王力民
- 作品数：9 被引量：55H指数：6
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- 识别9E10单抗的噬菌体短肽的免疫学特性分析被引量：8
- 1997年
- 为分析从单价表达短肽库中筛选到的两种克隆的免疫学特性，将单价噬菌体短肽表达载体中的ｇⅢ片段切除，在大肠杆菌中表达可溶性短肽分子，ＥＬＩＳＡ竞争抑制实验证实，可溶性短肽分子可竞争抑制９Ｅ１０单抗与Ｃ－ｍｙｃ＋肽结合。进一步将噬菌体短肽的单价表达载体改建为多价表达载体，分别免疫兔和小鼠，制备免疫抗血清，ＥＬＩＳＡ实验和竞争抑制实验结果证实，两种克隆的免疫抗血清均可与９Ｅ１０单抗所识别的抗原表位结合，表明这两个克隆尽管在序列上与原自然抗原不同，但其在结构上真正模拟了ｃ－ｍｙｃ＋肽的抗原表位，在体内可诱发相似的免疫反应。
- 李全喜王琰李竟王雅明王雅明王力民徐建军董志伟
- 关键词：噬菌体分子识别
- Tumorigenic potential of circulating tumor cells in pulmonary venous blood from Non-Small Cell Lung patients in xenograft model
- Objective: To explore the clinical value and biological characteristics of circulating tumor cells (CTCs) in p...
- 吕超赵兵甜王力民陈晋峰吴楠冯勤马媛媛张理意李少雷杨跃
- 介导多种胃癌杀伤效应的双功能抗体被引量：8
- 1994年
- 作者设计了一种带有“通用接头”的ｂｓＭＡｂ，即制备抗胃癌及抗半抗原ＴＮＰ的ｂｓＭＡｂ，它可介导多种经ＴＮＰ化的肿瘤杀伤因子。采用分泌抗胃癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤变异株３Ｈ１１—ＨＡＴｓ与经ＫＬＩ－ＴＮＰ免疫的Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠脾细胞进行融合，经筛选及克隆化共获得１０株二次杂交瘤，它们均能分泌与胃癌靶细胞ＢＧＣ８２３及ＢＳＡ－ＴＮＰ呈双阳性反应的抗体。但桥联法测定表明，只有二次杂交瘤１Ｇ７（γ２ｂ，γ２ｂ）及６Ａ３（γ２ｂ，μ）分泌ｂｓＭＡｂ。实验表明，ｂｓＭＡｂ６Ａ３和１Ｇ７可介导不同性质的经ＴＮＰ化的肿瘤杀伤剂，如蓖麻毒素、人血清白蛋白与丝裂霉素的偶联物，及牛血清白蛋白与阿霉素的偶联物。研究结果还表明，桥联法在确认ｂｓＭＡｂ中具有重要意义。分泌双特异性抗体的二次杂交瘤上清中不一定含有ｂｓＭＡｂ。一般认为γ链与μ链不可能组合形成ｂｓＭＡｂ，但本研究通过亚类分析、桥联法测定及体外细胞毒试验证实，二次杂交瘤６Ａ３分泌的ｂｓＭＡｂ确是由μ链与γ２ｂ链组合而成，这是一个新的发现。
- 王力民万文徽陆良军董志伟
- 关键词：胃肿瘤单克隆抗体杂交瘤
- 从噬菌体抗体库克隆抗人RBC单链抗体基因被引量：11
- 1998年
- 目的用噬菌体抗体库技术克隆抗人红细胞（ＲＢＣ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）基因。方法以人ＲＢＣ免疫小鼠，取脾细胞，ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＶＨ和Ｖκ基因，组装到ＳｃＦｖ－噬菌体抗体表达载体中，构建了噬菌体抗体库，以人ＲＢＣ为固相抗原，对该库进行了四轮“吸附－洗脱－扩增”筛选，获得了抗人ＲＢＣ的ＳｃＦｖ基因。结果ＤＮＡ序列分析表明其可变区基因分别属于小鼠ＶＨⅢ亚群和ＶκⅤ亚群。结论所表达的ＳｃＦｖ可与不同人ＲＢＣ结合，与ＡＢＯ血型抗原无关。
- 王琰王雅明刘群英徐建军李全喜陈宇萍王力民李竞
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体基因人红细胞
- 离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起始细胞的标志物和治疗分子靶点
- 目的 肿瘤起始细胞(或称为肿瘤干细胞)的存在被认为是肿瘤复发转移、耐受常规治疗的根本原因.对于这类细胞的分离鉴定和研发针对性的治疗用生物技术类药物是肿瘤学研究领域亟待解决的关键科学问题.本研究对离子通道蛋白X是肝癌肿瘤起...
