李洪哲
- 作品数：17 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学历史地理更多>>
- 一种检测血清中抗EV‑D68病毒抗体的方法
- 本发明公开了一种检测血清中抗EV‑D68病毒抗体的方法。提取EV‑D68病毒基因组RNA，通过反转录和PCR扩增反应得到VP1基因的cDNA，将其克隆到克隆载体，再将转入表达载体得到重组表达质粒，转化宿主菌并用IPTG诱...
- 刘龙丁郑惠文孙明王晶晶郭磊李冰香龙海亭李洪哲范海涛杨泽宁储曼曼黄星
- 文献传递
- 肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究被引量：1
- 2019年
- 目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。
- 郑惠文杨智尧杨泽宁宋杰黄星李楠丁丽莎李恒李洪哲郭磊储曼曼施海晶刘龙丁
- 脊髓灰质炎疫苗序贯免疫程序的研究与应用进展被引量：14
- 2016年
- 脊髓灰质炎（脊灰）是由脊灰病毒引起的急性肠道传染病,传播广泛,对儿童的健康和生命危害极大。口服脊灰减毒活疫苗（Oral Attenuated Poliovirus Vaccine,OPV）是全球消灭脊灰行动的首选疫苗,已使II型脊灰野病毒于1999年在全球消灭;但在极少情况下会发生疫苗相关麻痹型脊灰（Vaccine-associated Paralytic Poliomyelitis,VAPP）和疫苗衍生脊灰病毒（Vaccine-derived Poliovirus,VDPVs）病例。为了避免这些风险,许多国家常规免疫规划已不再单独使用OPV,而是改用脊灰灭活疫苗（Inactivated Polio Vaccine,IPV）。这些国家在OPV转换成IPV期间,大部分采用了先接种1~2剂IPV,再接种≥2剂OPV的序贯免疫程序。IPV-OPV序贯免疫方案可减少或预防VAPP,同时又能保持较高的体液免疫和肠道黏膜免疫力,能更好地阻断脊灰野病毒在自然界的循环。根据WHO建议,常规免疫规划中只使用OPV的国家应当调整脊灰免疫策略,引进至少1剂次IPV,采取IPV-OPV序贯免疫策略或联合使用OPV和IPV的策略。相信这些转变将会加快全球消灭脊灰野毒株的进程,对实现全球最终根除脊灰的目标具有重要的意义。
- 李洪哲孙明波杨净思
- 关键词：脊髓灰质炎口服脊髓灰质炎减毒活疫苗脊髓灰质炎灭活疫苗
- 芬太尼对兔定量药物脑电图β_2频段功率百分比的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探讨芬太尼对兔定量药物脑电图(QPEEG)β2频段功率的影响及其与阿片受体的关系。方法 36只家兔,分6组(n=6):NS组(生理盐水1 ml.kg-1)、NA组(纳洛酮200μg·kg-1)、LD组(芬太尼10μg·kg-1)、MD组(芬太尼20μg·kg-1)、HD组(芬太尼40μg·kg-1)和NAF组(纳洛酮200μg·kg-1+芬太尼40μg·kg-1),应用QPEEG,采用功率谱分析法,观察兔给药前后β2频段百分比的变化。结果与给药前相比,NS组、LD组和NA组β2频段功率百分比无明显变化(P>0.05);MD组和HD组中β2频段功率百分比在大部分脑区增加(P<0.05,P<0.01),此改变与芬太尼剂量呈正相关。除少数时点、个别脑区外,NAF组β2频段功率百分比均与给药前相似(P>0.05)。结论芬太尼以剂量依赖方式增加兔QPEEGβ2频段功率百分比,纳洛酮可拮抗此作用,表明阿片受体介导了这一过程,提示β2功率百分比可能作为反映镇痛程度的监测指标。
- 李贺赵健韦慧李洪哲韩平平戴体俊邵东华杭黎华
- 关键词：芬太尼纳洛酮阿片受体定量药物脑电图
- 白细胞介素1受体1和白细胞介素6双基因敲除小鼠的构建及基因型鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的通过白细胞介素1受体1 （interleukin-1 receptor1, IL-1R1）和白细胞介素6 （interleukin-6，IL-6）单基因敲除小鼠杂交繁育以获得IL-1R1-/-IL-6-/-纯合子小鼠。方法将IL-1R1＋/＋IL-6-/-和IL-1R1-/-IL-6＋/＋小鼠杂交，并进行子代自交繁殖，提取基因组DNA，PCR鉴定其自交子代基因型。并用免疫印迹法（Western blot）、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）确定自交小鼠后代基因型。
