毛日成
- 作品数：20 被引量：126H指数：5
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市基础研究重大（重点）项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 一种乙型肝炎病毒cccDNA的数字微滴PCR检测方法及其试剂盒
- 本发明属生物技术领域，涉及一种检测乙型肝炎病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸的方法以及试剂盒。本发明采用专用组织DNA提取试剂盒提取HBV DNA，并采用选择性荧光定量PCR技术对乙型肝炎病毒cccDNA进行检测，核酸提取后，...
- 张继明江培学毛日成
- 文献传递
- 一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立
- 2014年
- 目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.
- 李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明
- 关键词：抗药性表型
- 一种测定乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异的方法
- 本发明属医学检验领域，涉及药物耐药基因的检测方法，具体涉及一种测定乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异的方法。本发明方法克服现有技术的缺陷，通过设计特定引物，采用套式PCR方法进行扩增，所获扩增产物使用BglI、BseDI进行酶...
- 张继明毛日成尹有宽王新宇
- 文献传递
- 阿德福韦耐药乙型肝炎病毒毒株生物学特性的研究被引量：4
- 2009年
- 目的体外研究阿德福韦（ADV）耐药相关变异对于HBsAg产生及HBV复制等生物学特性的影响。方法收集12例在ADV治疗过程中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎患者血清，对其HBV反转录（RT）区进行PCR扩增和测序分析。对其中4例患者的HBV进行全基因扩增、测序、序列分析及克隆。将优势株的HBV全基因插入PHY106载体，构建成1．1拷贝HBV基因组表达载体，进而转染Huh7细胞，E1．ISA法检测细胞培养上清液中HBsAg及HBeAg水平，了解不同ADV耐药相关变异类型对HBsAg分泌的影响。抽提转染细胞内病毒核心颗粒HBVDNA，实时荧光定量PCR方法检测HBVDNA水平。将rtA181T／sW172＊变异株与rtA181非变异株质粒按不同比例混合，共转染Huh7细胞，检测上清液中HBsAg及细胞内病毒核心颗粒HBVDNA水平。结果在12例出现病毒学突破的患者中，10例出现ADV耐药相关位点变异，以rtA181变异为主，其中5例有rtA181T变异，4例为rtA181T／s＋rtN236T变异。将含rtA181T／sW172＊变异的质粒转染细胞后，上清液中不能检测到HBsAg，而含其他变异类型的质粒转染细胞后，上清液中HBsAg和细胞内病毒核心颗粒HBVDNA水平与非变异株相似；含不同变异的HBV临床分离株转染后的细胞内核心病毒颗粒HBVDNA水平未见明显差异。将rtA181T／sW172＊变异株及rtA181非变异株的质粒共转染后，随着rtA181非变异株比例的增加，上清液中HBsAg水平也逐渐增高，但细胞内核心病毒颗粒HBVDNA水平无明显差异。结论rtA181变异是ADV耐药相关性变异的主要类型，rtA181T变异较多见。rtA181T／sW172＊变异株可引起HBsAg分泌障碍，但rtA181非变异株可纠正rtA181T／sW172＊变异株的HBsAg分泌障碍。不同类型的ADV耐药相关变异对HBV的复制能力无显著影响。
- 李新艳尹有宽张继明毛日成马张妹翁心华
- 关键词：阿德福韦腺嘌呤病毒复制转染
- 乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及其应用方法
- 本发明属医学领域，涉及乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及其应用方法。本发明的乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针，是SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SE...
- 张继明刘红艳李义良毛日成尹永喜夏佳慧范丽丽李新艳
- 文献传递
- 阿德福韦治疗拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者的耐药率及耐药株进化情况被引量：56
- 2007年
- 目的观察阿德福韦单药长期治疗拉米夫定耐药CHB患者的耐药率，以及阿德福韦耐药相关性HBV变异及耐药株的动态变化。方法23例发生YMDD变异的CHB患者停用拉米夫定，口服阿德福韦10mg，1次／d，治疗68～116周，从患者基线和阿德福韦单药治疗后不同时间点的血清中抽提HBV DNA，采用直接PCR产物测序法进行耐药变异分析；对其中1例发生阿德福韦耐药患者的一系列血清进行基因克隆分析其HBV耐药株的进化情况。结果阿德福韦单药治疗48周的耐药率为4．3％，96周的耐药率为10．5％。HBV耐药株进化分析结果显示：阿德福韦单药治疗后，YMDD变异株比例逐渐下降而rtA181S变异株出现并逐渐增多，随着治疗时间的延长，又出现了rtA181s＋N236T联合变异株。阿德福韦变异株（rtA181S和rtA181S＋N236T联合变异株）对继起的阿德福韦联合拉米夫定治疗病毒学应答较差，并出现了1例阿德福韦与拉米夫定多药耐药联合变异株（rtM204I＋rtN236T）。结论拉米夫定耐药的CHB患者，换用阿德福韦单药长期治疗后，耐药率逐渐增加并可选择出多药耐药联合变异株。
- 秦艳丽张继明黄玉仙毛日成尹有宽章婉琴张清波邬祥惠翁心华
- 关键词：乙型乙型阿德福韦酯拉米夫定耐药
- 乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针及其应用方法
- 本发明属医学领域，涉及乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针及其应用方法。本发明的乙肝病毒拉米夫定耐药变异株的检测探针，是SEQ ID NO12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15...
