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小熊猫蛔虫ITS及5.8S rDNA序列的克隆与分析被引量：1: 2012年; 以广州动物园小熊猫体内分离出的蛔虫为研究对象,运用PCR方法,以保守引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和5.8S序列,并对扩增后的片段进行纯化、克隆至pGEM-Teasy载体、转化、测序和序列分析,以鉴定小熊猫蛔虫的种类。结果显示2条蛔虫样品的ITS及5.8S rDNA序列基本一致,总长为913 bp,样品间序列相似性为99.7%。将序列与GenBank^(TM)公布的相关序列进行比较分析,结果显示2条蛔虫的ITS及5.8S序列与黑熊横走贝蛔虫(Baylisascaris transfuga注册号AB571304)相似性分别为98.1%、98.4%,与大熊猫西氏贝蛔虫(Baylisascaris schroederi注册号JN210912)相似性分别为96.9%、97.1%,与猪蛔虫(Ascaris suum注册号AB571302)相似性分别为89.9%、90.1%,与人蛔虫(Ascaris lumbricoides注册号AB571296)相似性分别为89.8%、90.1%,ITS-1序列与浣熊贝蛔虫(Baylisascaris procyonis注册号AB053230)相似性分别为92.0%、92.3%。研究结果表明小熊猫体内分离的蛔虫可能为贝蛔属蛔虫,从而为蛔虫的进一步分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。; 彭仕明李少基肖建雄陈武; 关键词：小熊猫 PCR扩增

犬瘟热病毒N、F蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备: 2013年; 为了制备犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白的多克隆抗体,试验将犬瘟热病毒N基因、F基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌Rostte(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,将表达的蛋白纯化,免疫SPF级KM小鼠制备抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价,Western-blot检测其反应原性。结果表明:犬瘟热病毒N蛋白、F蛋白在大肠杆菌中高效表达,制备的抗体效价高达1×105,且能特异性识别犬瘟热病毒的N蛋白、F蛋白。; 蒋再学竺薇唐志玲肖建雄罗满林; 关键词：犬瘟热病毒 N蛋白 F蛋白原核表达多克隆抗体

5株猪圆环病毒2型全基因克隆和序列分析被引量：5: 2013年; 为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)流行势态及毒株的基因变异情况,从广东珠三角地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)患病死亡猪中采集淋巴结,将PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上进行增殖培养,成功分离到5株猪圆环病毒2型毒株,分别标记为GD-jm、GD-sz、GD-pz、GD-gj和GD-ss。再从细胞培养物中提取病毒基因组DNA,对5株PCV2分离株全基因组进行PCR扩增并克隆到pMD18-T Simple Vector进行测序,测序结果提交GenBank,登录号分别为JX912914、JX912915、JX945575、JX945576和JX945577。借助相关生物学软件作同源性分析,这5株PCV2基因组长度均为1767bp,其中3株为PCV2b亚型,2株为PCV2d亚型。; 唐志玲肖建雄陈瑞爱罗满林; 关键词：猪圆环病毒2型

东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的PCR检测和序列分析被引量：17: 2013年; 为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料中病毒的种类及进行流行病学分析,我们设计并合成了4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为193 bp,288 bp,312 bp和1088 bp的基因片段,同时对PCR扩增产物进行纯化、克隆至PMD18-T Simple载体、转化、酶切鉴定、测序及序列分析。结果显示设计并合成的4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4均扩增出与目的片段大小相符的明亮条带,分别约为200 bp、290 bp、310 bp、1100 bp;对Fhv3进行单酶切鉴定,出现大小分别约为160 bp、150 bp的2条条带;对Fhv4进行测序及序列分析,与GenBank^(TM)中已公布的猫传染性鼻气管炎病毒毒株(序列号:FJ478159.2)序列相似性为100%,与其他基因序列相似性均较低。本研究首次发现东北虎和华南虎源猫传染性鼻气管炎病毒,可为虎类的饲养管理及疾病的防控提供参考,为虎传染性鼻气管炎病毒的相关研究奠定基础。; 肖建雄单芬黄嘉欣陈武; 关键词：东北虎华南虎 PCR

猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位区基因克隆、分析及原核表达: 2013年; 从患流行性腹泻的病猪小肠中分离猪流行性腹泻病毒(PEDV),设计一对引物用于扩增PEDV S蛋白的抗原表位区,将扩增产物克隆到原核表达载体pET-32a,构建了重组表达质粒pET32a-PEDV-S1;在IPTG的诱导下表达,经SDS-PAGE分析,West ern bl ot t i ng鉴定,结果表明该抗原表位区蛋白得到了重组表达。该研究可为PEDV抗原表位区的相关研究提供参考。; 肖建雄唐志玲罗满林; 关键词：PEDV S蛋白原核表达

复合佐剂的研究进展被引量：1: 2013年; 不断开发新型免疫佐剂,尤其是复合佐剂,是目前疫苗佐剂的主要发展趋势。根据疫苗生产应用的需要,将单一佐剂复合搭配使用,既可发挥各个佐剂的优点,又有互相促进的作用,达到明显增强免疫效果的目的。为适应生产和市场的需求,复合佐剂对动物机体应无副作用,安全有效。本文对复合免疫佐剂的研究现状和应用前景进行了综述,以期为开发研制高效、低毒的复合免疫佐剂提供参考。; 肖建雄罗满林; 关键词：疫苗

华南虎源大肠杆菌的快速鉴定及致病特性的初步研究被引量：11: 2012年; 从患病华南虎分离病原菌,进行快速鉴定,同时以大肠杆菌16S rRNA基因的通用引物和irp2、papC、iucD、tsh、iss毒力基因的特异性引物进行PCR扩增、测序,并将扩增出来的irp2、iucD、iss基因序列与Genbank相应序列进行同源性分析。测序鉴定为大肠埃希氏菌,与传统细菌鉴定方法结果相一致,分离菌携带irp2、iucD、iss毒力基因,从毒力试验得到证实。其序列与Genbank上发表的iucD、iss基因序列同源性分别高达98%、99%,而irp2基因序列的同源性仅为48%。采用16S rRNA基因序列分析法可以对华南虎大肠埃希氏菌感染进行快速鉴定,华南虎源性大肠杆菌同时携带有irp2、iucD、iss 3个毒力基因,可能与其致病性有关系。; 谢和平朱庆艳陈武肖建雄; 关键词：华南虎大肠埃希氏菌 RRNA基因

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肖建雄