许文军 作品数:104 被引量:414 H指数:12 供职机构: 浙江省海洋水产研究所 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 浙江省科技厅项目 浙江省科技计划项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
网箱养殖大黄鱼假单胞菌病病原的分离与鉴定 被引量:29 2008年 浙江宁波、台州等地相继发生网箱养殖大黄鱼的大量死亡,主要症状为脾脏、肾脏有许多白色结节,大小为0.1~1mm。从病鱼体内分离出致病力极强的菌株GYCWS,人工感染试验证实为大黄鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)为8.5×104CFU/ml。对该细菌进行了形态、生理生化特性的测定,并进行了全自动微生物分析系统(ID32GN)及16S rRNA分子鉴定。经PCR扩增获得了大小约1.5Kb的16S rRNA部分基因片段,产物经回收纯化,克隆到pMD18-T载体,转化大肠杆菌TG1,对阳性克隆子进行酶切及PCR鉴定确认阳性重组质粒,将测定的序列递交NCBI进行BLAST同源序列比对,与恶臭假单胞菌的16S rRNA基因(DQ201403、AY785244)具有较高的同源性(99%),该序列在Genbank上的登录号为DQ648602。结合细菌的生理生化特性,GYCWS菌株属于恶臭假单胞菌(Pseudo monas putida)。药敏试验结果表明,病原菌GYCWS对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、氟派酸、四环素、链霉素药物敏感。 沈锦玉 余旭平 潘晓艺 许文军 尹文林 曹铮关键词:大黄鱼 病原 恶臭假单胞菌 RRNA 引起三疣梭子蟹“牛奶病”的酵母菌18S rRNA序列测定与分析 被引量:6 2008年 "牛奶病"是近年来秋、冬季三疣梭子蟹暂养过程中发生的一种危害较大的流行性疾病,患病蟹的体液和肌肉组织中有大量的酵母菌。根据GenBank中的假丝酵母菌的18S rRNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增患"牛奶病"三疣梭子蟹上分离到的酵母菌的部分18S rRNA基因,PCR产物经纯化回收后克隆入pUCm-T载体,筛选出阳性克隆进行测序,测序结果与已发表的序列进行同源性比较,同时以蟹源弧菌和寄生虫的DNA样本为对照。结果,所测序列与GenBank中假丝酵母菌的18S rRNA基因的同源性为84.4%~100%。同时,仅从试验用酵母菌DNA样本中扩增出了532bp左右的特异性片段,其他对照样本均未出现扩增反应。说明本实验建立的检测酵母菌的PCR方法有效。 施慧 许文军 徐汉祥 史海东关键词:三疣梭子蟹 假丝酵母菌 RRNA 哈维氏弧菌胞外蛋白酶基因的克隆表达及免疫原性 被引量:3 2010年 根据实验室分离的大黄鱼弧菌病主要病原菌哈维氏弧菌(Vib rio harveyi)GYC1108-1株的胞外蛋白酶基因序列,设计胞外蛋白酶基因(ΔProA)特异性引物,扩增获得1552bp的ΔProA基因,克隆于pUC57-T载体;将ΔProA基因亚克隆到原核表达载体pET-28a进行融合表达,SDS-PAGE电泳检测发现,ΔProA融合蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,分子量大小约55kD,诱导5h的表达蛋白产量约占细菌总蛋白的21%。Western blot分析,表达的55kD蛋白具有较高免疫原性。用纯化的ΔProA融合蛋白对大黄鱼进行免疫试验,结果免疫保护率达到75%。 潘晓艺 沈锦玉 余旭平 许文军 曹铮 尹文林 郝贵杰关键词:哈维氏弧菌 胞外蛋白酶 原核表达 包涵体 大黄鱼 深水网箱网衣防污剂筛选试验 被引量:18 2003年 许文军 徐君卓 陈连源 张浩明 杨军关键词:深水网箱 水温 海捕三疣梭子蟹一寄生性动基体目原生动物的初步研究 被引量:3 2013年 从自然海区捕获的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)上检测到一种寄生性原生动物,主要寄生于蟹血淋巴液中。通过普通光学显微镜检发现,病蟹的血淋巴细胞急剧减少,代之以大量的原生动物,此原生动物可以被中性红染液着色。运用PCR技术对该原生动物进行了18S rDNA基因和ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列扩增,同时对扩增片段进行了序列测定,应用软件MEGA 3.1和DNAStar对测序结果进行了同源性比较和系统发育树构建。18S rDNA同源性比较结果显示:获得的18S rDNA序列与动基体目(Kinetoplastida)新波豆科(Neobodonidae)新波豆属(Neobodo)的同源性最高,达88.3%;获得的18S rDNA序列和GenBank中已登录新波豆属的其它原虫的18S rDNA序列在系统发育树中位于同一集群,初步确定该原生动物为新波豆虫(Neobodo sp.),是原生动物门(Protozoa)鞭毛虫纲(Flagellata)动基体目新波豆虫科新波豆属的一员。 