李志勇
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PDCD5和caspase 3在不同年龄段C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的检测程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5，PDCD5）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）在不同年龄段C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达，初步探讨其在年龄相关性听力下降发生、发展中的作用。方法选择3、6、9及12月龄段C57BL／6J小鼠各15只，即按月龄分为四组。检测各组小鼠双侧短声（click）及短纯音（6、8kHz）听性脑干反应（ABR）阈值。采用免疫组化和蛋白质印迹杂交（Western blotting）检测各月龄段小鼠耳蜗PDCD5和Caspase3蛋白的表达，实时荧光定量PCR（real—time PCR）检测各月龄段小鼠耳蜗PDCD5和caspase3基因mRNA的表达。结果随着年龄的增长，C57BL／6J小鼠各频率ABR阈值逐渐提高，耳蜗PDCD5和Caspase3蛋白的表达亦逐渐增强。3月龄和6月龄小鼠耳蜗毛细胞和血管纹细胞仅出现少量PDCD5和Caspase3蛋白表达，9月龄时表达有明显增加，至12月龄时表达最强，各月龄组间比较，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。Real—time PCR检测显示PDCD5和caspase3基因mRNA随着年龄的增长表达逐渐增强，与其蛋白变化趋势相一致。结论C57BL／6J小鼠耳蜗PDCD5和caspase3随着年龄的增长表达增强，与耳蜗的老化密切相关，可能是老年性聋发病机制中的一个重要因素。
- 王燕褚汉启周良强陈金李志勇刘云张平黄孝文崔永华
- 关键词：肿瘤蛋白质类凋亡调节蛋白质类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3耳蜗
- 卡那霉素联合呋塞米快速诱导小鼠耳蜗损伤被引量：12
- 2010年
- 目的探讨卡那霉素和呋塞米联合应用对小鼠耳蜗的毒性作用，建立一种可靠的小鼠感音神经性聋模型。方法选用3～4周龄的CBA／J小鼠为实验对象，按1g／kg的剂量皮下注射卡那霉素，30～45min后按0．4g／kg的剂量腹腔注射呋塞米。在注射前、注射后12h、24h、48h、7d、2周、4周及12周分别应用听性脑干反应（ABR）检测小鼠听觉功能的改变；应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽及碘化丙啶染色、半薄切片甲苯胺蓝染色、脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术、扫描电镜等观察小鼠毛细胞死亡的模式和程度；同时通过透射电镜观察记录耳蜗血管纹形态及厚度的变化。结果序贯应用卡那霉素及呋塞米后12h小鼠ABR阈值开始上升，随后的36h内持续进行性上升，继而稳定在90dB左右。应用激光共聚焦显微镜在药物注射后12h观察到耳蜗底回外毛细胞开始出现死亡，24h时底回外毛细胞基本全部消失，同时顶回外毛细胞开始出现死亡，至48h时整个耳蜗外毛细胞绝大部分死亡；而内毛细胞的损伤至给药后7d时才开始出现，随时间推移仍有部分内毛细胞完好无损。死亡的毛细胞均具有典型的凋亡细胞特征。扫描电镜观察发现在药物注射后受损毛细胞出现纤毛消失、表皮板塌陷，随后支持细胞增生并在该处形成瘢痕。血管纹表面边缘细胞在给药后出现部分胞体融合并且有坏死物自胞内排出，随后边缘细胞表面大部分微绒毛消失，胞体呈“石块”样改变。透射电镜结果显示血管纹厚度在给药后进行性下降，主要为边缘细胞萎缩造成。结论单次序贯应用卡那霉素及呋塞米能快速诱导小鼠耳蜗毛细胞大量死亡，适合应用于建立小鼠感音神经性聋模型。
- 熊浩褚汉启黄孝文崔永华周良强陈金李建玲王燕陈请国李志勇
- 关键词：卡那霉素呋塞米耳蜗小鼠
- 新生大鼠螺旋神经节细胞体外生长特点及脂质体介导的转染效率被引量：3
- 2010年
- 目的探讨螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）体外生长规律及特点,并观察阳离子脂质体转染SGCs的情况。方法从出生3~4 d的SD大鼠耳蜗中分离螺旋神经节组织,消化后放在含10%胎牛血清的DMEM/F12中培养,第2 d换用含2%B27及5μmol/L阿糖胞苷的Neurobasal培养基纯化SGCs,取第4 d活性良好的细胞爬片后,通过免疫荧光法用NF-200抗体鉴定SGCs;另外用质粒pEGFP-C2联合Lipofectamine 2000转染SGCs,观察其转染效率及对细胞活性的影响。结果体外培养的SGCs胞体饱满透亮,折光性好,一般能存活2周左右,第3~7 d活性最好。细胞对NF-200染色阳性;约10%的SGCs能被Lipofectamine 2000转染,但小部分细胞轴突缩短,甚至漂浮起来。结论含B27的Neurobasal培养基能培养出活性良好的SGCs;脂质体和质粒pEGFP-C2能成功地转染SGCs,但转染效率较低,并在一定程度上影响细胞的活性。
