董丽萍
- 作品数：34 被引量：154H指数：6
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术机械工程更多>>
- 大鼠星形胶质细胞体外培养划伤模型的建立
- 目的建立大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AST）体外培养划伤模型。方法取新生1-2 d Wistar大鼠皮层进行AST原代培养,约10天后传代,传代培养至10天左右,用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化染色检测鉴...
- 师忠芳袁芳董丽萍徐立新韩明
- 关键词：星形胶质细胞细胞培养乳酸脱氢酶
- 文献传递
- LY367385对谷氨酸钠及缺糖缺氧引起的培养小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用被引量：1
- 2005年
- 目的观察LY367385对谷氨酸钠(Glu)及缺糖缺氧(OGD)引起的小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用。方法以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出、光镜下细胞形态变化为指标,观察培养液中加入Glu或因OGD引起的神经元损伤,以及LY367385的保护作用;用免疫细胞化学和免疫荧光染色法检测神经元代谢型谷氨酸受体1α(mGluR1α)的表达。结果OGD1h或0.1mmol/L的Glu可明显造成神经元损伤,使LDH漏出明显增加(P<0.01);LY367385(50μmol/L)可明显拮抗OGD或Glu引起的神经元损伤,使LDH漏出明显减少(P<0.01);免疫组化检测显示体外培养神经元mGluR1α阳性表达。结论OGD或Glu可能通过激活皮层神经元mGluR1α引起神经元损伤,LY367385通过拮抗mGluR1α保护神经元。
- 董丽萍韩明袁芳
- 关键词：神经元谷氨酸缺糖缺氧
- 人颞叶内侧癫痫海马组织星形胶质细胞Syntrophin的表达变化被引量：2
- 2017年
- 目的观察人颞叶内侧癫痫(MTLE)海马组织星形胶质细胞syntrophin的表达变化。方法 2015年4月至2016年7月,17例癫痫患者手术切除的海马组织,依据苏木素-伊红(HE)染色及胶质原纤维酸性蛋白、神经元核抗原免疫组织化学染色结果,分为MTLE组13例和非MTLE组4例。免疫荧光双重组织化学法及免疫荧光组织化学法观察syntrophin的表达。结果 MTLE组星形胶质细胞大量增生,神经元明显减少。syntrophin在星形胶质细胞膜及足突处表达。与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin在血管周围星形胶质细胞足突处分布减少,在其他部位分布增加。图像分析显示,与非MTLE组相比,MTLE组syntrophin蛋白量显著增多(t=5.421,P<0.001)。结论海马组织syntrophin在星形胶质细胞上的分布及其整体表达变化可能与MTLE发生相关。
- 王晓璇孙振荣吴敏师忠芳闫旭徐立新董丽萍杨少华袁芳
- 关键词：颞叶内侧癫痫海马星形胶质细胞SYNTROPHIN
- 脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默星形胶质细胞AQP4基因
- 2014年
- 目的明确脂质体RNAiMAX(lipofectamine RNAiMAX)是否可以介导小干扰RNA(siRNA)转染入原代培养星形胶质细胞并实现水通道蛋白4(AQP4)基因沉默。方法利用原代培养的Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪,观察lipofectamine RNAiMAX是否能介导Cy3标记的siRNA转染入细胞内,以及RNAiMAX浓度和siRNA浓度对转染效率的影响;利用Real-time PCR方法检测AQP4 siRNA转染的基因沉默效果。结果倒置荧光显微镜和Tecan酶标仪检测发现,随着siRNA和RNAiMAX浓度的增加,转染细胞荧光强度随之增加(n=6);Real-time PCR检测结果显示,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA以及6ml/L RNAiMAX和60nmol/L AQP4 siRNA转染星形胶质细胞24h、48h、72h时,AQP4 mRNA水平均降低80%以上(n=6)。结论 Lipofectamine RNAiMAX可以介导siRNA转染入原代培养星形胶质细胞中并实现AQP4基因的沉默,3ml/L RNAiMAX和30nmol/L AQP4 siRNA即可达到理想的沉默效果。
- 张伟徐立新杨少华师忠芳董丽萍袁芳
- 关键词：星形胶质细胞水通道蛋白4SIRNA转染基因沉默实时定量聚合酶链反应
- 大鼠星形胶质细胞无血清培养方法的研究被引量：1
- 2018年
- 目的 探索应用无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代培养及传代培养的方法.方法 取出生24 h内Wistar大鼠大脑皮质组织,机械吹打分散为单细胞后在无血清培养基中进行原代培养.细胞传代时分别使用乙二胺四乙酸（EDTA）-胰酶或胰酶作为消化液,浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）终止消化作用,按照1∶2或1∶3的比例传代.显微镜下观察细胞生长状态,胶质纤维酸性蛋白（GFAP）细胞免疫荧光染色方法鉴定细胞表型,MTF法检测传代细胞增殖情况.结果 细胞悬液静置15 min后更换新的无血清培养基培养,7d后显微镜下可见细胞生长良好,折光性强,胞体小而突起长;细胞免疫荧光染色鉴定显示＞95％的细胞为GFAP阳性细胞.与应用SBTI终止胰酶反应时未进行离心比较,低温、低速离心（4℃、3 000 ×g）3 min后,传代细胞可在无血清培养基中生长正常并增殖.MTT检测结果显示,EDTA-胰酶消化效果优于胰酶（A值分别为0.290±0.007、0.270±0.006,P＜0.010）;使用浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI终止消化（A值分别为0.290 ±0.013、0.290±0.017,P=0.820）及以1∶2或1∶3比例传代（A值分别为0.340±0.070、0.320 ±0.030,P =0.770）,传代星形胶质细胞数量的差异均无统计学意义.结论 本研究建立无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代及传代培养的方法,为避免血清干扰更好地开展体外星形胶质细胞功能的研究提供了新的细胞模型.
