王晓杜
- 作品数：89 被引量：137H指数：6
- 供职机构：浙江农林大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 检测猪病毒性繁殖障碍症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒
- 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种检测猪病毒性繁殖障碍症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括：反转录和预扩增混合液：反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～12所示；其中，反转录引物为12碱基随机...
- 王晓杜宋厚辉吴瑗周莹珊陈琳刘正奎邵春艳章先程昌勇姜胜孙静周彬宋泉江
- 抗伪狂犬病病毒gC抗体制备及其gC蛋白表达被引量：5
- 2011年
- 用纯化的重组蛋白His-gCN813制备抗PRV-gC抗体,并分析伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gC蛋白在真核细胞的表达情况。本研究以提取的病毒基因组为模板,PCR克隆PRV gC全长基因,构建gC真核表达质粒p3xFLAG-gC,在真核细胞中表达gC基因;纯化蛋白His-gCN813制备的抗体,Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测到p3xFLAG-gC转染真核细胞和PRV感染细胞中的gC蛋白。结果表明本试验成功构建了PRVgC基因真核表达系统,获得了特异性抗PRV gC抗体,重组gC真核表达质粒p3xFLAG-gC转染Vero细胞,表达的重组蛋白gC为72 ku,PRV感染Vero细胞,表达的gC蛋白为55、72和94 ku,主要定位在细胞浆,gC蛋白可以作为PRV感染的指示分子,为下一步研究PRV和宿主相互作用及PRV的复制奠定了基础。
- 刘庆伟邱亚峰王晓杜郭林刘超沈阳李向东单虎马志永
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用
- 本发明涉及基因工程和生物酶技术领域，旨在提供一种微生物源抗氧化蛋白酶的制备和应用。该蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明进一步提供了该蛋白酶的制备方法，以及在制备用于抑制机体衰老和细胞凋亡的药物或保健食...
- 宋厚辉程昌勇叶美伶赵碧波邱旸汪渤森王晓杜
- 文献传递
- 细胞自噬与机体免疫机制及抗微生物感染的关系被引量：4
- 2010年
- 细胞自噬作为细胞的一种生理机制,一方面为细胞提供再生资源,一方面也可以作为防御机制抵抗微生物的感染和寄生。本文对它与先天性免疫、适应性免疫的关系做了综述,并探讨了自噬与微生物感染的关系。本文为我们理解细胞自噬在机体抗感染机制中的作用提供了帮助,也为我们研究感染性疾病治疗药物开启新的视野。
- 王晓杜沈阳马志永
- 关键词：细胞自噬先天性免疫适应性免疫
- 山区肉牛生态养殖技术
- 周圻王翀王晓杜何珂游卫云郑俊杰
- 该研究有效解决了浙江山区肉牛生态养殖技术问题：根据山区饲草资源分布和地形特点，实施"山坳自由放牧"、"赶牧"和"轮桩放牧"；因地制宜建牛舍，研制使用肉牛补充饲料；种植黑麦草、青饲玉米，供放牧或制作青贮和干草；生产牛肉风味...
- 关键词：
- 关键词：肉牛
- H3N2亚型猪流感病毒NS2基因表达产物特性分析
- 2014年
- 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS2全长基因,构建NS2基因原核表达质粒pET-28a-NS2和真核表达质粒p3xFLAG-CMVNS2,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS2基因,并制备抗NS2多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS2转染表达NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。结果表明:经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS2在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS2蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS2多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS2蛋白、转染Vero细胞表达的NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。间接免疫荧光发现NS2蛋白主要定位于细胞质。本试验为进一步研究NS2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。
- 郭林王晓杜刘庆伟沈阳邱亚峰李向东罗满林马志永
- 关键词：猪流感病毒NS2克隆特性分析
- 能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒
- 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒中包括：预扩增引物混合液，含有序列如SEQ ID NO：1～14所示预扩增引物；探针混合液，含有序列如SEQ ID NO：1...
- 周莹珊邵春艳宋厚辉王晓杜陈琳姜胜宋泉江周彬杨杨杨永春孙静程昌勇
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定
- 2011年
- 构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性。人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因。将扩增的基因构建到pET 28(a)质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot鉴定HA蛋白的反应原性。通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础。
- 贾园沈阳邱亚峰史子学邵东华王晓杜邓绪芳王皓婷赵福广
- 关键词：甲型H1N1流感病毒HA蛋白原核表达
- 兽用疫苗免疫佐剂及其制备与应用方法
- 本发明涉及兽用生物制品领域，旨在提供一种兽用疫苗免疫佐剂及其制备与应用方法。该佐剂是由水溶性碳酸钙、聚山梨酯80、2?苯氧基乙醇、壳寡糖、黄单胞菌多糖和去离子水混合而成；水溶性碳酸钙与去离子水的重量比为0.001％?0....
- 宋厚辉邵春艳程昌勇王晓杜姜胜杨梦华杨杨杨永春章先孙静卫芳芳
- 文献传递
- 猪 Siglec-10基因的克隆与生物信息学分析
- 2014年
- 为了研究猪Siglec-10(pSiglec-10)的分子生物学特征,利用Ensemble网站提供的预测序列(ENSSSCT00000032460)设计一对特异性引物,采用RT-PCR技术,克隆pSiglec-10分子的全长CDS区,经过测序比较鉴定正确后,对该分子的基本特征进行分析;构建截短pSiglec-10的原核表达载体,另将该分子的CDS区全长克隆至真核表达载体pcDNA3.1-3′FLAG,将重组质粒转染至PK-15和Marc-145细胞中分析其表达定位特征。结果克隆的pSiglec-10分子的全长CDS为2 127bp,编码709个氨基酸;pSiglec-10基因序列与猴的同源性最高,同源性达73.6%,与鼠的同源性为66.9%;与人的同源性为62.5%,氨基酸序列的同源性分别为58.9%、69.4%和65.3%;pSiglec-10C端的ITIM区域和磷酸化位点高度保守;pSiglec-10分子具有较好的抗原特性和亲水性;该分子主要表达定位在细胞浆中,在Marc-145细胞中呈不连续的点状分布于细胞浆,细胞核周围荧光强度较强。pSiglec-10分子全长CDS区的克隆和分析将对该分子的功能研究提供一定的理论依据。
- 张毅张晏王晓杜方维焕温贵兰
- 关键词：分子克隆真核表达生物信息学分析