- 陈请国褚汉启王显红陈金李建玲周良强熊浩王燕李志勇崔永华
- 关键词：螺旋神经节细胞LIPOFECTAMINEB27
- Ⅱ型胶原酶体外分离并培养成年小鼠血管纹边缘细胞
- 2011年
- 目的探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外分离并培养成年小鼠耳蜗血管纹边缘细胞(marginal cell,MC)的方法。方法选取6只出生75±3 d的健康C57BL/6J小鼠,显微分离其耳蜗血管纹组织,以Ⅱ型胶原酶原代消化培养边缘细胞。倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)法测细胞生长曲线,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫荧光法检测上皮细胞标志物——中间丝角蛋白18(CK18)和耳蜗血管纹的独特标志物KCNQ1的表达,RT-PCR法检测CK18和KCNQ1mRNA的表达。结果接种24～48 h后可见细胞贴壁增殖,形成大小不等的细胞岛,一周后细胞迅速生长,相互融合,紧密连接,形成单层极性上皮层,呈典型的"铺路石"样外观。透射电镜观察可见多角形细胞表面有较多微绒毛,胞浆内线粒体、内质网等细胞器丰富。免疫荧光检测显示CK18和KCNQ1蛋白表达阳性,RT-PCR结果示CK18和KCNQ1mRNA均有表达。结论采用原代消化培养技术可成功建立成年小鼠耳蜗血管纹MC的体外原代培养,为进一步研究成年期MC的功能和某些内耳疾病的发病机制提供了实验基础。
- 王燕褚汉启周良强陈金李志勇刘云张平王春芳黄孝文崔永华
- 关键词：成年小鼠边缘细胞酶消化法细胞培养
- 不同类型慢性鼻窦炎患者前列腺素E2受体表达的比较研究
- 目的：慢性鼻窦炎(Chronic rhinosinusitis,CRS)是上呼吸道一种常见的,多发的炎症性疾病,其发病机制不明.临床上,CRS分为不伴鼻息肉的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis wi...
- 谢立崔永华廖波李志勇刘云刘爱国
- 关键词：慢性鼻窦炎前列腺素E2受体
- 文献传递
- C57BL／6J小鼠耳蜗钾离子转运蛋白KCNQ1和NKCC1的年龄相关性表达及其与听力的关系被引量：5
- 2011年
- 目的观察钾离子转运蛋白KCNQ1和Na-K-2C1联合转运子1（Na—K-2C1CO—transporter1，NKCC1）在C57BL／6J小鼠耳蜗侧壁的年龄相关．陛表达，探讨这两种转运蛋白在年龄相关性听力减退发病中的作用。方法通过听性脑干反应（ABR）检测C57BL／6J小鼠各年龄段（4、8、14、24、40周龄）的听力变化。应用免疫组化法确定KCNQ1和NKCC1在C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达定位，并检测各年龄段小鼠耳蜗中两种转运蛋白含量随着年龄增加的表达变化。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测KCNQ1和NKCC1的mRNA在不同鼠龄小鼠耳蜗中的表达水平。结果随着C57BL／6J小鼠年龄的增加，其ABR反应阈值逐渐升高，4周龄小鼠的短声（click）和4kHz、8kHz的ABR反应阈值与8周龄小鼠相比，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）；14周龄后，三种刺激声的ABR反应阈逐渐升高，与低龄组小鼠相比其差异均具有统计学意义（P值均〈0．05）。KCNQ1蛋白主要表达于耳蜗血管纹的边缘细胞顶膜，而NKCC1蛋白主要表达于血管纹边缘细胞、螺旋韧带的Ⅱ型纤维细胞及螺旋缘下的纤维细胞。随着年龄的增加，血管纹KCNQ1和NKCC1蛋白的表达逐渐减少。KCNQ1和NKCC1mRNA的表达量也随着年龄的增加呈现减少的趋势。结论C57BL／6J小鼠随着年龄的增加其听力逐渐下降。KCNQ1和NKCC1两种钾离子转运蛋白随着小鼠年龄的增加逐渐减少；KCNQ1和NKCC1mRNA表达水平亦呈现随年龄增加而逐渐减少的趋势。耳蜗侧壁KCNQ1和NKCC1可能在年龄相关性听力减退的发生中起一定作用。
- 李建玲褚汉启周良强熊浩王燕陈请国陈金李志勇刘云崔永华
- 关键词：老年性聋小鼠近交C57BL
- 2种钾离子转运蛋白在血管纹性老年性聋发病中的作用(不同基因型小鼠的听觉生理研究)被引量：5
