汤淑萍
- 作品数：36 被引量：66H指数：5
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- 白血病抑制因子受体190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系
- ＜正＞ 观察白血病抑制因子（LIF）受体gp190亚基完整的细胞内区和gp190胞内区C末端片段在人白血病细胞系HL-60中与Cdc25B表达和激活的关系,进一步了解LIF引发白血病细胞增殖抑制和分化的关系。用基因重组技...
- 冀凯宏刘厚奇陆海英刘善荣汤淑萍
- 文献传递
- 白血病抑制因子受体与白血病细胞U937内促分裂原活化蛋白激酶的关系
- 2000年
- 探讨人白血病细胞系U937白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基和另一亚基gp130细胞内区与促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)的关系 ,旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体 (190 130 ,130 190 )并分别在U937表达 ,其与野生受体竞争性结合白血病抑制因子 ,用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体(190cyt 190cyt,130cyt 130cyt)后的细胞状况和细胞内MAPK的水平。结果表明 ,转染pE190 130后用LIF作用 6h ,U937细胞MAPK表达量增加 ,MAPK形成的二聚体较明显 ,细胞增殖较快 ;而另一嵌合体受体与α亚基形成 190cyt 190cyt时U937细胞MAPK的表达无变化 ,二聚体不明显。说明LIF受体中gp130亚基的细胞内区参与了MAPK的激活及白血病U937细胞增殖信号的传递。
- 刘厚奇汤淑萍刘善荣冀凯宏刘淑琴
- 关键词：白血病抑制因子受体U937促分裂原活化蛋白激酶
- LIF受体α亚基和gp130细胞内区与U937细胞内信号分子Stat3的关系
- 1999年
- 目的 探讨人白血病细胞系Ｕ９３７ 的白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基和ｇｐ１３０ 亚基细胞内区与转录活性因子Ｓｔａｔ３ 的活性关系，旨在研究白血病细胞增殖和分化的机制。方法 用基因重组技术将２ 个基因在细胞内区截除（ｇｐ１９０ＥＸ、ｇｐ１３０ＥＸ），并分别在Ｕ９３７ 细胞中表达，因其可与野生型受体竟争性结合ＬＩＦ，故可用免疫印迹法分析受体细胞内区截除后Ｓｔａｔ３ 的表达水平及该信号分子酪氨酸磷酸化。结果 转染ｇｐ１９０ＥＸ 和ｇｐ１３０ＥＸ 的Ｕ９３７ 细胞Ｓｔａｔ３ 表达量增加；Ｓｔａｔ３ 酪氨酸磷酸化水平下降。结论 ＬＩＦ受体α亚基和ｇｐ１３０ 的细胞内区均参与了Ｓｔａｔ３ 的激活和Ｕ９３７ 细胞的分化。
- 刘厚奇汤淑萍刘善荣胡世杰杨玲朱奎傅继梁
- 关键词：白血病细胞株U937
- hVEGF_(121)基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建人血管内皮生长因子 (h VEGF) - 12 1的真核细胞复制表达质粒 ,将 h VEGF1 2 1 基因转染进人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) ,通过旁分泌作用来加快其生长速度。 方法 :采用 RT- PCR方法 ,从人胚胎成纤维细胞中克隆 h VEGF1 2 1 前体蛋白全长 c DNA,构建重组真核表达质粒 pc DNA3- h VEGF1 2 1 ,用 Fu GENE6介导转染入HU VEC。收集转染的 HU VEC培养上清 ,用 EL ISA法定量检测 h VEGF蛋白的表达情况 ;绘制细胞生长曲线 ,检测 h VEGF1 2 1促进 HUVEC增殖的生物学活性。设转染 pc DNA3空质粒载体和不转染任何 DNA的 HU VEC做对照。 结果 :(1)成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ,经测序证明基因序列与 Gen Bank中核酸序列一致 ,且插入方向正确 ;(2 )转染细胞瞬时表达 h VEGF蛋白 ,于转染 1d后每 10 4 个细胞每天可分泌 h VEGF蛋白 5 9.95 pg,约为对照组的 10 0倍 ;之后表达水平先快后慢下降 ,于转染 7d后仍较对照组高近 1倍 ;(3)转染细胞生长速度明显加快 ,在转染 3d后细胞数与对照组相比即有显著性差异 (P<0 .0 1) ,细胞倍增时间从对照组的 7d以上缩短为 3d左右。结论 :成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ;该质粒能在 HU
- 李红华刘厚奇汤淑萍熊俊汤瑞宝胡凯猛
- 关键词：真核表达人脐静脉内皮细胞
- Fas死亡结构域调节白血病细胞Meg-01内c-myc的表达
- 2001年
- 目的 探讨人白血病Meg 0 1细胞的异常增殖机制以及凋亡因子Fas对细胞异常增殖的调节作用。方法 用基因重组技术将Fas的细胞外区、跨膜区与白血病抑制因子 (LIF)受体两亚基(gp190 ,gp130 )细胞内区构成嵌合型受体 (Fas 190 ,Fas 130 ) ,同时 ,将Fas死亡区域 (FASDD)替换Fas 130中gp130细胞内区无结构域部分 (Fas 130f) ,分别在Meg 0 1细胞内表达后 ,用抗Fas抗体激活这些嵌合型受体 ,随后用免疫组化和免疫印迹法分析受体细胞内区形成同源性寡聚体 (190cyt 190cyt 190cyt,130cyt 130cyt 130cyt及FASDD FASDD FASDD)后的细胞状况和细胞内c myc的表达。结果 转染pEDFas 130后用抗Fas抗体作用 6～ 8h ,Meg 0 1细胞c myc表达量增加 ,细胞增殖明显 ;而pEDFas 190形成寡聚体后 ,Meg 0 1细胞c myc的表达有所下降。另外 ,Fas 130与Fas 130f比较 ,后者的c myc的表达明显下降 ,细胞形态大小不一。结论 LIF受体中gp130亚基细胞内区促进白血病Meg 0 1细胞内的c myc表达及细胞增殖信号的传递 ;Fas死亡域可抑制gp130的细胞增殖活性。
