王海明
- 作品数：10 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 绵羊CD46基因的克隆及真核表达
- 2014年
- 为了研究绵羊CD46蛋白的功能,根据从GenBank数据库获得的绵羊CD46基因的部分cDNA序列设计引物,以绵羊外周血淋巴细胞总RNA为模板,应用RACE方法扩增了绵羊CD46基因的完整开放阅读框序列,利用生物信息学软件对CD46cDNA及CD46蛋白结构进行了预测分析。结果显示,绵羊CD46cDNA序列开放阅读框长1 083bp,编码由360个氨基酸残基组成的多肽,该多肽的理论分子质量为39ku,理论等电点为6.5。对该蛋白结构分析时发现,绵羊CD46第1~42位氨基酸残基为信号肽序列,共有5处N糖基化位点,4处蛋白激酶C磷酸化位点,5处Ⅱ-酪蛋白激酶磷酸化位点,7处N-豆蔻酰化位点。二级结构中无α螺旋,β折叠占26.1%,其余73.9%为转角,该蛋白具有4个结构域,与人源CD46的同源性较高。同时将CD46基因克隆到pCMV-Myc载体中,构建了真核表达质粒pCMV-Myc-CD46;将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞CHO-K1以进行瞬时表达。Western-blot结果显示,CD46基因在真核细胞中成功获得了表达。上述研究结果为以后开展绵羊CD46的功能研究奠定了基础。
- 乔洋洋陈蕾孙铭苑朱学亮王海明窦永喜才学鹏
- 关键词：绵羊免疫印迹
- 适于细胞培养的嵌合IBV H120 S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种适于细胞培养的嵌合IBV H120S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用。本发明的重组病毒是通过以下方法构建得到：用IBV H120株的S1基因膜外区片段置换IBV Beaudette毒株S1基因膜外...
- 郭慧琛孙世琪魏衍全董虎王海明孙德惠刘定祥才学鹏殷宏
- 文献传递
- 超小氧化石墨烯-氧化铁纳米粒子复合材料的可控制备及磁共振成像研究
- 2013年
- 利用超小氧化石墨烯(UGO)作为载体,一步法合成水溶性的超顺磁性氧化铁纳米粒子(UGO-SPIO)。然后利用BSA修饰UGOSPIO,形成具有良好生理稳定性和生物相容性的磁性复合材料(UGO-SPIO@BSA)。普鲁士蓝染色试验及磁共振成像试验显示,UGOSPIO@BSA能很好的标记细胞,而且复合物具有良好的MR成像能力。
- 王海明曹玉华闫丹马宇飞张智军孙世琪郭慧琛
- 关键词：磁性纳米粒子核磁共振成像
- 一种用病毒样颗粒包被量子点的方法
- 本发明公开一种用病毒样颗粒包被量子点的方法，以及用这种方法制备的物质。本发明的方法中，CdSe/ZnS油溶性量子点修饰方法为：将商品化的CdSe/ZnS正己烷溶液，加入到的无水乙醇中，超声处理后，离心弃上清后加入氯仿进行...
- 孙世琪郭慧琛王斌王海明徐进魏衍全孙德惠刘湘涛
- 文献传递
- 口蹄疫病毒Asia1型感染BHK-21细胞的定量蛋白组学分析及验证
- 口蹄疫病毒感染宿主细胞将引起细胞多个基因表达水平的改变.为了揭示口蹄疫病毒的致病机制及病毒宿主之间的相互作用关系,本研究以稳定标记的单型氨基酸定量蛋白组学方法(SILAC)结合LC-MS/MS及生物信息学分析,检测了口蹄...
