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强疏水性、低丰度的整合质膜蛋白质分级提取与鉴定: 占基因编码蛋白质20-30%的整合膜蛋白有重要生物学意义,然而这类蛋白质具有强疏水性、低丰度的特点,其蛋白质组学研究在方法上具有挑战性。为了鉴定大鼠肝脏低丰度,强疏水性的质膜蛋白质,我们通过两次蔗糖密度梯度离心纯化质膜,...; 张丽军王细娥彭霞熊继先魏颖娟陈平谢锦云梁宋平; 文献传递

C57小鼠肝脏质膜蛋白质组学分析: 肝脏的细胞质膜作为细胞内外物质与信息交换,以及细胞内外因子识别的靶标所在场所,在肝脏细胞生命活动中发挥着重要作用。本研究采用两种策略分离得到C57小鼠肝脏细胞质膜。方法之一:采取小鼠肝门静脉原位灌流急性分离肝细胞,对分离...; 李选文张丽军曹佳王细娥魏颖娟彭霞金琦慧熊继先孙亚兰陈平梁宋平; 文献传递

利用磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法鉴定磷酸化肽修饰位点被引量：1: 2006年; 利用MALDI-TOF质谱结合磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助的从头测序(de novosequencing)方法,将用固相金属离子亲和色谱(immobilized metal affinity chromatography,IMAC)选择性地从混合物中亲和提取的磷酸肽进行磷酸化位点测定,该方法只有肽键断裂产生的带C端的碎片离子系列(y+离子系列)出现在质谱图中,图谱背景清晰,信噪比高,单纯的y+片段离子系列使得谱图解析变得非常容易,对于多磷酸化肽的磷酸化位点,不需借助于任何软件,只需简单地计算两峰之间的分子量之差即可确定.; 陈平李水明刘宇刘中华熊继先孙亚兰曹锐梁宋平; 关键词：磷酸化位点从头测序质谱

鼻咽癌细胞系与永生化的鼻咽上皮细胞系蛋白质表达差异分析(英文)被引量：7: 2008年; 鼻咽癌对我国南部居民的健康造成严重的威胁.为了研究鼻咽癌的发病机理,本研究采用了蛋白质组学技术分析和比较了鼻咽癌细胞系(HNE1和CNE1)与永生化的鼻咽上皮细胞系的蛋白质表达谱.采用双向凝胶电泳分离提取的全细胞蛋白质,通过PDQuest软件分析找出在肿瘤中表达变化的蛋白质点,用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行鉴定.共得到了15个在肿瘤细胞系中表达上调和18个在肿瘤细胞系中表达下调的蛋白质,并对其中一些蛋白质的表达进行免疫印迹的验证.这些表达差异的蛋白质与细胞的增殖和调亡、癌症的转移,细胞骨架,信号传导等有关.本研究鉴定了一批可能作为鼻咽癌治疗的药物靶标的蛋白质,并对研究鼻咽癌发病机理提供了相关的线索.; 贾小芳石妮熊继先谢锦云梁宋平; 关键词：鼻咽癌细胞系双向凝胶电泳蛋白质组学

大鼠海马细胞质膜的蛋白质组学研究: 海马(hippocampus)是大脑颞叶内侧的重要脑结构,是哺乳动物学习和记忆的重要结构区。本研究从大鼠海马细胞质膜的富集,膜蛋白的分离鉴定等方面进行了蛋白质组学研究,建立了细胞质膜的生物素亲和纯化方法,该方法用包裹了链...; 陈平李选文孙亚兰熊继先李水明王美迟曹锐谢锦云梁宋平; 文献传递

