱,筛选差异表达的microRNA;用实时荧光定量PCR方法对筛选出的部分差异microRNA进行验证。结果 1激光扫描共聚焦显微镜显示,两种肝卵圆细胞胞质和胞膜均表达干细胞标志Thy-1及C-kit。2microRNA芯片的结果显示,HOCs/DAB与HOCs/AAF比较,有10个microRNA表达上调,8个microRNA表达下调。3实时荧光定量PCR结果进一步证实mir-210、mir92b、mir-1281在HOCs/DAB中显著上调,而mir-181、mir-1228显著下调。结论两种不同模型来源的肝卵圆细胞存在着显著差异表达的microRNA,为研究肝癌细胞可能来源于肝卵圆细胞HOCs/DAB提供线索。; 许荣华何冬雷孟津夏立平王健; 关键词：肝卵圆细胞分化 MICRORNA

门静脉高压症患者脾动脉局部血红素氧合酶表达异常及意义被引量：4: 2005年; 目的研究血红素氧合酶(HO)在门静脉高压症患者脾动脉的表达,探讨血红素氧合酶-内源性一氧化碳系统(HO-CO)在门静脉高压症发病机制中的作用。方法应用半定量逆转录- 聚合酶链反应(RT—PCR)检测HO-1、HO-2 mRNA表达,Western blot进一步检测其蛋白表达。试验组为门脉高压症并行择期脾切除加贲门周围血管离断术患者,同期外伤性脾破裂行脾切除术患者为对照。结果 HO-1mRNA及蛋白仅在门静脉高压症患者组的脾动脉表达,在非门脉高压症患者组不表达,吸光度比值半定量分析结果相比差异都有统计学意义(mRNA 0．81±0．12 vs 0．03± 0．00,P<0．01,蛋白1．56±0．25 vs 0．04±0．01,P<0．01);而HO-2 mRNA及蛋白在门静脉高压症患者组与非门脉高压症患者组都有表达,且吸光度比值半定量分析相比差异均无统计学意义 (mRNA 0．58±0．09 vs 0．64±0．12,P>0．05,蛋白0．92±0．12 vs 0．84±0．14,P>0．05)。结论 HO-CO系统,尤其是HO—1在门静脉高压症发生发展中起重要作用。; 徐鋆耀杨镇孙政李涛许荣华; 关键词：高血压门静脉血红素氧合酶门静脉高压症脾动脉

许荣华

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