李宗义
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：同济大学附属第十人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诱导人脐带间充质干细胞分化为视网膜色素上皮样细胞的研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨用猪视网膜色素上皮细胞(RPE)条件培养基诱导hUCMSCs分化为RPE样细胞的方法。方法通过流式细胞技术鉴定hUCMSCs的表面标记分子;通过诱导hUCMSCs分化成为脂肪、骨和软骨细胞确定其多系分化能力;将hUCMSCs培养在猪RPE的条件培养液中并添加诱导因子来诱导hUCMSCs向RPE细胞分化。对照组与处理组Q-PCR结果采用t检验比较。结果 hUCMSCs表达CD105、CD90、CD73、CD44和CD29,但不表达CD34,CD45和MHCII等分子标记,在成脂、成骨、成软骨分化培养基中可分化为脂肪、骨和软骨细胞。单独使用猪RPE条件培养液不能有效诱导hUCMSCs向RPE细胞分化,但联合应用猪RPE条件培养液和诱导因子(视黄酸,activin-A和人重组骨形成蛋白-7)可有效诱导hUCMSCs分化为RPE样细胞,RPE细胞标记分子RPE65、Mitf和Ck8/18的基因表达量分别提高了2.1±0.4、6.8±1.3和2.5±0.3倍(P<0.05)。诱导产生的RPE样细胞呈多边形,但不含色素颗粒。结论猪RPE条件培养液联合诱导因子可有效诱导hUCMSCs分化为RPE样细胞,可能会为治疗视网膜变性疾病提供合适的种子细胞。
- 李鹏李宗义王丽范氏雪幸田海滨王方吕立夏徐国彤
- 关键词：脐带间充质干细胞视网膜上皮细胞视网膜变性
- EPO修饰增强Müller细胞对RCS大鼠视网膜变性的干预效果被引量：2
- 2014年
- 目的研究人源促红细胞生成素(hEPO)修饰的Müller(hEPO-Müller)细胞对视网膜退行性病变大鼠的干预作用。方法通过质粒转染法构建hEPO和GFP的Müller细胞稳转株(hEPO-Müller和GFP-Müller);以体外共培养和体内细胞移植为研究体系,利用RT-PCR和冰冻切片及免疫荧光染色的方法检测hEPO-Müller对RCS大鼠视网膜退行性病变的干预作用。内核层与外核层厚度比较采用t检验。结果本实验成功构建了hEPO-Müller和GFP-Müller细胞系。将RCS大鼠的视网膜组织剥离并在体外不同条件下培养两周后测定视网膜各核层厚度发现,与对照细胞裂解液共培养组的内核层(15.94±1.77)μm和外核层(24.81±3.03)μm的厚度相比较,两核层的厚度分别在hEPO组为(23.03±3.29)μm,(33.92±7.59)μm(P<0.05);Müller组为(24.81±2.02)μm,(32.15±3.03)μm(P<0.05);hEPO-Müller组为(32.40±8.35)μm,(40.25±3.29)μm(n=3,P<0.01);以hEPO-Müller组厚度增加最为显著(P<0.05)。提示EPO和Müller细胞对视网膜变性都有干预作用且两者可以叠加。将hEPO-Müller和GFP-Müller分别移植到RCS大鼠的视网膜下腔,四周后取视网膜进行冰冻切片检测,染色结果显示,细胞移植后有更多的外核层细胞存活,且同样也是hEPO-Müller组的外核层细胞更多。此外,Müller移植并不会促进视网膜的胶质化。结论移植Müller细胞可以减缓RCS大鼠视网膜变性,而经hEPO修饰的Müller细胞对视网膜变性有更好的干预作用。因此,Müller细胞可以作为一种供体细胞兼携带hEPO等营养因子的载体用于视网膜变性的治疗。
- 李宗义李鹏高芙蓉范氏雪幸张敬法王方吕立夏徐国彤
- 关键词：细胞移植视网膜变性红细胞生成素MÜLLER细胞
- 诱导人胚胎干细胞分化形成具有三维结构的视网膜样组织的方法研究被引量：1
- 2016年
- 目的探讨在成分简单的培养条件下将人胚胎干细胞(h ESCs)通过3D培养的方式诱导分化为人神经视网膜各种细胞的方法。方法将不同系的h ESCs用消化酶消化后,以团块形式悬浮培养在含有1﹪Matrigel的培养液中。对于SHh ES8系的h ESCs在第1天加入BMP4信号通路抑制剂,然后每2天换液以逐渐降低其浓度。在分化的不同时间,通过检测全能性基因和视网膜标志基因的表达水平以确定h ESCs团块的分化状态。对于H9系的h ESCs,抑制Wnt信号通路以促进h ESCs分化过程中神经视网膜前体细胞重要转录因子CHX10的表达。数据经Graph Pad Prism 6.0c student's t-test分析处理。结果 (1)H9系h ESC经过15 d的分化,各眼区转录因子的表达水平都有大幅上调(与D0相比,D4时SIX3水平上升到720.1±238.6,P=0.039;SIX6上升到260.0±132.5,P=0.122;PAX6上升到2661±1353,P=0.121;LHX2上升到480.4±27.56,P<0.000;RAX上升到144.9±35.61,P=0.016),免疫荧光检测也显示此时分化的细胞已经具备早期视网膜细胞的特征;(2)在H9系h ESCs分化第7天添加IWR1e抑制Wnt信号通路,可以有效地提高CHX10的表达,使含CHX10阳性细胞的团块的比例从0﹪上升到86.6﹪(P=0.000),表明Wnt信号通路在视网膜细胞形成中起重要的调节作用;(3)SHh ES8系的h ESCs通过悬浮培养,在第24天时可以检测到有CHX10阳性的视泡样结构,继续培养至83 d,可以检测表达不同的神经视网膜细胞标志基因的细胞,包括CRX阳性的感光细胞或前体细胞、AP2α阳性的无长突细胞和ISLET1阳性的神经节细胞。结论不同系的h ESCs对同样的诱导分化显示出不同的反应;抑制Wnt信号通路可以促使CHX10表达,实现早期视网膜细胞的分化成熟;利用无血清悬浮培养的方式,可以使h ESCs分化为各种视网膜细胞和具有一定三维结构的视网膜样组织。
- 宋健李宗义徐国彤金颖
- 关键词：胚胎干细胞细胞分化视网膜