- 2010年
- 目的探讨Na-K-2Cl联合转运子1(Na-K-2Cl cotransporter1,NKCC1)和α2Na,K-ATP酶(α2Na,K-AT-Pase)在血管纹性老年性聋(strial presbycusis)发病过程中的作用。方法分别以不同基因型的NKCC1小鼠(杂合子和野生型)和α2Na,K-ATPase小鼠(杂合子和野生型)为实验对象,检测小鼠生长过程不同阶段的听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)和耳蜗内电位(endocochlear potential,EP),以观察NKCC1和α2Na,K-ATPase基因缺陷与血管纹性老年性聋的关系。结果听性脑干反应检测结果显示,与NKCC1+/+野生型小鼠相比较,NKCC1+/-杂合子小鼠的ABR阈值在所有周龄组的各测试频率均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NKCC1+/-杂合子小鼠的听力随鼠龄增长而下降,与低龄小鼠相比,老龄小鼠的ABR阈值显著升高(均P<0.05)。NKCC1+/-小鼠的EP也随年龄增长而呈下降趋势,老龄小鼠的EP值与低龄小鼠相比明显降低(P<0.05)。α2Na,K-ATPase+/-杂合子小鼠的听力及EP低于同周龄组野生型小鼠,其听力随鼠龄增长而下降,高龄小鼠的ABR阈值与其低龄时相比明显升高(P<0.05)。结论只携带1个NKCC1或α2Na,K-ATPase等位基因的小鼠(杂合子)可呈现伴EP下降的年龄相关性听力下降,耳蜗侧壁的NKCC1和α2Na,K-ATPase基因缺陷可能在血管纹性老年性聋的发病中起一定作用。
- 褚汉启周良强熊浩王燕陈请国陈金李志勇李建玲黄孝文黄红彦崔永华
- 关键词：耳蜗内电位小鼠NA,K-ATP酶老年性聋
- 慢性鼻-鼻窦炎患者嗅觉障碍影响因素分析被引量：7
- 2014年
- 目的:探讨慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者嗅觉障碍的影响因素。方法:采用视觉模拟量表(VAS)对270例诊断明确的CRS患者的嗅觉障碍程度进行评分,分为嗅觉障碍影响生活质量组(VAS>5)及未影响生活质量组(VAS≤5)。通过对患者年龄、性别、伴鼻息肉、伴变应性鼻炎、有吸烟史及前期鼻部手术史等临床因素及血清总IgE水平、外周血嗜酸粒细胞和单个核细胞个数等进行分析,在组间进行Mann-Whitney U分析,采用多变量Logistic回归模型对嗅觉障碍的影响因素进行相关性分析。结果:在嗅觉障碍影响生活质量组中伴鼻息肉、伴变应性鼻炎、有前期手术史的患者数量及血清总IgE水平、水肿评分均明显高于未影响生活质量组(均P<0.05);性别、年龄、吸烟史、伴鼻中隔偏曲及外周血嗜酸粒细胞数、单个核细胞数在2组患者之间差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logisitic分析发现血清总IgE增高、水肿评分高是影响嗅觉的危险性因素(OR=1.003、2.483,均P<0.01);而前期鼻部手术史是一个保护因素(OR=0.408,P<0.01)。结论:严重的鼻腔水肿、血清总IgE增高是患者出现严重嗅觉障碍的危险因素,前期鼻部手术则是保护性因素。
- 甄甄廖波李志勇曹平平刘争
- 关键词：慢性鼻-鼻窦炎嗅觉障碍生活质量
- 感音神经性聋小鼠耳蜗外侧壁形态及功能的改变
- 2010年
- 目的:探讨感音神经性聋发生后小鼠耳蜗外侧壁形态和功能的改变。方法:选用3-4周龄的CBA/J小鼠为实验对象,联合应用卡那霉素及呋塞米致聋。在给药后0.5 d、1 d、2 d、7 d、28 d及112 d监测耳蜗内电位(EP)的改变;应用HE染色、免疫化学和透射电镜方法检测耳蜗外侧壁形态以及2种K+转运蛋白NKCC1和α2Na,K-ATPase的变化。结果:序贯应用卡那霉素及呋塞米后0.5 d小鼠EP开始下降,至1 d进行性下降,至2 d完全恢复正常并在随后长时期保持稳定。HE染色显示毛细胞损失和耳蜗外侧壁萎缩是主要病理改变。免疫化学结果表明耳蜗外侧壁NKCC1和α2Na,K-ATPase蛋白表达明显下降。透射电镜结果显示血管纹厚度在致聋后进行性下降,主要为边缘细胞萎缩造成。结论:萎缩后的耳蜗外侧壁在毛细胞严重缺失的情况下仍然可以保证EP的正常维持。
- 熊浩褚汉启周良强陈请国王燕黄孝文崔永华陈金李建玲李志勇刘云
- 关键词：血管纹耳蜗内电位
- 鼻根部纤维黄色瘤1例被引量：1
- 2011年
- 患者,男,14岁。因＂发现左鼻根部包块20余日＂入院。体检见左侧鼻根部一直径约7 mm圆形包块,质韧,与皮肤无粘连。双眼活动好,视力正常。局部无触痛,表面皮肤正常,无红肿破溃。无自觉症状。外院CT提示包块未侵及鼻骨。1.5个月前有书角击伤左鼻根部史,余无特殊。
- 李志勇褚汉启黄孝文
- 关键词：纤维黄色瘤
