杨德刚
- 作品数：8 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三种检测乙型肝炎病毒YMDD自然变异方法的比较
- 2010年
- 目的筛选一种特异性及灵敏性较高的检测乙型肝炎病毒YMDD自然变异的方法。方法通过分子克隆的方法,构建YMDD、YVDD及YIDD三种质粒;通过检测不同比例混合的质粒,比较PCR产物直接测序法、单探针特异性荧光PCR技术及引物特异性荧光PCR技术三种检测方法。结果经酶切鉴定及直接测序鉴定,显示三种质粒构建成功;当待测模板占总模板的比例大于20%时,直接测序法才能准确检测;当突变株占总毒株的比例占50/51时,单探针特异性荧光PCR法才能判定该样品为YMDD变异型;当突变株占总毒株的比例高于1/11时,引物特异性荧光PCR技术非特异结合的影响可忽略,具有很好的特异性,同时具有较高的灵敏性,检测突变株占总毒株的最低比例可达到1/11。结论引物特异性荧光PCR技术特异性及灵敏性较高,适合用于乙型肝炎病毒YMDD自然突变株的检测。
- 闵晓春赵书民杨德刚
- 关键词：乙型肝炎病毒YMDD自然变异PCR
- 散发性成人急性乙型肝炎的流行特点与临床特征被引量：7
- 2009年
- 目的观察分析成人急性乙型肝炎（AHB）的流行特点及临床特征，探讨成人HBV感染的防治策略。方法以120例住院的成人AHB患者为研究对象，采取病区及电话预约门诊随访的方法，调查收集患者的流行病学资料，动态观察AHB临床特点与流行规律。结果流行病学：①性别与年龄：男女比例为3：1，发病高峰男性为30～50岁，女性为18～30岁，男女平均年龄相比差异具有统计学意义（P〈0．01）；②职业构成：商业服务人员占24％，工人22％，管理人员18％，技术与文职人员17％，无业人员9％，农渔民7％，学生3％；③暴露因素：可能经性途径传播的26．7％，非正规医院注射、口腔就医、微创手术、有创美容、修脚、针灸、共用剃须刀、吸毒等分别占5．0％、5．0％、3．3％、3．3％、3．3％、2．5％、0．8％，0.8％，其中49．2％的患者暴露因素不详；④发病时间：无明显季节差别。临床特征：①疾病谱以黄疸型为主，占93．3％；②一过性急性肝损伤，入院时平均ALT水平为1578IU／L，ALT平均恢复正常的时间为（19．99±5．63）d；③未经抗病毒治疗均顺利恢复健康。结论密切接触，尤其是性接触为目前成人散发性急性HBV感染的主要传播方式。医源性传播途径仍是HBV感染的重要暴露因素，但仍有近半数感染途径不明。不同性别、不同职业暴露HBV的风险不同。黄疸型为主的疾病谱及一过性肝损伤的良性经过是AHB较鲜明的临床特征。
- 李东良缪晓辉苗千里赵书民杨德刚汪磊
- 关键词：流行病学
- 胡黄连总苷抑制乙型肝炎病毒复制作用的体外研究被引量：2
- 2009年
- 目的观察胡黄连总苷抑制HepG2．2．15细胞内HBV共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）的作用效果及特点。方法分别用50mg／L胡黄连总苷或5mg／L阿德福韦酯的细胞培养液作用于HepG2．2．15细胞，加药后2d、5d收集细胞及培养上清液，实时荧光定量PCR方法检测上清液和细胞内HBVDNA、细胞内HBV cccDNA和前基因组RNA（pgRNA）水平，分别计算抑制率。均值比较用t检验。结果胡黄连总苷作用2d和5d后，上清液HBVDNA抑制率为49．74％（t=4．723，P〈0．05）和79．48％（t=7．512，P〈0．05）；细胞内HBV cccDNA抑制率为43．55％（t=5．216，P〈0．05）和56．43％（t=7．262，P〈0．05），总DNA抑制率为43．39％（t=4．137，P〈0．05）和63．86％（t=7．861，P〈0．05），pgRNA抑制率为54．72％（t=4．532，P〈0．05）和56．08％（t=4．833．P〈0．05）。阿德福韦酯作用2d和5d后，上清液HBVDNA抑制率为25．56％（t=2．874，P％0．05）和92．44％（t=10．276，P〈0．05）；细胞内HBV cccDNA抑制率为18．54％（t=2．736，P〈0．05）和47．19％（t=6．852．P〈0．05），总DNA抑制率为21．20%（t=3．206，P〈0．05）和71．47％（t＝8．332，P〈0．05），pgRNA抑制率为11．14％（t=1．761，P〉0．05）和37．61％（t=3．632，P〈0．05）。结论胡黄连总苷能明显抑制HepG2．2．15细胞内HBV复制，尤其对cccDNA具有抑制作用，在作用时相上早于阿德福韦酯，可能存在不同的作用机制。
- 杨德刚缪晓辉赵克开徐文胜何芳唐百花
- 关键词：胡黄连皂苷类
- 对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的再认识被引量：8
- 2007年
- 乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）是乙肝病毒前基因组RNA（pgRNA）的转录模板，对HBV的循环复制以及感染状态的建立均有十分重要的意义。从cccDNA的角度重新认识HBV感染和清除过程，有助于澄清现有的一些模糊概念，更深刻地理解HBV的致病机制，更理性地确定抗病毒治疗的策略和目标，
- 杨德刚缪晓辉
- 关键词：共价闭合环状DNACCCDNAHBV感染抗病毒治疗乙肝病毒
- 对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的再认识
- 乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(covalentlyr closed ciwular DNA,cccDNA)是乙肝病毒前基因组RNA (pgRNA)转录的原始模板,对乙肝病毒的循环复制以及感染状态的建立均有十分重要的意义...