- 郭慧琛靳野韩世充魏衍全王海明董虎刘湘涛孙世琪
- 关键词：口蹄疫病毒致病机制宿主细胞基因表达
- 文献传递
- 口蹄疫病毒2B蛋白基因的原核表达及其表达产物的细胞毒性分析
- 2014年
- 为了实现口蹄疫病毒非结构蛋白基因2B在原核表达系统中的可溶性表达并分析其生物学活性,采用SUMO融合技术构建带有2B基因的pSMK-2B重组质粒,然后分别把此重组质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)和C43(DE3)中进行诱导表达。通过对比2B蛋白在普通大肠杆菌BL21(DE3)中和抗毒性蛋白的大肠杆菌C43(DE3)中的表达情况,分析了表达蛋白的细胞毒性作用。结果显示,口蹄疫病毒非结构蛋白基因2B只在大肠杆菌菌株C43(DE3)中实现了可溶性表达,表达产物能抑制表达菌的增殖;进一步证实了2B蛋白对大肠杆菌菌株BL21(DE3)和C43(DE3)存在不同水平的毒性作用。本研究获得的可溶性2B蛋白将为其生物学功能的研究提供前提条件。
- 敖大孙世琪董虎徐进孙德惠魏衍全王海明郭慧琛曹随忠
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白可溶性表达细胞毒性
- 一种用病毒样颗粒包被量子点的方法
- 本发明公开一种用病毒样颗粒包被量子点的方法，以及用这种方法制备的物质。发明的方法中，CdSe/ZnS油溶性量子点修饰方法为：将商品化的CdSe/ZnS正己烷溶液，加入到的无水乙醇中，超声处理后，离心弃上清后加入氯仿进行溶...
- 孙世琪郭慧琛王斌王海明徐进魏衍全孙德惠刘湘涛
- 适于细胞培养的嵌合IBV H120 S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种适于细胞培养的嵌合IBV H120 S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用。本发明的重组病毒是通过以下方法构建得到：用IBV H120株的S1基因膜外区片段置换IBV Beaudette毒株S1基因膜...
- 郭慧琛孙世琪魏衍全董虎王海明孙德惠刘定祥才学鹏殷宏
- 文献传递
- 猪瘟病毒P7基因的原核表达及表达产物的寡聚化研究
- 2014年
- 采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表达效果较好。表达产物经Ni柱纯化,可得到纯度较好的目的蛋白。纯化的蛋白置于4℃2d后进行Western-blot检测,发现有多聚体形成;戊二醛交联结果表明,P7蛋白可形成同源寡聚体。此研究结果为进一步研究猪瘟病毒P7基因表达蛋白的性质和功能奠定了基础。
- 孙德惠闫丹董虎魏衍全敖大王海明孙世琪
- 关键词：猪瘟病毒原核表达
- 表达H120 S基因膜外区段的重组鸡传染性支气管炎病毒的拯救被引量：1
- 2014年
- 为探索以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)Beaudette毒株为骨架表达H120纤突蛋白膜外区的可行性,本研究利用RT-PCR技术,扩增得到H120纤突基因膜外区段(1 302bp),将其置换到IBV Beaudette株全长cDNA克隆相应区段,构建了含有上述区段的重组IBV cDNA克隆BeauR-H120(S1)。然后直接将BeauR-H120(S1)作为DNA模板在体外转录出病毒基因组RNA,该转录产物电转入Vero细胞后48h收获细胞继续传代,直至第4代时出现合胞体,拯救获得一株重组IBV(rBeau-H120(S1))。通过RT-PCR方法证明rBeauH120(S1)基因组中包含有完整的H120纤突基因膜外区段。Western-blot试验证实rBeau-H120(S1)的N蛋白有表达,表明重组病毒在Vero细胞内进行了增殖。经连续传代后测定rBeau-H120(S1)的TCID50和EID50,结果显示,该重组病毒在Vero细胞中的滴度可达到105.90±0.22 TCID50/mL,在9日龄SPF鸡胚中生长滴度为106.13±0.23EID50/mL。免疫保护实验表明,在接种重组病毒21d时,鸡群抗体阳性率达到90%,使用强毒株M41(103 EID50/只)攻毒时免疫保护率为85%。本研究采用反向遗传操作技术构建的重组IBV,为进一步研制IBV重组基因工程疫苗奠定了基础。
- 魏衍全郭慧琛王海明孙德惠韩世充孙世琪
- 关键词：传染性支气管炎病毒重组病毒