- 徐立新贾梅师忠芳董丽萍闫旭王玉娇陈烨袁芳
- 关键词：星形细胞培养基无血清原代细胞培养
- 体外培养大鼠星形细胞的缺糖缺氧性损伤及药物的保护被引量：4
- 1996年
- 本实验用大鼠星形细胞体外培养模型，观察了细胞在不同条件下乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）的漏出。发现当去掉葡萄糖后，细胞缺氧５和７ｈ后ＬＤＨ漏出明显增加，５ｂ为５９．７±２５．３Ｕ／ｍｇ蛋白（对照组２４．７±１６．３，Ｐ＜０．０５），７ｈ为６８．３±８９Ｕ／ｍｇ蛋白（对照组３９．９±２１２，Ｐ＜０．０１）。用３－氧－甲基－［１－￣３Ｈ］－Ｄ－葡萄糖摄取法测量细胞体积，结果显示缺糖缺氧５ｈ后细胞明显肿胀，从对照组的４．１±１．２增加到８．１±３．２μｌ／ｍｇ蛋白（Ｐ＜０．０１）。丹参有效成分７６４－３在０．５至５０μｍｏｌ／Ｌ时能减少缺糖缺氧细胞ＬＤＨ漏出；在５０μｍｏｌ／Ｌ时能减小缺糖缺氧细胞的体积。谷氨酸受体拮抗剂ＤＮＱＸ（６，７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２，３ｄｉｏｎｅ）５０μｍｏｌ／Ｌ能减轻星形细胞肿胀和ＬＤＨ漏出。
- 董丽萍王天佑
- 关键词：星形细胞缺氧细胞体积DNQX药物保护
- 亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用被引量：4
- 2016年
- 目的探讨亚甲基蓝对大鼠局灶性脑缺血再灌注引起血脑屏障破坏的保护作用。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和亚甲基蓝组(n=6)。用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉栓塞1 h再灌注模型。亚甲基蓝组于再灌注即刻及再灌注2 h分别静脉给予亚甲基蓝3 mg/kg、1.5 mg/kg;模型组给予相同体积的生理盐水;假手术组手术操作与模型组相同,不插入线栓,不静脉注射药物。再灌注47 h后HE染色观察大鼠脑缺血周边皮层组织学结构,白蛋白免疫组化染色法检测血脑屏障通透性的变化,免疫组化染色法和免疫荧光双标染色法检测胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和水通道蛋白-4(AQP-4)的表达。结果 HE染色显示,模型组缺血周边大脑皮层的细胞和血管形态不完整,而亚甲基蓝组病理变化减轻;模型组白蛋白、GFAP和AQP-4表达均明显高于假手术组(P<0.01),亚甲基蓝组白蛋白、GFAP、AQP-4表达均低于模型组(P<0.05)。免疫荧光双标染色显示,AQP-4与GFAP在星形胶质细胞上共定位。结论亚甲基蓝可能是通过减轻胶质细胞增生及下调AQP-4表达来改善局灶性脑缺血再灌注损伤引起的血脑屏障破坏。
- 吴敏方庆师忠芳徐立新董丽萍闫旭杨少华袁芳
- 关键词：脑缺血再灌注亚甲基蓝血脑屏障胶质原纤维酸性蛋白水通道蛋白-4
- 人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对5种抗肿瘤药物敏感性的研究
- 2011年
- 目的检测人脑多形性胶质瘤细胞系BT325对顺铂(DDP)、替尼泊甙(VM26)、尼莫斯汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)及长春新碱(VCR)5种临床常用抗肿瘤药物的敏感性,筛选脑胶质瘤化疗敏感药物。方法用含0%、10%及20%胎牛血清的DMEM培养基培养BT325胶质瘤细胞,分别在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h进行细胞计数,绘制细胞生长曲线,以确定细胞生长的最佳血清浓度;采用CCK-8法检测不同血浆峰浓度(PPC)5种药物对BT325胶质瘤细胞活性的影响,计算抗肿瘤药物的抑制率及IC50。结果细胞形态观察及细胞生长曲线显示含10%胎牛血清的DMEM培养基对BT325胶质瘤细胞生长较为适宜。细胞活性检测显示DDP在0.625×PPC(抑制率为51.8%)及以上浓度时可抑制BT325细胞生长,在1.25×PPC(抑制率为75.1%)及以上浓度时BT325细胞高度敏感,且有量效关系;VM26对BT325细胞抑制率均在79.6%以上,为高度敏感,剂量范围广且存在量效关系;VCR各浓度对BT325细胞抑制率为50%左右,但是与药物剂量无关;各浓度ACNU、TMZ对BT325细胞抑制率均在34%以下,无抑制作用。结论 BT325胶质瘤细胞对DDP、VM26敏感,对VCR、ACNU、TMZ不敏感。
