李志杰
- 作品数：108 被引量：143H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学政治法律更多>>
- 基因Ⅶ型鹅副粘病毒NA-1株全基因组克隆及演化特点
- 将本实验室分离保存的NA-1株鹅副粘病毒经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank已收录的鹅副粘病毒ZJ1株基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病...
- 丁壮徐明毕玉海李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉
- 关键词：新城疫病毒全基因组
- 文献传递
- 炭疽杆菌及炭疽病研究进展
- 炭疽杆菌是人类历史上第一个被发现的病原菌,由于其致病性较强以及可为作生物战剂,受到各国的广泛重视,同时对其致病性及生物学性质有了深入的认识。炭疽病作为一种人畜共患传染病,在世界很多国家频繁爆发流行,给国家和社会带来巨大的...
- 徐明毕玉海李志杰丁壮
- 关键词：炭疽炭疽杆菌人畜共患传染病
- 文献传递
- SLA-1不同等位基因与病毒CTLs表位特异性结合的研究
- 高彩霞姜骞刘家森郭东春刘大飞刘春国李志杰仇铮田进曲连东
- PK-15细胞的THBS3基因缺失抑制PRV复制
- 2023年
- 为探索猪血小板反应蛋白3(thrombospondin 3,THBS3)在PRV复制中的功能,利用CRISPR/Cas9系统构建THBS3基因缺失的PK-15稳定细胞株。首先,根据THBS3基因序列和CRISPR/Cas9靶点设计原则设计并合成2对sgRNA序列,退火后连接到Lenti-CRISPRv2慢病毒表达载体;与慢病毒包装质粒共转染人胚肾细胞(HEK293T)获得重组慢病毒,收集细胞上清并离心去细胞碎片后转导PK-15细胞,进行嘌呤霉素筛选获得THBS3敲除的PK-15细胞株;将重组病毒rPRV-GFP接种至野生型和缺失型细胞评价病毒复制差异。结果显示,表达sgRNA的重组质粒构建成功;将收获的慢病毒转导细胞后通过筛选获得1株无THBS3蛋白表达细胞株(PK-THBS3-KO),通过测序发现外显子3有1个碱基的插入;感染试验显示,THBS3基因缺失后抑制了PRV复制。结果表明,通过CRISPR/Cas9系统成功构建了PK-15的THBS3基因敲除的稳定细胞株,PRV感染试验显示基因缺失后抑制了病毒复制。
- 李志杰刘培欣杨涛张瑜宋海慧张闯王岳
- 关键词：PK-15细胞PRV
- PRRSV缺失变异毒株JL/07/SW株的分离鉴定及序列分析被引量：17
- 2009年
- 分离并鉴定了1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经病毒生物学特性测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒,将其命名为JL/07/SW株。根据猪繁殖与呼吸综合征病毒VR-2332株及变异毒株的核苷酸序列,设计合成了针对NSP2变异序列、N基因以及GP5基因的引物,扩增出正确的序列,经测定的序列比对后,发现该毒株为美洲型变异毒株,NSP2上缺失了30个氨基酸,而GP5和M基因相对保守。
- 李志杰丁壮孟轲音宣华王贵平高恩鹏丛彦龙母连志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因克隆与原核表达
- 根据GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒VR-2332毒株核苷酸序列,设计了扩增PRRSVJL/07/SW毒株GP5基因的1对引物,利用RT-PCR方法,从PRRSV JL/07/SW毒株的细胞培养物中成功的扩增出...
- 高恩鹏李志杰丁壮孟轲音宣华王贵平丛彦龙母连志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因原核表达基因扩增
- 文献传递
- 应用巢式PCR检测猪戊型肝炎病毒核酸及其序列分析
- 根据GENBANK注册的AJ272108等序列,参考Meng等的文献,利用Oligo6应用软件设计内外两对引物,采用RT-PCR技术对本实验室分离的猪戊型肝炎病毒进行探索性扩增,并对测定的序列进行分析,结果用套式引物扩增...
- 邱蜜蜜丛彦龙李志杰刘美尹仁福吴昊李少丽王昌庆丁壮
- 关键词：猪戊型肝炎病毒巢式PCR
- 文献传递
- 巴马小型猪主要固有免疫分子的克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 为了开展巴马猪的固有免疫相关研究,试验采用巴马小型猪的外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,利用特异性引物进行RT-PCR,将克隆片段与pc DNA3.1载体相连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆并进行测序,并将测序结果提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性。结果表明:克隆的巴马猪TLR7、TLR8、TLR9、VISA、STING和IRF3序列长度分别为3 075,3 087,3 097,1 575,1 260,1 137 bp,测序结果与预期相符,各序列与猪的同源性较高。
- 胡晓亮姜骞郭东春刘家森仇铮林欢刘培欣田进李志杰曲娟娟曲连东
- 关键词：巴马小型猪固有免疫克隆
- 鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达被引量：3
- 2007年
- 根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM○R-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)的核苷酸、氨基酸同源性分别为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析显示,表达的VP3蛋白的相对分子质量约60000,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。
- 毕玉海丁壮徐明李志杰常爽黄海楠宋子运尹仁福杜眉
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因原核表达
- 鹅副粘病毒的M基因序列分析及真核表达载体构建
- 本文通过将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液,提取并分离鹅源副粘病毒(NA-1株).参考已发表的鹅源副粘病毒Ⅰ型M基因序列,设计并合成了一对特异性引物,预期扩增的M基因包...
- 马爱霞徐明宋子运常爽李志杰毕玉海丁壮
- 关键词：鹅源副粘病毒M基因重组质粒真核表达
- 文献传递
