沃晓嫚
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 表达红色荧光蛋白重组柯萨奇病毒B组3型基因组稳定性分析被引量：1
- 2012年
- 本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析。结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVBVP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位。本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定。随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株。因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定。
- 赵文然钟学宽张淑娟沃晓嫚张中海王博钟照华
- 关键词：柯萨奇病毒B组3型红色荧光蛋白MCHERRY基因重组
- 抗B组柯萨奇病毒3型3C蛋白多克隆抗体的制备及初步应用
- 2023年
- 目的制备抗B组柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CVB)3C蛋白的多克隆抗体。方法通过聚合酶链式反应从pcDNA3.1(+)-EGFP-3C中扩增编码3C的DNA片段,构建pET28a(+)-3C-6His表达载体,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli,E.Coli)BL21(DE3)以表达3C重组蛋白。优化表达条件及菌体蛋白的提取方法,经超声破碎制备菌体总蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后,用氯化钾进行胶染色,切胶回收相对分子质量为26000的蛋白,即纯化的3C重组蛋白(3C-6His的相对分子质量为26000)。用纯化的1 mg 3C重组蛋白加等量弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,共免疫5次,每次间隔1周,免疫结束后1周取兔血清,检测抗体的特异性。结果在相对分子质量为26000的位置检测到了3C-6His融合蛋白的表达,成功构建了高效表达带His标签的3C重组蛋白载体。重组3C蛋白原核优化表达条件为37℃培养细菌6 h,加0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导。经SDS-PAGE分离菌体总蛋白,得到了纯化的3C重组蛋白。获得的兔免疫血清可以结合E.Coli及HeLa细胞表达的3C蛋白,还能识别感染CVB3或肠道病毒A71的HeLa细胞中表达的3C蛋白。结论获得了抗CVB33C蛋白酶的多克隆抗体,这一抗体可特异结合肠道病毒的3C蛋白酶,为进一步研究3C蛋白酶在肠道病毒致病机制中的作用奠定了基础。
- 牛孙敏张箭王立鑫王瑶赵朔暄邵恩泽沃晓嫚赵文然
- 关键词：B组柯萨奇病毒多克隆抗体
- 网络环境下行动导向成人混合学习模式的构建
- 2012年
- 随着社会变革和职业变迁的不断加剧,终身学习已成为全球化发展的重要趋势。基于网络的现代远程教育成为支持人们持续学习的重要学习通道,而对学习质量的影响,除了提供具有针对性、实用性的学习内容外,学习方式的选择也是重要的影响因素。以信息技术为依托,开展网络环境下行动导向的成人混合学习模式研究,旨在为成人开展有效的网络学习提供指导,促进其有效学习。
- 沃晓嫚
- 关键词：网络环境工作过程导向成人混合学习模式
- 姜黄素通过下调FoxM1、NEDD4及β-catenin抑制黑素瘤细胞增殖、迁移及侵袭
- 2022年
- 目的研究姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法将两种人黑素瘤细胞系(A375和A875)分别用不同浓度的姜黄素处理,应用MTT、划痕、Transwell实验观察姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,利用蛋白印迹技术测定细胞周期蛋白A2(CyclinA2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FoxM1)、神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果MTT与集落形成实验结果显示,姜黄素处理后细胞相对活力下降,细胞增殖能力显著下降,且具有剂量依赖性(P<0.001)。划痕和侵袭实验结果显示,姜黄素处理后黑素瘤细胞迁移相对距离明显增加,侵袭的相对细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.001;P<0.05)。Western blot结果显示,姜黄素处理后Cyclin D1和Cyclin A2、FoxM1表达水平降低(P<0.001;P<0.05);过表达FoxM1促进NEDD4表达,敲减FoxM1则抑制NEDD4表达(P<0.001)。与对照组比较,姜黄素处理后细胞核中β-catenin水平明显降低,而细胞质中β-catenin水平明显升高(P<0.001)。结论姜黄素可通过下调FoxM1/NEDD4和β-catenin抑制黑素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。
- 张泽鹏沃晓嫚刘添秦文欣林雨丝王永晨
- 关键词：姜黄素黑素瘤Β-连环蛋白
- 《医学细胞生物学》选修课的教学改革与探索被引量：1
- 2018年
- 高等医学院校开设选修课是提高医学生综合素质,培养医学生人文情怀的重要途径。该文从《医学细胞生物学》在基础医学教学中的课程分类比例、教学效果、学生选课心理等方面现存问题进行剖析,对课程的结构进行探索性优化、规范教学管理、指导学生正确选课,对选修课的教学进行改革,力求为新时代的医学教育改革提供参考依据。
- 沃晓嫚
- 关键词：公共选修课课程设置医学细胞生物学
