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体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元分化: 本文对体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元分化进行了研究。文章根据体外已经成功诱导神经干细胞和胚胎干细胞分化为DA能神经元的方法，通过在体外联合应用细胞营养因子和化学诱导剂诱导人BMSCs向DA能神经元进行分化，...; 柴立辉; 关键词：精神病治疗神经元分化干细胞移植; 文献传递

OCILRP2-Fc抑制小鼠树突状细胞的发育成熟: 研究背景:树突状细胞(dendritic cells,DC)是体内唯一能够激活初始T淋巴细胞的抗原提呈细胞,在连接固有免疫和适应性免疫中起桥梁作用。DC的发育分化是一个十分复杂的过程,许多因素参与调控DC的发育分化过程。...; 李伟华柴立辉吴素霞杨菲刘广超马远方; 关键词：树突状细胞脂多糖核因子КB; 文献传递

沉默TNFAIP8基因的方法及其在肿瘤治疗中的应用: 本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种沉默<i>TNFAIP8</i>基因的方法及其在肿瘤治疗中提高顺铂(CDDP)治疗效果的应用。沉默TNFAIP8基因的方法具体包括：设计siRNA靶序列、设...; 柴立辉马远方吴素霞张赛男杨菲李伟华冯世明顿国庆刘广超

医学免疫学教学中引入PBL教学法的探讨被引量：11: 2010年; 根据医学免疫学的教学现状,将PBL教学法引入免疫学教学实践,探讨PBL教学法在免疫学教学中的应用效果,并由此提出PBL教学法在医学教育中应用的问题及对策。; 柴立辉刘瑞敏刘峰涛白慧玲马远方; 关键词：医学免疫学教学方法 PBL教学

体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元被引量：6: 2007年; 骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓中的非造血干细胞,在体外一定条件下可向神经细胞分化。本实验通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化BMSCs,并用脑源性神经营养因子(BDNF)、forskolin(FSK)和多巴胺(DA)联合对BMSCs进行诱导,电子显微镜观察诱导后细胞是否具有成熟神经元的超微结构特点;免疫细胞化学和RT-PCR检测DA能神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3、和Lmx1b的表达。结果显示:诱导2周后,电镜下可见细胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体,以及神经丝。RT-PCR结果显示NSE(neuron specific enolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达;免疫细胞化学表明诱导2周后TH阳性细胞的表达较诱导3d后明显提高。上述结果表明BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs定向分化为DA能神经元。; 邢莹柴立辉吴素霞陈中德许燕韩雪飞曹孟德鄢文海; 关键词：骨髓间充质干细胞多巴胺能神经元脑源性神经营养因子电子显微镜

神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达: 2011年; 目的:检测神经受体在人骨髓源性神经细胞上的表达,探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSC)体外诱导分化为神经细胞的方法及人骨髓源性神经细胞的功能特征。方法:分离纯化hBMSC,流式细胞仪检测CD34、CD45、CD44、CD117在hBMSC上的表达;应用DMSO/BHA/FSK/BDNF联合诱导hBMSC向神经细胞分化;免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和多巴胺D2受体(DRD2)的表达;RT-PCR检测DRD2、γ-氨基丁酸A(GABAA)受体-α2亚基、5-羟色胺2(5-HT2)受体mRNA的表达。结果:流式细胞仪检测显示hBMSC的间充质干细胞相对特异性抗原CD44、CD117表达阳性,造血干细胞特异性抗原CD34、CD45表达阴性;hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导培养3d后,免疫细胞化学染色结果显示有NSE、DRD2阳性细胞;RT-PCR检测结果显示DRD2、GABAA受体-α2亚基、5-HT2受体的mRNA表达阳性。结论:hBMSC经DMSO/BHA/FSK/BDNF诱导可分化为神经细胞,并表达DRD2等多种神经受体,有望成为应用细胞移植治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。; 吴素霞柴立辉鄢文海邢莹; 关键词：骨髓间充质干细胞分化神经细胞神经受体

