王夏
- 作品数：19 被引量：63H指数：5
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 快速、有效筛选新的功能基因——荧光差异显示技术被引量：4
- 2003年
- 控制生物性状的基本单位是基因 ,研究细胞的基因表达一直是分子生物学的重要课题之一。不同细胞间基因表达的差异决定了生命活动的多样性 ,如发育与分化、内环境稳定、细胞周期调节等。近年来 ,随着DNA重组技术的发展 ,已有数万个人类基因被克隆分析 ,要从如此众多的表达基因中找出引起细胞生理或病理变化的基因并非易事。应用荧光标记的mRNA差异显示技术将有可能在一定程度上起到关键的作用。以总RNA为模板 ,采用荧光标记的锚定引物 ,通过逆转录、差异显示PCR反应 ,经 5 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带 ,条带清晰、明亮、背景低 ,各样本间的差异不仅呈有无的变化 ,亦表现出很多强弱改变 ;本实验室经过多年的坚持摸索、研究 ,现已能成功的应用荧光标记差异显示技术 ,可快速 (2d)、敏感。
- 王夏
- 关键词：MRNA荧光
- 快速、有效筛选新的功能基因——差异显示技术被引量：9
- 2003年
- 真核生物mRNA差异显示技术 (DifferentialDisplay)的创立及其对该技术的一系列改进 ,为研究与生殖、发育、细胞分化、癌变、病变、衰老、程序化死亡及抗逆性与抗病性等生命过程有关的基因的差异表达 ,以及有关基因的分子克隆提供了有效工具。本文将简要叙述差异显示技术的优越性、主要缺陷、技术改进等方面的研究进展 。
- 王夏
- 关键词：功能基因差异显示技术MRNA基因筛选
- mRNA差异显示法克隆前列腺癌相关基因被引量：14
- 2003年
- 目的 克隆前列腺癌相关基因。 方法 应用改进的mRNA差异显示技术 ,从前列腺癌患者和正常成人前列腺组织中获得两者的差异片段 ,即表达序列标签 ,克隆测序分析 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)方法证实。 结果 正常成人和前列腺癌患者的前列腺组织存在明显的基因表达差异。在GenBank分析的 7个差异显著的片段中 ,5个为新基因片段 ,1个与基因聚集素(clusterin) 10 0 %同源 ,在前列腺癌组织中高表达 ;另一个与超氧化物歧化酶 1(SOD1) 97%同源 ,在正常前列腺组织中高表达。RT PCR结果证明前列腺癌组织及前列腺癌细胞株中 ,clusterin与内参基因β actin的相对表达量明显高于正常前列腺组织。 结论 5个新基因片段、clusterin和SOD1基因表达在前列腺癌的发生、发展中可能发挥重要作用。
- 杨学贞周利群周健王夏杨帆张志文那彦群顾方六郭应禄
- 关键词：前列腺癌MRNA差异显示技术逆转录聚合酶链式反应超氧化物歧化酶
- 铬对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响被引量：12
- 2005年
- 目的:探讨补铬对糖尿病大鼠糖代谢相关基因表达的影响。方法:对前期研究分离到的与补铬200μg/(kgbw?d)有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RT-PCR检测。以激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果:差显片段Cr-3的碱基序列与GLUT4同源性为98%。各组大鼠骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达:糖尿病补铬组GLUT4表达量低于正常对照组(P<0.05),高于糖尿病对照组(P<0.05)。结论:给糖尿病大鼠补充微量元素铬可以上调骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达,进而使骨骼肌组织中GLUT4含量增加,这可能是铬改善糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 孙忠吴蕴棠车素萍王夏郭刚
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR基因克隆铬
- 中枢神经细胞瘤和少突胶质细胞瘤基因差异表达的研究被引量：2
- 2008年
- 目的应用差异显示反转录PCR（differential display reverse transcription PCR,DDRT-PCR）技术,研究中枢神经细胞瘤（central neurocytoma,CN）和少突胶质细胞瘤（oligedendrogliomas,OG）基因表达差异。方法用DDRT-PCR技术比较2例CN、4例OG和2例正常脑组织标本基因表达的差异,鉴别、分离差异表达的基因片段,进行再扩增、克隆、测序。测序结果经BLAST检索进行同源性分析。结果CN、OG和正常脑组织中存在明显的基因表达差异。在选取的8条差异表达条带（W1～8）中,1个（W8）在CN中高表达,3个（W3,4,7）在OG中高表达,4个（W1、2、5、6）主要在正常脑组织中表达。BLAST查询证实,其中有2个（W3、8）差异片段所代表的基因编码为已知蛋白,为FAC1基因和AGA基因;有2个（W1、2）与人类染色体序列具有同源性,但无相关基因及功能的报道。另4个（W4、5、6、7）与鼠具有同源性,功能不详。结论差异显示片段W1所代表的基因可能是一个新的含有锌指结构的转录调节因子,位于人类第16号染色体上;基因FAC1在正常脑组织中不表达,在OG中高表达,可能是OG的相关基因。
