目的探讨白细胞介素22(IL-22)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLF)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的影响;并进一步研究IL-22是否与牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)具有协同刺激作用。方法酶消化法结合组织块法原代培养h PDLF,免疫细胞化学染色法鉴定其来源;取第3~5代细胞给予不同浓度(0、5、10、25、50、100 ng/m L)IL-22刺激,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒(CCK-8)进行细胞毒性实验;采用5、10、25 ng/m L IL-22作用于h PDLF 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL、OPG m RNA的表达;随后选择最佳刺激浓度10 ng/m LIL-22,与1μg/m L Pg-LPS分别或协同刺激h PDLF 72 h,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RANKL、OPG m RNA和蛋白水平的表达。采用单因素方差分析对数据进行统计分析。结果 50、100 ng/m L IL-22刺激h PDLF后,细胞活力明显下降(F24 h=15.17,F48 h=76.37,F72 h=24.409,P<0.05);5、10、25 ng/m L IL-22均可上调h PDLF RANKL m RNA表达(F=32.88,P<0.05),但是对OPG m RNA表达无明显影响(F=0.719,P=0.555);10 ng/m L组和25 ng/m L组上调RANKL m RNA表达较5 ng/m L组显著(P<0.05);1μg/m L Pg-LPS亦可显著上调h PDLF RANKL m RNA和蛋白水平的表达;而10 ng/m L IL-22与1μg/m L Pg-LPS协同作用下RANKL m RNA和蛋白表达可进一步显著上调(Fm RNA=36.67,F蛋白=41.24,P<0.05),但是对OPG的表达无明显影响(Fm RNA=0.652,P=0.593;F蛋白=1.271,P=0.313)。结论 IL-22可通过影响h PDLF表达RANKL/OPG参与牙周炎骨破坏,并且与Pg-LPS具有协同作用。