破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2014年; 目的:为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体,用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法:构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2,将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株;Protein A亲和层析从CHO细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价,Western blot验证多克隆抗体的特异性,并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的表达。结果:ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现,且该条带可以被抗人IgG检测到;重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1 280 000和1∶320 000,Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在DC的表达发现OCILRP2在成熟DC的表达明显高于不成熟DC。结论:获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体,为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。; 吴素霞柴立辉王战争刘广超田文志马远方; 关键词：真核表达多克隆抗体树突状细胞

体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化的研究: 目的:通过体外诱导人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向多巴胺(do- pamine,DA)神经元分化,探讨BMSCs分化为神经元后的功能特征。方法:通过...; 柴立辉吴素霞鄢文海邢莹马远方; 关键词：骨髓间充质干细胞分化多巴胺神经元脑源性神经营养因子; 文献传递

沉默TNFAIP8基因对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响被引量：8: 2015年; 目的 :通过沉默肿瘤坏死因子α诱导的蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)的表达,研究其对宫颈癌He La细胞生物学特性的影响,并探讨TNFAIP8在He La细胞增殖、迁移及凋亡中可能的作用机制。方法 :构建特异性针对TNFAIP8基因的慢病毒载体,感染He La细胞后沉默TNFAIP8基因的表达,分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TNFAIP8 m RNA及蛋白在He La细胞中的表达情况。划痕实验及平板克隆形成实验检测沉默TNFAIP8基因表达对He La细胞的迁移和增殖能力的影响。MTT法及锥虫蓝染色计数法检测血清饥饿处理后He La细胞的存活能力,FCM法检测血清饥饿状态下He La细胞的凋亡情况。结果 :实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,TNFAIP8-shR NA转入HeL a细胞后,TNFAIP8 mR NA(P<0.05)及蛋白的表达水平均被明显下调。划痕实验和克隆形成实验结果显示,沉默TNFAIP8基因在HeL a细胞中的表达,明显抑制了HeL a细胞的迁移和增殖能力(P值均<0.05)。血清饥饿处理后的HeL a细胞中,TNFAIP8沉默组细胞的存活能力显著降低,而凋亡率显著增加(P值均<0.05)。结论 :TNFAIP8作为一种致癌基因能促进人宫颈癌He La细胞的迁移和增殖,并抑制He La细胞的凋亡。; 吴素霞张赛男李伟华杨菲冯世明柴立辉; 关键词：宫颈肿瘤

OCILRP2-Fc抑制小鼠骨髓来源的树突状细胞分化成熟: 2015年; 目的:采用OCILRP2胞外段蛋白OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体,探讨OCILRP2对小鼠树突状细胞发育成熟的影响及其机制。方法:分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),荧光定量RT-PCR和流式细胞术分析OCILRP2在不成熟BMDC和LPS诱导的成熟BMDC的表达差异;流式细胞术分析OCILRP2-Fc对BMDC细胞表面标志分子的表达以及对BMDC抗原摄取能力的影响;ELISA检测培养上清中细胞因子的浓度,分析OCILRP2-Fc对BMDC分泌炎性细胞因子的影响;Western blot检测转录因子NF-κB的活化,分析OCILRP2-Fc影响BMDC分化成熟的分子机制。结果:荧光定量RT-PCR和流式细胞术结果均表明LPS可以显著上调OCILRP2在BMDC的表达(P<0.05);与对照组相比,OCILRP2-Fc可以明显抑制MHCⅡ类分子及共刺激分子CD80在LPS诱导的成熟BMDC的表达;和成熟BMDC相比,OCILRP2-Fc组BMDC经LPS诱导24 h后仍然具有较强的抗原吞噬能力;而且,OCILRP2-Fc组BMDC培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α的浓度明显低于对照组(P<0.05)。Western blot结果表明OCILRP2-Fc抑制了LPS诱导的I-κB降解和NF-κB p65的磷酸化。结论:OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号,通过抑制LPS诱导的NF-κB活化影响小鼠BMDC分化成熟。提示OCILRP2受体在树突状细胞的分化成熟过程中具有促进作用。; 柴立辉李伟华杨菲刘广超马远方吴素霞; 关键词：树突状细胞脂多糖核因子ΚB

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柴立辉

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