王怡飞
- 作品数：12 被引量：7H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 犬细小病毒分离株VP2基因进化分析
- 犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)已演变出CPV-2、CPV-2a、newCPV-2a、CPV-2b、newCPV-2b、CPV-2c等基因亚型。为了进一步了解犬细小病毒在中国的流行及其分子进化，我...
- 黄永亮王怡飞徐晓娟冯顺意米政实施赫赫吴晓薇牛学锋郭霄峰
- 关键词：犬细小病毒基因变异分离株
- 广东珠三角地区犬细小病毒分离与鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了解珠三角地区犬细小病毒(CPV)的流行情况及研制有效的疫苗,本研究开展了CPV流行病学调查,并将32份疑似CPV感染犬的粪便样品处理后接种F81细胞进行病毒分离,并对分离株进行鉴定。鉴定结果显示:32份样品中有19份样品提取液在F81细胞上可以产生明显的细胞病变;HA效价可达到1∶256。回归动物试验显示分离株可以导致犬出现明显的CPV感染症状,PCR鉴定也进一步确定所分离的病毒为CPV。通过VP2基因同源性分析显示分离株与国内主要的流行基因亚型CPV-2a的同源性达98%以上。
- 黄永亮施赫赫冯顺意王怡飞米政实刘慧思徐晓娟张莹吴晓薇牛学锋郭霄峰
- 关键词：犬细小病毒
- 狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）的免疫效力
- ＜正＞目的为了检测狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）注射犬只后的免疫效力。方法在广州市增城区某村进行狂犬病基因工程灭活疫苗（Hep-Flury-dG株）环境释放试验,登记该村所有家养犬的信息并存档,同时...
- 施赫赫宋伟科黄永亮刘祥茵代元元傅秋玲张莹林颖仪阳佑天徐晓娟王怡飞郭霄峰
- 关键词：狂犬病基因工程疫苗免疫效力
- 文献传递
- 犬干扰素α1基因在大肠埃希菌中的表达及其抗病毒活性的测定被引量：2
- 2013年
- 目的在大肠埃希菌中高效表达重组犬干扰素α1(canine interferon alpha1,CaIFNα1)基因,并对其抗病毒活性进行初步研究。方法根据大肠埃希菌密码子的偏嗜性,人工合成犬干扰素α1成熟蛋白编码基因,同时引入大肠埃希菌EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,将改造后合成的CaIFNα1核苷酸序列定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-CaIFNα1,并进行PCR及双酶切鉴定;将鉴定正确的重组表达质粒pET-CaIFNα1转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗VSV病毒活性。结果重组表达质粒经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确;重组融合蛋白CaIFNα1相对分子质量约39 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的61.5%,可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗CaIFNα1多克隆抗体特异性识别,在MDCK细胞上呈现较高的抗病毒活性,为2.0×106U/ml。结论已成功改造了CaIFNα1基因,并在大肠埃希菌中实现了高效表达,表达产物具有较高的抗病毒活性。
- 徐晓娟王怡飞王玉米政实黄永亮郭霄峰
- 关键词：干扰素Α犬科大肠埃希菌原核细胞生物学活性
- 一株通过基因修饰以优化表达后的狂犬病病毒糖蛋白及其单克隆抗体和应用
- 本发明公开了经修饰的狂犬病病毒的G蛋白基因G3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该G蛋白基因G3表达得到的经修饰的狂犬病病毒的G蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述狂犬病病毒为狂犬病病毒（rabi...
- 郭霄峰张戴婷郑佳琳阳佑天王怡飞
- 文献传递
- 广东省某猪场链球菌的分离与鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了解广东省茂名某猪场暴发猪链球菌病的详细情况及制作灭活疫苗给猪群接种免疫。该研究通过分离细菌、PCR鉴定、生化试验等方法分离、鉴定细菌,并通过动物试验了解该分离菌的致病性。最后通过药敏试验找出高敏药物用于临床治疗及了解该猪场细菌病的耐药性,指导临床合理用药。
- 郭慧霞米政实梁曼怡王怡飞徐晓娟张良黄永亮
- 关键词：猪链球菌耐药性动物试验
- 狂犬病病毒HEP-Flury株N基因的修饰及原核表达
- 2012年
- 为了高效表达狂犬病病毒HEP-Flury的核蛋白,选取抗原决定簇富集区,利用生物信息学技术分析了狂犬病病毒HEP-Flury N蛋白的核苷酸序列.根据大肠埃希菌Escherichia coli对密码子的偏嗜性,首先对所选取的核苷酸序列进行修饰、引入酶切位点,然后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-NP.将其转化表达宿主菌Escherichia coli BL21(DE3)pLysS,以IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量34 000处有1条特异的蛋白带,与预期大小一致.Western-blotting检测结果显示,该蛋白可被鼠抗His单克隆抗体及犬抗RV多克隆抗体特异识别,表明所表达的N蛋白具有良好的免疫原性.
- 张良黄永亮官培英王怡飞徐晓娟吴晓薇郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达
- 野毒狂犬病病毒反向操作系统的构建及基因替换对病毒致病性的影响
- <正>为了系统地分析强弱毒株基因替换对狂犬病病毒复制能力、致病力的影响,本论文以狂犬病病毒HEP-Flury为骨架,将野毒GD-SH01的5个结构基因分别替换HEP-Flury的结构基因,拯救获得了野毒株单基因替换以及全...
- 王怡飞田钦罗均梅明珠彭娇娇张琼罗永文郭霄峰
- 文献传递
- 一种分段扩增猪流行性腹泻病毒全基因组的引物组及方法
- 本发明属于生物技术领域，公开了一种分段扩增猪流行性腹泻病毒全基因的引物组及方法。所述引物组包括22个引物对，各引物对上下游引物依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.44所示。所述方法为提取PEDV总RNA，反...
- 郭霄峰莫炜钰罗均田钦王怡飞莫梅君陈昊赵静胡立立
- 文献传递
- 荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用被引量：1
- 2014年
- 为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。
- 代元元吴晓薇洪洁心王怡飞刘中勇赵天楚郭卉郭霄峰
- 关键词：荷斯坦奶牛瓜氨酸血症巢式PCR