结果PCR鉴定成功获得基因型为IL-1R1-/-IL-6-/-的双基因敲除小鼠。Western blot结果显示，双基因敲除小鼠未见IL-1R1的蛋白条带；ELISA结果提示，双基因敲除小鼠的IL-6细胞因子为阴性。结论成功获得IL-1R1-/-IL-6-/-双基因敲除纯合小鼠，为深入研究IL-1R1、IL-6基因相关的炎症疾病动物模型奠定基础。
- 范海涛李恒郭磊王晶晶储曼曼黄星郑惠文杨泽宁李洪哲刘龙丁
- 关键词：基因敲除小鼠基因型鉴定
- 吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗加强免疫效果及安全性评价被引量：3
- 2020年
- 目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-HepB-sIPV)免疫大鼠后加强免疫效果及安全性。方法以中、低剂量与铝佐剂相互配伍的不同sIPV配方设计4个DTaP-HepB-sIPV联合疫苗实验组,即中剂量含铝佐剂sIPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂sIPV组(B组)、低剂量含铝佐剂sIPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂sIPV组(D组),并设相应各组分的对照组和Infanrix hexaTM疫苗参考组。以已完成3剂基础免疫的Wistar大鼠为实验动物,在全程免疫第16个月接种1剂次加强免疫,进行安全性评价,并比较加强免疫前后各组大鼠血清中各组分抗体水平、中和抗体几何平均滴度(GMT)及阳转率,同时观察加强免疫对大鼠外周血中淋巴细胞的影响。结果加强免疫后未观察到不良反应,大鼠接种部位未见红肿、硬结、溃烂等现象,且各组大鼠体重维持稳定。加强免疫后30 d,各组大鼠各型别脊灰病毒中和抗体均为阳性,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率A组分别为100%、71.4%、85.7%,B组分别为71.4%、85.7%、100%,C组分别为80%、80%、100%,D组分别为71.4%、100%、85.7%;A组诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于B组,且可达到或超过参考组;B、D组诱导产生的各型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组水平。加强免疫后,各组百白破各组分抗体GMT有5~106倍增长,联合疫苗实验组GMT与对照组相比,总体上差异无统计学意义(P>0.05)。加强免疫后,乙肝抗体阳转率乙肝对照组为66.7%,B组为55.6%,C组为50%,A组为16.7%,D组为14.3%,参考组为0%;各组Anti-HBsAg水平有不同程度的升高,但两两相比,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DTaPHepB-sIPV具有良好的安全性,sIPV中剂量含铝佐剂的DTaP-HepB-sIPV联合疫苗所诱导的各抗体水平更加稳定持久,可作为未来疫苗最佳配比的参考。
- 李洪哲郑惠文陈梦娇邓燕许秀雯叶慧刘小畅孙明波杨净思
- 关键词：白喉破伤风加强免疫
- 细胞自噬对甲型流感病毒H1 N1感染A549细胞过程中病毒复制及Ⅰ型干扰素表达的影响被引量：3
- 2017年
- 目的 通过研究细胞自噬在甲型流感病毒H1 N1感染细胞过程中对病毒复制及Ⅰ型干扰素表达的影响,为进一步阐明流感病毒感染机制提供实验资料.方法 利用自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）抑制细胞自噬,流式细胞术检测3-MA对细胞凋亡的影响,激光共聚焦显微镜观察H1N1感染A549细胞后的自噬现象,利用real-time PCR检测自噬被抑制前后病毒拷贝数的变化以及Ⅰ型干扰素（typeⅠinterferon,IFN-Ⅰ）产生通路各基因mRNA表达量的变化.分析细胞自噬对病毒复制及干扰素表达的影响.结果 当H1N1感染A549细胞后可诱导细胞产生不完全自噬,导致自噬体积累.当自噬被3-MA抑制后,TLR3-TLR7-MyD88-IRF7-IFN-α/β信号通路各基因mRNA表达量上调,与此同时病毒拷贝数及血凝滴度下调.结论 H1N1可能通过诱导不完全自噬逃逸了机体的抗病毒固有免疫应答,促进了自身复制和存活.
