熊燕
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家生猪现代产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导的RNA干扰Akt2表达抑制猪前体脂肪细胞分化被引量：7
- 2012年
- 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因,与细胞生存和癌症的发生密切相关.但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚.本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2 shRNA 1,2,3及scrambled,经酶切和测序鉴定均正确;这4种干扰载体分别转染HEK293T细胞后,均获得有感染性的病毒颗粒并感染猪前体脂肪细胞.转染HEK293T细胞48 h后real-time PCR分析和转染72 h后Western印迹分析表明,Akt2 shRNA2和shRNA3介导的Akt2 mRNA和蛋白表达被显著下调(P<0.05),其中pLentiH1-Akt2 shRNA3介导的对Akt2 mRNA和蛋白的干扰效率均达到70%以上(P<0.01).进一步研究发现,猪前体脂肪细胞中Akt2被有效干扰后,细胞中脂滴明显减少并变小,且成脂标志基因PPARγ和aP2蛋白水平被显著下调.本研究结果表明,Akt2 knockdown可显著抑制猪前体脂肪细胞分化.
- 王平熊燕杨公社沈清武庞卫军
- 关键词：慢病毒载体前体脂肪细胞
- 过表达miR-155抑制C2C12成肌分化的作用及其分子机制
- 熊燕王禹卫宁许儒祥杨公社庞卫军
- 关键词：MIR-155C2C12成肌分化TCF4腺病毒
- 脂肪组织特异性PU.1敲除小鼠的鉴定及其活体脂肪和肌肉含量分析被引量：1
- 2014年
- 本研究运用基因工程和同源重组等技术,产生了脂肪组织特异性PU.1敲除小鼠(aP2-cre-PU.1fl/fl),并用PCR技术进行基因型判定。Western blot结果表明,与PU.1fl/fl小鼠相比,aP2-cre-PU.1fl/fl小鼠脂肪组织PU.1蛋白表达显著降低,达到敲除水平。在此基础上,对1~6月龄的PU.1fl/fl和aP2-cre-PU.1fl/fl小鼠体重和活体成分进行了分析。研究发现,aP2-cre-PU.1fl/fl小鼠在出生后第5和第6月龄体重显著高于PU.1fl/fl小鼠(P<0.05);6月龄时,肌肉量无显著差异,但aP2-cre-PU.1fl/fl小鼠脂肪量明显高于PU.1fl/fl小鼠(P<0.05)。结果提示,aP2-cre-PU.1fl/fl小鼠脂肪重量的增加是其体重增加的主要原因。脂肪组织特异性PU.1敲除小鼠的生产为深入研究PU.1基因在体调控脂肪生成的功能奠定了基础,也为探索PU.1基因控制家畜体脂沉积提供了理论依据。
- 庞卫军卫宁王禹熊燕童强杨公社
- 关键词：脂肪肌肉
- PU.1转录因子调控前体脂肪细胞生脂的分子机制研究进展被引量：4
- 2011年
- PU.1转录因子是保守的DNA结合蛋白Ets家族成员,因其DNA结合区识别共有序列GAGGAA,故该区又称为Ets结合区或PU.1box。PU.1主要在造血系统如髓细胞和B淋巴细胞中表达,调节关键髓系基因的转录从而调控造血系统的分化。PU.1周身敲除后,由于胎儿肝脏中缺乏B淋巴细胞和髓系细胞,导致小鼠胚胎早期死亡,表明PU.1是调控生命过程的关键转录因子。目前,在脂肪细胞中PU.1对脂肪生成作用及机制的研究报道较少。PU.1与脂肪细胞脂肪生成,与miRNAs、antisense RNA以及C/EBPα/β-PPARγ通路的调控关系将是今后研究的重点。
- 庞卫军卫宁熊燕王平童强
- 关键词：ANTISENSERNAMIRNAS前体脂肪细胞
- 烟酰胺削弱罗格列酮诱导猪前体脂肪细胞凋亡的作用与分子机制
- 2013年
- 【目的】探讨烟酰胺(nicotinamide,NIC)和罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对猪前体脂肪细胞凋亡的作用及分子机制,寻找通过凋亡方式调控脂肪细胞数目进而控制生脂的新途径。【方法】分别用含有0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L-1RSG的培养基处理猪前体脂肪细胞,在处理后的48 h,对不同处理组细胞进行Hoechst33258和Annexin-V-FITC/PI染色以观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡情况;并收集细胞总蛋白,用Western blotting方法检测细胞凋亡关键基因的蛋白表达水平;基于RSG促凋亡的浓度梯度结果,选用1.0mmol·L-1RSG分别与含0、0.1、0.2和0.3 mmol·L-1NIC的培养基共处理细胞,在处理后的48 h,染色并观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡情况;并收集细胞总蛋白、细胞质蛋白和细胞核蛋白,检测细胞凋亡关键基因的蛋白水平。【结果】RSG以浓度依赖方式诱导猪前体脂肪细胞凋亡,减少了细胞数目;Bcl-2和cleaved Caspase-3凋亡关键蛋白水平随RSG浓度增加而上升,Bax则下降;0.1(P<0.05)、0.2(P<0.01)和0.3 mmol·L-1(P<0.01)NIC显著削弱1 mmol·L-1RSG诱导猪前体脂肪细胞凋亡,Bcl-2和cleaved Caspase-3水平显著被下调(P<0.05),Bax则被上调(P<0.05);0.3 mmol·L-1NIC明显有助于1 mmol·L-1RSG处理的猪前体脂肪细胞中的Sirt1由细胞质向核转移,且抑制核中cleaved Caspase-3水平。【结论】NIC通过促进Sirt1由细胞质到核的转位以及下调核中cleaved Caspase-3水平削弱RSG诱导的猪前体脂肪细胞凋亡。
- 庞卫军许儒祥熊燕孙世铎杨公社
- 关键词：烟酰胺罗格列酮前体脂肪细胞凋亡
- 过表达miR-155抑制C2C12成肌分化被引量：4
- 2014年
- 为明确miR-155在C2C12成肌分化中的作用及分子机制,本研究构建了miR-155过表达腺病毒载体,运用过表达miR-155的腺病毒感染C2C12,并诱导其成肌分化。通过形态学观察,成肌标志基因mRNA和蛋白表达水平的检测,以及双荧光素酶报告基因系统对预测的miR-155靶基因(TCF4)的验证,结果表明,C2C12细胞分化中,过表达miR-155明显降低了肌管的形成,成肌标志基因MyoG和MyHC的mRNA表达量极显著地下降(P<0.01),而MyoD差异不显著(P>0.05),成肌标志基因蛋白检测结果与mRNA检测结果一致;进一步研究显示miR-155与预测的TCF4基因的3'UTR 3个靶点(1487-1493,1516-1522,4532-4583)中的1个(4532-4538)结合,并发现过表达miR-155显著降低了TCF4的mRNA水平(P<0.05)。表明miR-155可能通过靶向TCF4抑制C2C12成肌分化。
- 熊燕王禹卫宁许儒祥杨公社庞卫军
- 关键词：MIR-155C2C12成肌分化TCF4腺病毒