- 万伟庆任同王夏裴傲张鹏飞马振宇张亚卓王忠诚
- 关键词：中枢神经细胞瘤少突胶质细胞瘤MRNA
- 糖尿病大鼠补锌后新基因片段表达与鉴定
- 2007年
- 目的对糖尿病大鼠补锌后出现的新基因片段进行组织表达与鉴定。方法对前期研究中分离到的补锌糖尿病大鼠与糖尿病对照组比较有异差的基因片段进行克隆、测序、同源性分析后,对发现的6条新基因(Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20)进行RT-PCR鉴定,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平。结果20条cDNA片段经克隆、测序、同源性分析,发现了6个基因片段(Zn-2、Zn-6、Zn-10、Zn-14、Zn-19、Zn-20),在Gen Bank中未找到高同源性的序列,为新的表达序列标签(EST)。其中4个基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05)。4个新基因片段被Gen Bank收录,接收号分别为AY952968,AY952970,DQ351838,DQ351839。结论分离并克隆了4条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,在GenBank上成功登录。
- 孙忠吴蕴棠张万起王夏刘小勇周壮志王永明
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR新基因基因克隆锌
- 补锌糖尿病大鼠差异显示新基因片段的克隆鉴定及组织表达
- 2006年
- 目的克隆补锌糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达分布。方法对前期研究中分离到的与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,同源性分析,对发现的2条新基因(2#差异显示片段及6#差异显示片段)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以观察新基因在各组大鼠肝脏中的表达变化,并检测新基因在不同组织中的表达情况。结果经克隆、测序、同源性分析,在GenBank中未找到与2#差异显示片段及6#差异显示片段高同源性的序列,确定2#及6#差异显示片段为新的基因片段;2#及6#新基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);2#新基因片段在大脑及胰腺中表达量较高,在肾脏中表达量较低,在心肌、骨骼肌、胸腺中无表达。6#新基因片段在心肌、骨骼肌、大脑、肾脏、胰腺中均有表达,但在胸腺中无表达;2#及6#新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、AY952970。结论分离并克隆了2条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,经RT-PCR检测其在各组大鼠肝脏及其它各组织中表达分布后,在GenBank上成功登录。
- 孙忠吴蕴棠张万起王夏王永明
- 关键词：糖尿病大鼠RT-PCR新基因基因克隆
- 快速、有效筛选新的功能基因——差异显示技术被引量：2
- 2003年
- 自 1 992年一种针对从特定细胞和组织类型的mRNA来源样品用PCR技术对其中的大量cDNA同时进行扩增和显示的实验方法 ,即差异显示 (DDRT PCR)被报道以来 ,尽管取得了不少成功的实例 ,但还是一个存在许多问题有待完善的实验方法 ;假阳性的问题便首当其冲。在前面的文章中 ,我们重点讨论了引物的选择、PCR条件的改进、凝胶电泳的条件、再扩增引物的选择等避免假阳性条带的产生 。
- 王夏
- 关键词：同位素荧光
- 补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达
- 2008年
- 目的克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平。方法将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化。结果发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%。RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.5729±0.0241)相比,糖尿病对照组(DM)(0.1606±0.0075)和糖尿病补硒组(DM+Se)(0.3857±0.0194)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM+Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。
- 廖明吴蕴棠孙忠谢娟王夏王永明
- 关键词：硒糖尿病
- 不稳定心绞痛患者外周血白细胞新基因的发现
- 2002年
- 刘艳霞李文黄益民李志忠白树功周健王夏
- 关键词：外周血不稳定性心绞痛白细胞差异基因表达DDRT-PCR