- 李嘉祺胡雅洁宋杰李洪哲王晶晶郭磊郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁刘龙丁
- 关键词：细胞自噬甲型流感病毒
- 脊髓灰质炎疫苗序贯免疫程序的研究与应用进展
- 灰质炎(脊灰)是由脊髓灰质炎病毒引起的急性肠道传染病,传播广泛,对儿童的健康和生命危害极大.口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)是全球消灭脊灰行动的首选...
- 李洪哲杨净思
- 关键词：脊髓灰质炎疫苗体液免疫
- 利用反向遗传学技术构建H5N9重组流感病毒株被引量：1
- 2017年
- 目的利用反向遗传学技术构建来源人感染禽流感病毒H5N1和H7N9HA和NA基因的H5N9亚型禽流感病毒。方法全基因合成A／Beijing／01／2003（H5N1）禽流感病毒HA基因片段和A／Zhejiang／DTID-ZJU10／2013（H7N9）禽流感病毒NA基因片段，插入到pHW2000载体，与携带有AfPuertoRico／8／34（H1N1）的6个内部基因的pHW2000重组质粒一起转染293T和MDCK混合细胞，拯救H5N9重组病毒。结果核酸测序、HA和NA基因转录和表达检测、细胞病变分析确定利用该反向遗传学系统可以成功拯救H5N9病毒。重组H5N9病毒在MDCK细胞上复制增殖能力低于相同方法拯救H1N1病毒。结论利用反向遗传学技术成功构建一株H5N9重组病毒。
- 郭磊宁若彤王晶晶郑惠文李嘉祺范海涛李洪哲杨泽宁刘龙丁
- 关键词：反向遗传技术甲型流感病毒
- 吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗的免疫持久性被引量：4
- 2017年
- 目的观察不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTa P-Hep B-s IPV)免疫大鼠后的免疫持久性。方法以中、低剂量s IPV与铝佐剂相互配伍的不同配方设计4个DTa P-Hep B-s IPV实验组,即中剂量含铝佐剂s IPV组(A组)、中剂量不含铝佐剂s IPV组(B组)、低剂量含铝佐剂s IPV组(C组)、低剂量不含铝佐剂s IPV组(D组),并设各组分相应的对照组和上市联合疫苗的参考组。以已完成3剂DTa P-Hep B-s IPV全程基础免疫的Wistar大鼠为研究对象,在全程基础免疫后第1、2、4、7、10、12个月釆血,检测各组大鼠血清中各组分抗体阳性率及抗体水平(GMT值)。结果基础免疫后观察全程,A组各型别脊灰病毒中和抗体阳性率持续保持在100%,B组为90%~100%,C组为80%~100%,D组为55.6%~100%。A、C组所诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT均高于同等剂量不含铝佐剂的B、D组,且均达到或超过参考组;B、D组所诱导的Ⅰ型脊灰病毒中和抗体GMT均低于同等剂量的相应对照组,但Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体GMT均能达到同等剂量相应对照组的水平。各组百白破抗体阳性率在观察全程均为100%,GMT与对照组相比总体上差异无统计学意义(P>0.05)。全程基础免疫后第12个月,乙肝抗体阳性率B组为70%、乙肝对照组为55.6%、A组为50%、C组为42.9%、D组和上市疫苗参考组均为30%,各组Anti-HBs Ag水平两两相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 s IPV中剂量含铝佐剂的DTa P-Hep B-s IPV所诱导的各组分抗体水平较稳定持久,可作为未来疫苗配比的参考。
- 叶慧李洪哲郑惠文陈梦娇邓燕许秀雯刘小畅俞泽煦周海军孙明波杨净思
- 关键词：白喉破伤风免疫持久性