- 杨德刚缪晓辉
- 文献传递
- 肝移植患者外周血单个核细胞中HBV DNA检测及临床意义被引量：2
- 2006年
- 目的 研究乙型肝炎肝硬化终末期患者肝移植后外周血单个核细胞（PBMC）HBV DNA状态及临床意义。方法 应用荧光PCR技术检测乙型肝炎肝硬化终末期肝移植术后30例患者血清及PBMC标本HBV DNA，并用细胞计数法和管家基因β-actin标定PBMC HBV DNA，观察PBMC HBV DNA与血清HBV DNA定量关系；观察患者肝移植术后不同时间PBMC HBV DNA水平。30例对照组为肝炎肝硬化失代偿期患者。结果 移植后患者19份（63％）PBMC标本HBV DNA阳性，低于对照组（87％，26／30）。以C1值为定量参数，移植后患者PBMC HBV DNA水平显著低于对照组（P=0．02）；肝移植术后患者PBMC HBV DNA长期维持于10^3～10^4拷贝，106细胞水平，与肝移植后时间无明显关系。移植后患者血清HBV DNA均阴性，而对照组血清阳性率为48％。结论乙型肝炎肝硬化终末期患者肝移植术后，经有效预防HBV再感染治疗后，虽然血清中不能测出HBV DNA，但PBMC中HB VDNA阳性，这可能成为肝外“病毒池”，导致供肝再感染；对移植后患者监测PBMC HBV DNA，可能有助于早期诊断HBV再感染或复发。
- 郝勇缪晓辉赵克开李东良杨德刚
- 关键词：乙型肝炎病毒肝移植外周血单个核细胞实时荧光PCR
- 对乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的再认识
- 乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(covalently closed cimularDNA，cccDNA)是乙肝病毒前基因组RNA(pgRNA)的转录模板，对乙肝病毒的循环复制以及感染状态的建立均有十分重要的意义。从ccc...
- 杨德刚缪晓辉
- 关键词：乙型肝炎病毒基因组DNA肝炎病理机制
- 文献传递
- 慢性乙型肝炎病毒感染者病毒YMDD的自然变异被引量：13
- 2009年
- 目的了解慢性HBV感染患者外周血HBV YMDD自然变异情况及其影响因素。方法采用引物特异性实时荧光PCR法检测慢性HBV感染者外周血HBV YMDD变异情况，并对影响YMDD自然变异检出率的可能因素进行单因素及多因素分析。根据不同资料分别采用Х^2检验、Fisher＇s确切概率法、t检验、秩和检验及Logistic回归分析进行统计学处理。结果在196例未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者中，检出存在YMDD自然变异株感染者21例（10．70％），其中YVDD阳性20例，YIDD阳性1例；变异毒株占总病毒株超过50％者1例，25％～50％者5例，9％～25％者15例。B基因型HBV感染病例中YMDD变异株的检出率（20．00％，12／60）显著高于C基因型HBV感染病例（7．38％，9／122），Х^2=6．28，P〈0．05。患者性别、年龄、HBeAg状态、HBV DNA载量、疾病状态、病毒感染时间对YMDD自然变异株的检出率无显著影响。结论在未经抗病毒治疗的慢性HBV感染者中存在HBV YMDD自然变异；YMDD自然变异的发生率与患者性别、年龄、HBeAg状态、HBV DNA载量、疾病状态、感染时间无显著相关性。B基因型较C基因型HBV更易出现YMDD自然变异。
- 闵晓春缪晓辉赵书民赵克开杨德刚
- 关键词：基因型YMDD自然变异