施慧 谢建军 王庚申 许文军关键词:鞭毛虫 血卵涡鞭虫 RDNA基因 ITS基因 溶藻弧菌诱导对三疣梭子蟹血淋巴非特异性免疫水平的影响 被引量:8 2011年 以平均体质量为(162±26)g雌性三疣梭子蟹为试验对象,注射组从游泳足第一关节基膜注射200μL浓度为2.4×107 CFU/mL的溶藻弧菌菌悬液,对照组注射等量无菌生理盐水。各组在注射0、24、48、72、96 h后随机取9只三疣梭子蟹,从游泳足基膜部位抽取血淋巴,测定血淋巴的血细胞总数、大颗粒细胞比例、血清蛋白、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶等非特异性免疫指标。结果表明,遭受低剂量的溶藻弧菌侵袭后,三疣梭子蟹血细胞总数迅速降低(P<0.05),与对照组相比降低36%,而大颗粒细胞比例则先上升(P<0.05),72 h后恢复至正常水平;血清蛋白含量则无明显变化;血清中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性也迅速增加,并分别在24、72 h达到峰值(P<0.01,P<0.05),在96 h后两种酶的活性均恢复至对照组水平;血清中一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合成酶活性则稳步增加,并在96 h达到峰值(P<0.01)。研究证实低剂量的溶藻弧菌能刺激三疣梭子蟹调动血细胞、酸、碱性磷酸酶、一氧化氮合成酶系统进行免疫防御,但是各非特异性免疫指标大多具有明显的时间效应,响应速度有较大差异。 谢建军 许文军 施慧 查智辉关键词:三疣梭子蟹 溶藻弧菌 血淋巴 酸性磷酸酶 一氧化氮 一氧化氮合成酶 微生态制剂施用频率对虾蟹生长及混养池塘水质的影响 被引量:3 2015年 在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和日本对虾(Penaeus japonicas)混养池塘中按不同频率(5 d、10 d、15 d)施用微生态制剂,每10 d测量1次水质指标和细菌数量,试验结束时,测量养殖生物的存活率和特定生长率,试验共持续60 d。结果显示,3个试验组养殖生物的存活率差异不显著(P>0.05),特定生长率差异显著(P<0.05);试验结束时,3个试验组的水体COD分别较对照组降低了37.78%、33.33%、16.67%,氨氮分别降低了43.12%、33.11%、28.68%,亚硝酸盐氮浓度分别降低了68.42%、49.03%、34.63%,弧菌总数分别降低了58.61%、49.76%、39.34%。研究表明,按照水质净化效果和经济效益指标,在梭子蟹和日本对虾混养池塘中以每10 d施用1次微生态制剂为佳,养殖中后期可适当提高施用频率,以获得更好的水质净化效果。 王庚申 施慧 谢建军 汪玮 许文军关键词:微生态制剂 三疣梭子蟹 日本对虾 应用PCR方法检测患“黄水病”锯缘青蟹中的血卵涡鞭虫 被引量:11 2008年 "黄水病"是目前锯缘青蟹养殖过程中的主要疾病之一,病蟹主要症状表现为肌肉白浊,体液呈土黄色或浊白色牛奶状。因该病流行范围广、发病率和死亡率高,给青蟹养殖业主造成巨大经济损失,严重地影响了青蟹养殖的健康发展。本研究从病蟹体液中发现大量疑似血卵涡鞭虫的寄生原虫,应用已建立的梭子蟹血卵涡鞭虫病的PCR检测方法对患"黄水病"青蟹进行检测。结果从患病青蟹组织的DNA中扩增出产物大小为585bp的特异性目的片段,经序列分析比较,与三疣梭子蟹上发现的血卵涡鞭虫的序列同源,同源性达99.7%。综合病原流行病学调查、组织病理学、电镜观察等分析结果,初步确定血卵涡鞭虫是引起养殖青蟹"黄水病"的重要病原。 施慧 许文军 李鹏飞 徐汉祥 史海东关键词:锯缘青蟹 血卵涡鞭虫 ITS1 PCR 设置不同隐蔽物对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)蜕壳、生长及养殖性能的影响研究 本研究选择了两种不同类型的材料(聚乙烯网和塑料筐)作为潜在的隐蔽物,以评估其对三疣梭子蟹的蜕壳、生长和养殖性能的影响。隐蔽物1(S1)是由聚乙烯网片制成的"Z"形体,隐蔽物2(S2)是由半个塑料筐制成。结果发现:大多数三... 何杰 许文军 谢建军 施慧 汪玮 王庚申关键词:梭子蟹 隐蔽物 蜕壳 养殖性能 文献传递 海捕三疣梭子蟹暂养育肥技术 2023年 海捕三疣梭子蟹(以下简称海捕蟹)暂养育肥是梭子蟹养殖生产环节中的重要组成部分,是在养殖生产实践中逐渐发展而形成的能够高效利用野生海捕蟹资源的生产方式。海捕蟹暂养育肥技术主要是利用每年秋季9-11月自然海区的海捕蟹资源数量大、价格低的优势,将收购后的海捕蟹进行一段时间的暂养育肥后再次上市。此时的梭子蟹体肥膏满,具有营养价值高、市场价格高的特点。养殖从业者可利用暂养育肥前后的市场价格差来获得较高的养殖收益。 李彬 何杰 许文军关键词:三疣梭子蟹 自然海区 暂养育肥 生产环节