- 刘厚奇单继宽汤淑萍刘善荣
- 关键词：受体白血病信号传导
- 蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用
- 2003年
- 王凤玫刘厚奇刘善荣汤淑萍杨玲冯根生
- 关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2乳腺癌癌细胞粘附
- 白血病抑制因子受体不同亚基细胞内区与HL-60细胞内STAT3激活的关系被引量：2
- 2001年
- 目的观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基和 gp130亚基胞内区在人白血病细胞系 HL- 6 0中与STAT3表达及激活的关系 ,了解白血病抑制因子 (L IF)引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法用基因重组技术将gp130和 gp190的细胞内区互换以构成两个嵌合体受体基因 (130 / 190 ,190 / 130 )并分别在 HL- 6 0细胞表达。用免疫组化和免疫印迹杂交方法分析形成受体亚基细胞内区同源性二聚体后的磷酸化 STAT3的水平和 STAT3的表达水平。结果转染p ED130 / 190 ,L IF诱导 10 m in后 ,HL- 6 0细胞内的 STAT3磷酸化增加 (P<0 .0 1) ,经 L IF诱导的转染 p ED130 / 190的 HL- 6 0细胞的 STAT3磷酸化水平存在时间依赖性 ,转染 p ED190 / 130的 HL - 6 0细胞 ,L IF诱导 6 h后 ,STAT3的表达降低。结论白血病抑制因子受体 gp190亚基细胞内区在 L IF诱导下参与 HL- 6 0细胞中 STAT3的激活。
- 单继宽刘厚奇汤淑萍刘善荣
- 关键词：白血病抑制因子受体白血病HL-60细胞亚基
- 白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系
- 2002年
- 目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L
- 冀凯宏刘厚奇陆海英刘善荣汤淑萍
- 关键词：白血病抑制因子白血病抑制因子受体HL-60CDC25B细胞周期蛋白类
- 白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端对HL-60细胞增殖分化的影响被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基胞内区远膜端对HL 60细胞增殖分化的影响。方法 构建LIF受体α亚基胞内区远膜端 (gp190CT3 )真核表达载体 ,利用脂质体转染HL 60细胞 ,G418筛选阳性细胞株 ,免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞的生长状态。以Westernblot及流式细胞仪分别检测野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞中细胞增殖核抗原 (PCNA)及CD15水平。 结果 转染有gp190CT3的HL 60细胞体积增大 ,与野生型HL 60细胞相比 ,转染有gp190CT3的HL 60细胞增殖速度减慢 ,PC NA的表达水平明显降低 ,而CD15水平明显升高 (转染有gp190CT3的HL 60细胞中CD15阳性细胞百分率为 89.98% ,野生型HL 60对照组中CD15阳性细胞百分率为 40 .79% )。结论 LIF受体α亚基胞内区远膜端参与LIF受体的信号转导 ,其效应是抑制细胞的增殖 ,促进细胞分化。
- 杨玲刘善荣汤淑萍王凤玫刘厚奇
- 关键词：受体ΑCD15胞内区Α亚基增殖分化
- 人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4的克隆及其在大肠杆菌中的表达(英文)被引量：2
- 2003年
- 目的 :克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4 ,并使其在大肠杆菌中表达。 方法 :取 4～ 6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜 ,利用RT PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA ,并插入到原核表达载体 pGEX5T中 ,构建成 pGEX5T Oct4重组质粒。β硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导使该基因在k80 2菌中表达。 结果 :用PCR方法扩增获得大小约 1 .1kb条带 ;全自动测序与GenBank中登录的序列 97%同源。获得了pGEX5T Oct4重组子并在k80 2菌中获得了表达 ,SDS PAGE分析有一特异性的 6 2 0 0 0条带。 结论 :扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达 。
- 刘善荣王庆敏杨玲汤淑萍惠宁蒋正戚中田刘厚奇
- 关键词：OCT4克隆基因克隆基因表达
