王江涛
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划山西省回国留学人员科研经费资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- γ-分泌酶在神经干细胞分化过程中的调节作用
- 2009年
- 背景:Notch信号通路在神经干细胞分化过程中起着关键作用,而γ-分泌酶是Notch信号通路调节的核心环节。目的:对神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性、酶解产物Notch胞内段的生成量以及活性中心早老素1的表达进行检测。设计、时间及地点:细胞学基因水平检测,于2008-10/2009-01在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室完成。材料:清洁级胚龄15d的BALB/c胎鼠由中国药品生物制品检定所提供,质粒Notch1△E-GVP和MH100由瑞典斯德哥尔摩诺贝尔医学学会的Urban Lendahl教授惠赠,荧光素酶质粒pRL-CMV为Promega公司产品。方法:体外分离培养胎鼠脑皮质神经干细胞,传至第5代后,按5×104/cm2密度接种到24孔板,每孔转染200ng MH100,100ng Notch1△E-GVP和2ng pRL-CMV质粒。主要观察指标:利用Gal4-VP16/UAS系统和双荧光素酶报告基因系统测定神经干细胞分化过程中γ-分泌酶的活性;通过Western blot技术检测酶解产物Notch胞内段的生成量;采用实时荧光定量PCR法测定γ-分泌酶活性中心早老素1mRNA的表达。结果:在γ-分泌酶抑制剂DAPT作用下,γ-分泌酶活性呈剂量依赖性降低,与对照组相比,0.1μmol/L DAPT即可对γ-分泌酶活性产生明显的抑制作用(P<0.05),至50μmol/L DAPT时γ-分泌酶活性降低近100倍(P<0.001)。Notch胞内段的生成量也同步减少,与DAPT抑制γ-分泌酶活性呈剂量依赖性的结果一致。与对照组相比,早老素1mRNA表达水平经0.1μmol/L DAPT干预后开始升高,并随着DAPT浓度增加而逐渐升高。结论:神经干细胞分化过程中,γ-分泌酶抑制剂干预后γ-分泌酶活性与酶解产物生成量呈剂量依赖性降低,活性中心基因表达则呈反馈性的同步增高。
- 王江涛杨丽红张悦红解军
- 关键词：Γ-分泌酶早老素1NOTCH神经干细胞分化
- RNA干扰技术对PC12细胞CaMKⅡβ基因表达的影响被引量：2
- 2008年
- 观察RNA干扰表达载体对PC12细胞中CaMKⅡβ基因的抑制作用。构建针对CaMKⅡβ基因的RNAi质粒表达载体,脂质体法转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测其对CaMKⅡβ mRNA及蛋白质水平的影响。构建的质粒表达载体在PC12细胞中抑制了CaMKⅡβ mRNA及蛋白质的表达。与阴性对照组相比,表达质粒产生的siRNA对CaMKⅡβ mRNA的抑制率48h,72h分别为46.40%,64.69%,蛋白抑制率72h约为74.77%。RNAi表达载体可以有效地抑制PC12细胞CaMKⅡβ基因的表达。
- 刘建功王江涛解军“王江涛解军刘建功
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA基因表达CAMKII