- 韩明袁芳董丽萍师忠芳袁辉杨少华
- 关键词：抗肿瘤药药物敏感性
- 比较谷氨酸引起两品种大鼠培养星形胶质细胞肿胀的差异被引量：1
- 2016年
- 目的比较Wistar大鼠及SD大鼠培养星形胶质细胞(AST)对谷氨酸所致细胞肿胀的差异。方法利用新生1 d的Wistar大鼠和SD大鼠进行AST原代及传代培养,传代培养10 d分别给予1、10 mmol/L谷氨酸孵育48 h,通过乳酸脱氢酶释放率检测细胞活性,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色、Image Pro Plus软件测量细胞周长表示细胞体积变化,通过逆转录实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达变化。结果谷氨酸对不同品种大鼠AST活性影响没有差异(P>0.05)。在正常情况下,Wistar大鼠AST周长小于SD大鼠,在给予谷氨酸处理后,均明显大于SD大鼠(P<0.05)。在给予1 mmol/L谷氨酸后,Wistar大鼠AST的AQP4mRNA表达明显高于SD大鼠(P<0.05)。结论 Wistar大鼠AST对谷氨酸所致细胞肿胀较SD大鼠明显,且谷氨酸对两品种大鼠AST上AQP4表达变化的影响存在差异。
- 师忠芳徐立新卢易董丽萍闫旭杨少华袁芳
- 关键词：谷氨酸星形胶质细胞水通道蛋白4
- 成年大鼠脑损伤后神经前体细胞的增殖及迁移(英文)被引量：1
- 2005年
- 背景:成年哺乳类动物中枢神经系统存有神经前体细胞,其基本生物学特性主要包括多向细胞分化和维持自身数量稳定。目的:观察中枢神经系统损伤后神经前体细胞增殖和迁移的反应过程,探讨神经前体细胞在中枢神经系统损伤修复中的作用,设计:随机对照实验。单位:北京市神经外科研究所病理生理研究室。材料:实验在北京市神经外科研究所病理生理研究室完成。选择成年Wistar大鼠67只,随机分为正常对照组7只,损伤后1,3,7,14,30d组,每个损伤组12只。以上每个损伤组再随机分为人工脑脊液组2只,碱性成纤维细胞生长因子组5只和神经营养因子-3组5只。方法:各损伤组制作液压冲击性脑损伤模型,正常对照组仅开颅,不致伤。各损伤组每次腹腔内注射BrdU50mg/kg,处死前2h注入最后一次,其中损伤后1d和3d组每天注入3次,损伤后7d和14d组每天注入1次。碱性成纤维细胞生长因子组每日灌注碱性成纤维细胞生长因子总量360ng,神经营养因子-3组每日灌注神经营养因子-3总量240ng,人工脑脊液组每日灌注液中不含碱性成纤维细胞生长因子和神经营养因子-3,灌注4μL。免疫组织化学方法动态检测各组大鼠脑组织中Nestin和BrdU的表达。BrdU标记方法确定增殖的神经前体细胞;Nestin的表达用于确定神经前体细胞。主要观察指标:Brdu,GFAP+/Brdu+和GFAP-/Brdu+在各组大鼠脑损伤不同时相中的表达。结果:67只大鼠均进入结果分析。①与正常对照组相比较,伤侧皮质、海马及室下区的Nestin阳性细胞数于伤后1d明显增多[(3.1±1.1),0个/视野;(5.5±0.9),(1.3±0.8)个/视野;(8.1±0.9),(2.3±0.8)个/视野,P<0.05],7d达高峰[(7.5±1.2),(10.2±1.5),(13.6±1.2)个/视野],30d消失[0,(1.2±0.9),(2.1±0.8)个/视野]。②伤侧皮质、海马及室下区的BrdU阳性细胞数于伤后3d达高峰[(12.6±1.5),(9.9±1.1),(13.4±1.0)个/视野],而7d以后逐渐减少。③室下区BrdU�
- 张相彤王忠诚董丽萍张亚卓戴钦舜
- 关键词：脑损伤细胞分裂细胞计数溴脱氧尿苷
