汤文文
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金江苏省教委自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 毛冠鹿大脑组织全长cDNA文库构建被引量：2
- 2006年
- 运用SMART技术构建了毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)大脑组织全长cDNA文库。提取大脑组织总RNA,Oligotex mRNA Kit纯化、获得poly(A)+RNA,以CDSⅢ/3′PCR引物进行逆转录,LD-PCR扩增获得全长双链cDNA,经SfiⅠ酶切及柱层析分离后,500 bp以上的片段与载体λTripIEx2连接,体外包装得到cDNA文库。经鉴定原始文库滴度为5.1×105pfu/ml,扩增后文库滴度为1.5×109pfu/ml,重组率达到85%以上,插入片断平均长度约为1.0 kb,说明构建文库质量符合要求,可用于大脑特异表达基因的筛选。从该文库中克隆到了rig基因全长,包含5′和3′非编码区,从第43至477个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框可编码一个145氨基酸的rig蛋白。
- 汤文文张文曹祥荣张锡然徐春茂王强胡均
- 关键词：毛冠鹿大脑CDNA文库SMART技术
- 毛冠鹿大脑组织cDNA文库构建及神经递质转运蛋白基因的克隆与分析
- 运用SMART技术构建了毛冠鹿/(Elaphodus cephalophus/)大脑组织全长cDNA文库。提取大脑组织总RNA，Oligotex mRNA Kit纯化、获得poly/(A/)~+RNA，以CDS Ⅲ／3’...
- 汤文文
- 关键词：毛冠鹿大脑CDNA文库SOUTHERN杂交
- 文献传递
- 毛冠鹿睾丸组织cDNA文库的构建及P1精蛋白基因的克隆被引量：4
- 2006年
- 为构建毛冠鹿睾丸组织cDNA文库,用TRIzol试剂提取总RNA,利用SMART(switchingmechanismat5’endofRNAtranscript)技术合成cDNA第1链,双链cDNA经LDPCR(LongdistancePCR)扩增并经sfiⅠ酶切和过柱分级分离后,克隆入经sfiI酶切的λTrip1EX2载体,经体外包装而成cDNA原始文库。该毛冠鹿睾丸组织cDNA原始文库含有独立克隆数为5.52×105,重组率达90.8%。文库扩增后,滴度达1.05×109pfu/ml,插入cDNA平均长度为1.01kb。通过随机挑取噬菌斑,并克隆测序,从该文库中克隆了毛冠鹿睾丸组织特异表达基因:P1精蛋白基因(GenBank序列号:DQ299383),该cDNA具有5’和3’非编码区,从第95至250个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框编码一个51Aa的P1精蛋白。以上结果表明本文构建的毛冠鹿睾丸组织cDNA文库符合建库要求,可作为进一步克隆毛冠鹿睾丸组织特异表达基因的可靠材料。
- 张文汤文文庞宏曹祥荣戴君勇张锡然徐春茂王强胡均
- 关键词：毛冠鹿睾丸CDNA文库
- 毛冠鹿睾丸组织cDNA文库的构建及P1精蛋白基因的克隆
- ＜正＞毛冠鹿在种内出现多样性的染色体数目和形态（雄性2n=47,48,雌性2n=46,47,48）其染色体多态体现在性染色体上,可能是染色体进化过程中的一个过渡状态。本文利用SMART（Switching Mechani...
- 张文汤文文曹祥荣张锡然浦颖艳
- 文献传递
