曹毅
- 作品数：14 被引量：17H指数：2
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 恶性疟原虫FCC1/HN株醛缩酶编码区基因的克隆及表达被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)株糖酵解醛缩酶 (ALD)编码区基因。 方法 利用已知ALD基因序列设计一对特异性引物 ,从基因组DNA中用PCR扩增ALD基因 ,将其克隆入pQE 3 0载体 ,阳性克隆经酶切鉴定后测序 ,在此基础上将重组质粒转化大肠埃希菌M15进行表达。 结果 PCR扩增后获得特异性扩增片段 ,测序结果显示我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与恶性疟原虫 3D7株ALD基因序列完全相同。重组融合蛋白通过镍 次氮基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析及阳离子交换层析进行纯化。 结论 我国的恶性疟原虫FCC1/HN株与文献报道的恶性疟原虫 3D7株ALD编码区基因序列相同 。
- 张瑞娟朱淮民曹毅周爱国郑志强张青锋郑徽
- 关键词：恶性疟原虫FCCLHN醛缩酶PCR引物
- 医学寄生虫学实验教学中应用虚拟教室系统的探讨被引量：1
- 2012年
- 随着军队院校会议召开后招生规模的调整,包括我校在内的一些院校短期内面临着教育资源相对缺乏的问题。为此本文提出在目前已有的医学寄生虫学教学实验室基础上,借助军队院校网络教学应用系统,建立军队医科院校医学寄生虫学虚拟教室的思路。
- 张冬梅潘卫庆彭恒曹毅陈超
- 关键词：虚拟教室医学寄生虫学实验教学
- 医学寄生虫学信息化教学改革的几点思考被引量：2
- 2009年
- 随着多媒体技术、网络技术、模拟技术、仿真技术、虚拟现实等先进信息技术在教学实践中的广泛运用,医学寄生虫学教学由传统模式向信息化教学模式变革成为必然。在新的形势下,应做好相应的教学改革,将传统教学特点与信息化教学优势相结合,同时教师也应积极抓住机遇迎接信息化改革所带来的挑战。
- 张峰朱淮民曹毅
- 关键词：医学寄生虫学信息化教学教学方法
- 乙型脑炎病毒prM蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的克隆日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）前膜蛋白（prM）编码基因，原核表达、纯化prM蛋白，以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体（mAb）；方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆人原核表达载体pET32a，转化大肠埃希菌BL21（DE3）LysS后以IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA纯化后进行SDS-PAGE分析。用纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠，经细胞融合和亚克隆后筛选出能分泌识别prM蛋白的mAb的杂交瘤细胞株。用Western Blot和免疫组化方法检测单克隆抗体的特异性。结果从鼠脑中克隆出约500bp的JEV prM基因，将其克隆人原核表达载体中，在大肠埃希菌中获得了较好表达。纯化的prM蛋白免疫BALB／c小鼠，经传统细胞融合及筛选方法制备出单克隆抗体，抗体滴度为10^5。ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗具有较好的特异性。结论成功的表达和纯化了日本乙型脑炎病毒的prM蛋白，并完成了单克隆抗体的制备，为乙型脑炎病毒感染的早期诊断及预防的研究奠定了良好的基础。
- 宁北芳朱淮民周晓俊曹毅周爱国
- 关键词：脑炎病毒病毒包膜蛋白质类原核细胞抗体单克隆
- 伯氏疟原虫顶端膜抗原1胞外区及其亚区的表达与免疫保护作用分析
- 2007年
- 目的表达伯氏疟原虫顶端膜抗原1(PbAMA-1)胞外区E及其各亚区,分析其免疫原性和免疫保护作用。方法抽提伯氏疟原虫基因组,对PbAMA-1基因测序,依据该序列采用毕赤酵母密码子使用频率重新设计PbA-MA-1基因序列。将其胞外区E分为3个彼此重叠的基因片段DⅠ、DⅡ和DⅢ并进行优化,人工合成后在大肠埃希菌中诱导表达。表达产物经纯化和重折叠,分别与福氏佐剂乳化后免疫小鼠和家兔,均免疫3次,间隔2周。每次免疫剂量,小鼠为20$g,家兔为100$g。ELISA检测抗体效价,并以疟原虫攻击实验确定各抗原的免疫保护效果。结果测得的PbAMA-1基因序列与Sanger测序中心公布的序列完全一致。