- 张志谦赵威王力民韩海勃
- 关键词：肝癌标志物分子靶标
- 小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体。方法采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达。SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在。SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况。结论获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体。
- 张媛王力民赵威韩海勃
- 关键词：融合蛋白表达多克隆抗体
- 抗胃癌单抗3H11的单链抗体表达载体的构建和表达被引量：8
- 1998年
- 目的构建抗胃癌鼠单抗３Ｈ１１的单链抗体（ＳｃＦｖ），以利于临床应用。方法采用噬菌体抗体库技术和ＰＣＲ介导的定位点突变技术，构建和改造抗胃癌ＳｃＦｖ基因。结果从３Ｈ１１杂交瘤制备抗体库，以胃癌细胞系（ＭＧＣ８０３）进行筛选，未获阳性克隆。再对３Ｈ１１可变区基因以ＰＣＲ错配技术进行随机突变，构建次级突变抗体库，仍未筛出阳性克隆。最后用ＰＣＲ定点突变技术，将ＳｃＦｖ可变区基因氨基端序列恢复成３Ｈ１１的原始序列，终于得到可与胃癌细胞结合的ＳｃＦｖ克隆。
- 李竞王琰李全喜王雅明徐建军王力民董志伟
- 关键词：胃肿瘤单克隆抗体单链抗体噬菌体抗体库
- 从噬菌体短肽库中筛选单克隆抗体识别的抗原表位被引量：12
- 1997年
- 将随机合成的寡聚核苷酸重组到噬菌体表面单价表达载体，构建了噬菌体随机八肽库。以抗原识别性明确的单克隆抗体９Ｅ１０固相化，对噬菌体短肽库进行了４～５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，任选多个所获克隆进行ＥＬＩＳＡ检测。发现第４轮后６／２２个克隆可与９Ｅ１０结合，第５轮后１０／１０可与９Ｅ１０结合，此结合反应可被９Ｅ１０所针对的十肽抗原以及游离的９Ｅ１０特异性抑制。对所获阳性克隆进行ＤＮＡ序列测定发现，它们的序列可分为两种，其中一种序列与ｃ－ｍｙｃ十肽具有同源序列ＩＳＥｘｘＬ，而另一种的序列则完全不同。证实噬菌体表面单价表达体系用于构建噬菌体短肽库的有效性，为进一步筛选其它的具有高亲和力的特异性短肽打下了基础。
- 李全喜王琰李竞李竞徐建军王雅明董志伟
- 关键词：噬菌体单克隆抗体抗原表位
- 抗胃癌鼠单抗 3H11V 区基因的克隆及人-鼠嵌合轻链的表达被引量：12
- 1997年
- 利用前导肽序列设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人胃癌的单抗杂交瘤细胞系３Ｈ１１分离克隆了抗体的轻重链可变区基因序列。经ＤＮＡ序列分析表明所获基因含有全部前导序列，其成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的序列相符。将轻链基因组建到人－鼠嵌合轻链表达载体中，转染至小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０中，可获得人鼠嵌合轻链的表达，证明所克隆的基因具有表达活性，为人－鼠嵌合抗体的构建奠定了基础。
- 李竞王琰李全喜王雅明徐建军王力民董志伟
- 关键词：基因克隆基因表达胃肿瘤抗体单克隆抗体