鼠肝质膜蛋白质组研究的方法评估被引量：1: 2007年; 细胞质膜是细胞中重要的细胞器,在肝功能的发挥中具有非常重要的作用.使用蔗糖密度梯度离心纯化细胞质膜,通过电子显微镜观察和免疫印迹法检验膜的纯度.结果显示,与组织匀浆成分相比,质膜富集了20倍,线粒体的污染减少了约50%.提取的蛋白质用二/一维凝胶电泳(2DE/1DE)分离、胰酶酶解、电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定,或者提取的蛋白质直接进行溶液内酶解、液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(LC-LTQ)(鸟枪法)鉴定.一共鉴定了547个非冗余蛋白质,其中34%为质膜或质膜相关蛋白质.优化和评估了质膜蛋白质组研究的方法,且对鼠肝质膜蛋白质组进行了系统的分析.; 陈平张丽军李选文王细娥曹锐刘珍熊继先彭霞魏颖娟银兴峰王贤纯梁宋平; 关键词：细胞质膜蛋白质组鸟枪法

磷酸化蛋白质组学新方法的研究与应用: 蛋白质磷酸化修饰是最常见，最重要的的一种蛋白质翻译后修饰方式，蛋白质磷酸化和去磷酸化几乎调节着生命活动的所有关键过程。同时磷酸化的失调会导致很多严重的人类疾病，如癌症，糖尿病，心脏病，老年痴呆症等。因此，蛋白质磷酸化研究...; 熊继先; 关键词：磷酸化蛋白质组学生物质谱神经干细胞生物标记物; 文献传递

不同分化程度的鼻咽癌细胞系质膜差异蛋白质组分析(英文)被引量：3: 2008年; 本研究以CNE1和CNE2为材料,采用亚细胞蛋白质组研究方法研究不同分化程度鼻咽癌细胞系的差异蛋白质.首先用Percoll密度梯度离心法获得高纯度质膜,通过双向凝胶电泳分离、PDQuest软件分析后找出在肿瘤细胞中表达变化的蛋白质点,再用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)进行鉴定,共鉴定到9个具有2倍或2倍以上差异的蛋白质.这些表达差异的蛋白质参与了细胞分化、代谢及细胞信号传导过程.我们对其中5个蛋白质进行了实时定量PCR分析,对其中4个蛋白质的表达进行了免疫印迹验证.本试验为研究不同分化程度的鼻咽癌提供了一种蛋白质组研究方法,并且找到了galectin-1、annexinⅡ等一些可能与分化相关的蛋白质.这些数据对于研究鼻咽癌的生物学特性具有非常重要的意义.; 盛婷婷张丽军刘晓慧贾小芳熊继先贺权源曹锐彭霞石妮梁宋平; 关键词：鼻咽癌分化质膜质谱蛋白质组

不同分化程度的鼻咽癌细胞质膜的差异蛋白质组学分析: 细胞癌变的一种可能机制是细胞在分裂与分化过程中发生差错,以致于细胞停留在分裂周期,不能进行终末分化。有学者认为细胞分化被阻断是癌变的一个关键问题,分化得越好(称为“高分化”)的肿瘤细胞越接近相应的正常发源组织:而分化较低...; 刘晓慧张丽军贾小芳熊继先盛婷婷谢锦云梁宋平; 文献传递

基于等电聚焦-反相HPLC的虎纹捕鸟蛛毒素组学的初步研究被引量：5: 2006年; 虎纹捕鸟蛛(Ornithoctonus huwena)是中国最毒的蜘蛛之一.已有研究表明,其粗毒中含有丰富的低分子量(<10kD)多肽活性成分.为分析这些成分,利用目标蛋白快速分离系统(Proteome LabPF 2D)建立了一种新的二维液相色谱分离方法.该方法包括一维的基于蛋白质等电点(pI)的色谱聚焦分离和二维利用无孔硅胶反相柱的基于疏水性的高效液相色谱分离.得到的反相图谱通过仪器配套的ProteoVue软件转换成与凝胶电泳图像相似的pI/UV图,以更直观地显示多肽成分的数量、分布规律及相对丰度等.洗脱的多肽自动收集后用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱进行分析.从一维分离的11个馏分(pH4.53～8.59)中共检测到大约600个多肽条带.通过质谱分析测得130个多肽的精确分子量,同时通过Denovo测序得到26种多肽(其中包括12种已知多肽)的部分序列信息,并利用这些序列信息对未知多肽进行了生物信息学分析.; 周铁杨周健熊继先王贤纯; 关键词：蜘蛛二维液相色谱

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熊继先

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