密码子优化并人工合成的DⅠ、DⅡ、DⅢ和E目的基因片段在大肠埃希菌表达载体pET32a均获得诱导表达,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,各目的基因表达产物大小与预计的相对分子质量Mr 44 300、Mr 33 300、Mr 29 900和Mr 67 200相一致。表达产物经镍离子螯合柱(Ni-NTA柱)纯化和谷胱甘肽(GSH)氧化还原法体外重折叠,蛋白纯度达90%以上,各纯化的重组蛋白在小鼠体内均激发产生高滴度抗体。其中,完整的胞外区E第3次免疫后抗体滴度为(34.4±0.15)×10-4,与其他组相比,免疫原性较其他各亚区更强(t=5.66,P<0.01;t=2.27,P<0.05和t=5.05,P<0.01)。取家兔免疫血清与感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠血膜抗原片进行间接荧光抗体试验(IFAT),均为阳性,其中抗E的抗血清免疫荧光强度最高,与ELISA检测的抗体水平一致。取家兔抗血清对小鼠伯氏疟原虫粗提抗原进行蛋白质印迹(Western blot)分析,产生特异性反应条带,表明能够识别天然的PbAMA-1蛋白。免疫小鼠在以伯氏疟原虫攻击实验中得到部分保护,DⅠ、DⅡ、DⅢ和E各免疫组小鼠与佐剂对照组相比,存活时间明显延长(t=2.78,P<0.05;t=2.67,P<0.05;t=3.46,P<0.01和t=3.50,P<0.01)。结论�
- 李树玲张冬梅曹毅潘卫庆
- 关键词：伯氏疟原虫顶端膜抗原1免疫原性
- “基于网络互动平台的《医学寄生虫学》PBL教学”初步实践被引量：8
- 2011年
- 为适应新的"生物-心理-社会"医学模式对医学寄生虫学教学的要求,开展基于问题的学习(PBL)模式教学成为现今教学改革中的常用手段,但是经典的PBL模式教学在实践中又面临诸多困难,如教学时间、师资配备和教学资源有限等。网络教学具有资源丰富、互动快捷、灵活高效等优点,为教学提供了极佳的技术平台。本研究结合两者的优势,开展了"基于网络互动平台的《医学寄生虫学》PBL教学"实践,对教学过程中遇到的各种问题和解决方法进行了总结,并提出改进计划。
- 曹毅彭恒张冬梅潘卫庆朱淮民
- 关键词：医学寄生虫学网络互动平台PBL
- 题库命题法下不同专业《医学寄生虫学》试卷结构差异成因分析
- 2012年
- 本研究对第二军医大学2010年3个不同专业《医学寄生虫学》课程通过题库命题组成的试卷及其实测数据进行了各项质量指标的比较分析。各专业试卷的α信度系数均大于0.70,试卷的知识结构与能力结构基本均衡,其中专业2试卷的信度系数较低,主要是因试题本身质量及题库指标未能及时修订等造成。本研究通过分析表明,根据实测数据对题库中的试题及其指标进行修订,可提高题库命题质量,减小试卷间差异。
- 贾林芝马雅军曹毅钱锋李翔宇
- 关键词：医学寄生虫学题库试卷结构
- 应用高通量测序技术鉴定伯氏疟原虫基因组piggyBac转座插入位点
- 目的 piggyBac转座子介导的随机插入突变系统,是新近发展起来的一种疟原虫功能基因组学研究的高通量、高效率的正向遗传学(forward genetics)方法.鉴定基因组中piggyBac转座插入位点的精确位置,是利...
- 曹毅芮冰李明星陈标榜张冬梅潘卫庆
- SARS病毒Spike蛋白重组腺病毒疫苗的构建及其免疫学分析被引量：3
- 2009年
- 目的构建基于SARS病毒Spike(S)蛋白的重组腺病毒,并对该重组腺病毒进行初步鉴定和免疫学探讨。方法通过全基因合成得到全长S蛋白基因,利用Ad5腺病毒系统构建S蛋白基因的重组腺病毒,采用间接免疫荧光(IFA)试验和蛋白免疫印迹法(Western blot)对S蛋白的表达进行鉴定,再用重组腺病毒免疫小鼠,观察小鼠抗体诱生情况,从而对该重组腺病毒的免疫效果进行初步评价。结果PCR扩增重组腺病毒质粒外源片段,大小为800 bp,与预期值一致;Western blot和IFA结果表明,重组腺病毒(rAd-S)表达S蛋白能被马抗SARS血清识别;ELISA检测结果显示,rAd-S能刺激小鼠机体产生抗体。结论重组腺病毒系统成功表达了SARS病毒S蛋白,免疫小鼠产生S蛋白特异的抗体。
- 郑尚永张冬梅曹毅张青峰沈璐辉潘卫庆
- 关键词：SARSSPIKE蛋白重组腺病毒疫苗
- 宿主肝细胞来源分子对红外期疟原虫感染和发育影响的研究进展被引量：1
- 2013年
- 疟原虫入侵宿主肝细胞并在其中发育增殖是建立疟疾感染的关键环节，因此该阶段也成为抗疟药物和疫苗研发针对的重要靶标。肝期原虫的入侵和发育涉及多种宿主肝细胞来源分子与疟原虫来源分子的相互作用。近年来的研究陆续发现了一些疟原虫与宿主相互作用中发挥重要功能的宿主肝细胞来源分子。该文就影响子孢子入侵、疟原虫肝细胞内生长发育和营养代谢、宿主对疟原虫免疫反应的肝细胞来源分子研究进展进行综述。
- 李明星曹毅潘卫庆
- 关键词：疟原虫
