王寿山
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定被引量：2
- 2012年
- 为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。
- 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟王伟刘彦云
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统
- H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析被引量：2
- 2012年
- 禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,
- 王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟王伟
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒NA基因低致病性禽流感病毒A型流感病毒H5N1亚型
- H6N8亚型鸭流感病毒HA和NA基因的序列分析
- 分离到一株H6N8亚型鸭源禽流感病毒,HA蛋白裂解位点附近氨基酸残基为(-PQIETR↓GLF-),分子水平上表明这是一株低致病性禽流感病毒。序列分析表明流感病毒分离株HA基因核酸和氨基酸序列均与2005年分离于广西的H...
- 刘春国刘明李建辉石薇琳张超林王寿山
- 关键词：禽流感病毒HA和NA基因
- 文献传递
- H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定
- 为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法,SDS-PAGE,west...
- 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟刘彦云刘明
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统
- 文献传递
- 表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及鉴定
- 2013年
- 为构建表达H 5N 1亚型clade 2.3.4禽流感病毒(AIV)HA基因的重组腺病毒,本研究通过RT-PCR扩增A/wild duck/Shandong/628/2011(H 5N 1)的H A基因,克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构建重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV-HA。采用A d-Easy技术,制备表达AIVHA基因的复制缺陷型重组腺病毒rAd-H A。将rA d-HA感染Ad293细胞,可产生明显的细胞病变。通过细胞超薄切片观察到完整的腺病毒颗粒。经RT-PCR、间接免疫荧光及western blot证明HA基因在A d293细胞中成功转录和表达,并且表达的蛋白具有良好的生物学活性。本研究为新型H5N1亚型AIV活载体疫苗的研发奠定了基础。
- 王伟王伟刘春国王寿山张超林刘彦云吕让
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型HA基因重组腺病毒
- H3N8亚型马流感病毒M1基因在昆虫细胞中的表达及活性分析
- 2013年
- 为建立H3N8亚型马流感血清学诊断方法,将H3N8亚型马流感病毒A/equine/Xinjiang/3/2007(H3N8)M1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,构建重组转移质粒pFastBac Dual-M1;将pFastBac Dual-M1转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选重组穿梭质粒rBD-M1;在脂质体转染试剂介导下将rBD-M1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,拯救重组杆状病毒rBV-M1;rBV-M1感染Sf9细胞后,通过Western-blotting和免疫组织化学染色进行蛋白表达分析。结果表明,获得了分子质量为27ku的特异性M1蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫活性。M1蛋白的成功表达为以M1蛋白作为诊断抗原的研究奠定了基础。
- 王伟王伟刘春国刘明张超林刘飞刘彦云王寿山王丹吕让
- 关键词：马流感病毒杆状病毒表达
- 10株H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的序列分析被引量：9
- 2013年
- 为了解中国目前H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(HA)基因的遗传变异情况,对中国不同地区分离的10株H9N2亚型AIV的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果表明,10个分离株的裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;10个分离株有7～9个潜在糖基化位点,由于基因突变有些HA基因出现了新的糖基化位点;与参考株相比,发现了4个抗原表位的突变,这些表位的突变可能引起病毒致病性的改变;受体结合位点除198位有变异外,其他位点均较保守;6株病毒234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征;10个分离株HA基因与国内疫苗株的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为90.4%～99.2%和92.2%～98.7%;10个分离株同属于欧亚谱系中的A/duck/Hong Kong/Y280/97群,但差异显著,为此本试验又将其分为4个不同的亚群。人工感染排毒试验结果表明,BJ15和NJ17分离株在鸡体内具有较强的复制能力,排毒周期较长且排毒量也较大,而S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出1个糖基化位点NGT,可能是分离株复制能力增强的原因。
- 刘彦云刘春国王寿山张超林王伟吕让刘明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因致病力