- 张继明刘红艳李义良毛日成尹永喜夏佳慧范丽丽李新艳
- 文献传递
- 干扰素刺激基因IDO和ZAP抑制乙型肝炎病毒复制的机制研究
- 目前全世界有超过3.5亿的人群感染乙型肝炎病毒(HBV)，HBV感染已成为严重的公共卫生负担。目前α干扰素已被广泛应用于临床治疗慢性HBV感染;而在人体感染HBV的过程中，γ干扰素通过协调固有免疫和获得性免疫，也能起到抗...
- 毛日成
- 关键词：乙型肝炎病毒复制
- 文献传递
- 肝衰竭相关病因学对临床结局的预测价值被引量：8
- 2022年
- 目的评估影响不同亚型肝衰竭结局预判指标及人工肝支持系统治疗肝衰竭的效果。方法收集2020年1月至12月无锡市第五人民医院重症监护病房(ICU)收治的112例乙型肝炎(乙肝)和非乙肝肝衰竭患者的临床资料,分析急性、亚急性、慢加急性、慢加亚急性、慢性肝衰竭各亚型的相关病因,并比较人工肝支持系统治疗各型肝衰竭的疗效差异。采用Spearman相关性分析法分析各指标的相关性;采用多因素Logistic回归方程分析影响肝衰竭患者预后的危险因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),评价各危险因素对肝衰竭患者预后的预测价值。结果112例肝衰竭患者中由乙肝引起者63例,由非乙肝引起者49例;乙肝肝衰竭组男性是女性的6倍,高于非乙肝肝衰竭组(1.33倍)。乙肝肝衰竭组亚急性肝衰竭患者抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)和总胆红素(TBil)水平均高于肝衰竭前期〔ATⅢ:(59.33±14.57)%比(35.66±20.72)%,TBil(μmol/L):399.21±112.94比206.08±126.96,均P<0.05〕;非乙肝肝衰竭组肝衰竭前期、慢性肝衰竭患者ATⅢ均明显高于急性肝衰竭患者〔(58.33±15.28)%、(44.00±19.10)%比(31.33±7.57)%,均P<0.05〕,急性肝衰竭患者TBil明显低于肝衰竭前期(μmol/L:107.83±49.73比286.20±128.92,P<0.05),亚急性和慢加急性肝衰竭患者TBil水平也明显高于肝衰竭前期(μmol/L:417.27±118.60、373.00±187.00比286.20±128.92,均P<0.05)。非乙肝肝衰竭组中亚急性肝衰竭、慢加亚急性肝衰竭和慢性肝衰竭患者住院时间均较急性肝衰竭患者明显延长(d:36.00±8.31、27.52±11.71、27.72±22.71比11.00±1.41,均P<0.05)。乙肝肝衰竭组和非乙肝肝衰竭组采用人工肝支持系统治疗病死率比较差异无统计学意义(55.6%比50.0%,P>0.05),两组存活患者ATⅢ水平均较死亡者明显升高〔乙肝肝衰竭组:(36.20±6.26)%比(27.33±8.87)%,非乙肝肝衰竭组:(41.06±4.16)%比(28.71±12.35)%,均P<0.01〕。相关性分析显示:乙肝肝
- 阎岩吕春燕周学士周美芳毛日成Davgadorj Chantsalmaa张英陆忠华
- 关键词：肝衰竭人工肝支持系统乙型肝炎总胆红素
- 恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒株的出现和消失被引量：10
- 2007年
- 目的1例拉米夫定耐药患者在接受恩替卡韦治疗过程中出现恩替卡韦耐药相关性变异,继续治疗后恩替卡韦耐药株自动消失,并发生HBeAg血清学转换,对该例患者HBV耐药株的动态变化进行了动态观察。方法收集该患者的系列血清标本及血清HBV DNA、转氨酶等系列临床数据,采用血清HBV DNA的PCR扩增与直接测序,限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,RT序列的克隆与测序等方法,检测HBV耐药株的比例及动态变化。结果该患者在应用恩替卡韦治疗前就已经存在拉米夫定耐药株(rtL180M+rtM204V),在恩替卡韦治疗后拉米夫定耐药株一度被抑制,随着治疗时间的延长,拉米夫定耐药株的比例又占主导地位。在此基础上,于恩替卡韦治疗第128周,选择出恩替卡韦耐药株(rtL180M+rtM204V+rtT184L),临床上伴随有ALT和HBV DNA水平的反弹。该例患者在发生恩替卡韦耐药后继续接受恩替卡韦治疗,恩替卡韦耐药株自行消失,HBV DNA转阴(套式PCR方法),ALT复常,并出现HBeAg血清学转换。结论恩替卡韦可有效地治疗拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者,但长期单药治疗可出现恩替卡韦耐药;在出现恩替卡韦耐药后,继续应用恩替卡韦仍然有效,甚至可发生HBeAg血清学转换和HBV DNA的清除。在恩替卡韦治疗过程中,在出现恩替卡韦变异株之前,可能需要先出现拉米夫定耐药株,在此基础上再选择出恩替卡韦耐药株。
- 毛日成张继明尹有宽秦艳丽章婉琴张清波邬祥惠翁心华
- 关键词：乙型肝炎病毒慢性乙型肝炎拉米夫定耐药
