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肿瘤坏死因子对间充质干细胞体内外免疫调节作用的影响被引量：3: 2012年; 间充质干细胞(MSC)具有特征性的免疫调节作用;然而MSC对胶原诱导性关节炎(CIA)无治疗作用。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是类风湿性关节炎发生发展中的关键因素,因此本研究利用人脐带MSC为研究对象,观察TNF-α处理后MSC细胞内炎性反应相关转录因子NF-κB核转移情况;利用MTT法检测TNF-α对MSC增殖的影响;以SD大鼠脾脏为刺激细胞,Wistar大鼠脾脏单个核细胞为反应细胞,观察MSC对混合淋巴细胞反应的抑制作用;以Wistar大鼠CIA模型为研究对象,探讨MSC或TNF-α处理的MSC的治疗作用,用膝关节病理评分记录治疗效果。结果表明:TNF-α处理后NF-κB迅速从胞浆内转移至细胞核,但这种作用不影响MSC体外增殖。在不同细胞浓度条件下,无论用TNF-α处理与否,MSC均可显著抑制淋巴细胞增殖(均P<0.001);TNF-α处理的MSC有更强的抑制作用,在低细胞密度条件下尤为显著。然而,病理分析显示,MSC治疗组关节炎性浸润显著加重,病理评分明显高于未治疗组(P<0.05)。结论:TNF-α对体内外MSC的免疫调节作用具有不同的影响,其机制尚需进一步阐明。; 王勇奇李志勇曹小芳王恒湘郭子宽; 关键词：肿瘤坏死因子Α 间充质干细胞胶原诱导关节炎免疫调节

高迁移组蛋白1-A盒对大鼠胶原诱导的关节炎的治疗作用被引量：1: 2013年; 目的探讨高迁移组蛋白1-A盒(A-box of high mobility group protein-1,A-BOX)对类风湿性关节炎的治疗作用。方法以胶原诱导的关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型为研究对象,在胶原造模4周后,进行关节炎症状评分,并将实验动物随机分为三组(每组12只),腹腔内分别注射A-BOX(每只大鼠注射0.62 mg,A-BOX组)、甲氨蝶呤(1 mg/Kg,MTX组)和生理盐水(阴性对照组),每周一次,连续治疗4周。治疗后进行关节炎症状评分、踝关节病理学及X线摄片检查。结果所有造模大鼠均出现了关节炎症状,造模后关节炎评分为(7.25±0.70),显著高于正常大鼠(P<0.01)。治疗4周后,阴性对照组症状评分为(7.77±0.44),显著高于MTX组(6.25±1.03)(P<0.05)和A-BOX组(6.12±0.99)(P<0.01)。MTX组与A-BOX组无显著差异(P>0.05)。病理学显示,A-BOX组滑膜增生、血管新生和炎症评分分别为(0.00±0.00),(1.14±0.69)和(1.71±0.75);MTX组分别为(0.71±0.48),(1.57±0.78)和(1.42±0.53),均显著低于阴性对照组的(2.28±0.45),(1.85±0.69)和(2.14±0.89)(P<0.05)。A-BOX组未见滑膜增生,评分低于MTX组(P<0.05);两组间其他改变无显著差异(P>0.05)。X线摄片A-BOX组、MTX组及阴性对照组评分分别为(1.85±1.06),(1.85±1.06)和(3.28±0.48),均有统计学差异(P<0.05)。结论 A-BOX对大鼠CIA治疗作用稍优于MTX,具有药物开发前景。; 曹小芳毕晓云王勇奇李志勇陈晶砺黄舒郭子宽王恒湘; 关键词：甲氨蝶呤

HMGB1分子A-Box的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究被引量：1: 2012年; 目的克隆人HMGB1 A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM-T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE观察表达量。HIS-link层析柱纯化重组人HMGB1 A-box,蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT-PCR扩增得到了261 bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box。将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。; 曹小芳王恒湘何梓铭王芳杨洋郭子宽

HMGB1A-box克隆、表达、纯化及其体外作用观察: 为探讨高迁移率族蛋白1A盒(high mobility group protein a-box，HMGB1A-box)的体内体外作用，本文通过克隆人HMGB1 A-box的cDNA，构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)...; 曹小芳; 关键词：胶原诱导关节炎重组蛋白; 文献传递

人骨髓间充质干细胞对放射损伤小鼠造血恢复的影响被引量：8: 2012年; 本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)对受γ射线照射小鼠造血恢复的影响。亚致死剂量(6Gy)60Co-γ射线全身照射雌性BALb/c小鼠,静脉输注不同剂量(1×105,1×106和5×106)的hBMMSC,观察注射后小鼠血常规指标、骨髓造血祖细胞集落量以及血清人TPO,SCF和G-CSF水平等动态变化。结果表明:hBMMSC输注对亚致死量照射小鼠早期死亡率无影响;与对照组比较,接受细胞治疗小鼠早期血象水平无显著增高,但在第28天外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白水平高于对照组,尤以大剂量组明显(P值均小于0.05);在中剂量和大剂量hBMMSC组小鼠骨髓中,单个核细胞集落形成单位总数和粒单系集落形成单位数均高于对照组(P<0.05);hBMMSC输注后第2天,ELISA法检测可在细胞治疗组小鼠血清中检测到人G-CSF和SCF,以hBMMSC高剂量组G-CSF含量为最高(P<0.01)。所有各组未检测到人TPO,治疗后第9和16天所有各组血清中均未检测到人G-CSF和SCF。结论:hBMMSC输注可加速放射损伤小鼠造血功能的恢复,其机制可能与细胞短暂分泌相关造血细胞调控因子有关。; 张晓玲尹松梅陈玲珍曹小芳谢丽萍郭子宽; 关键词：间充质干细胞造血恢复

人骨髓间充质干细胞裂解物对胶原诱导的大鼠关节炎的治疗作用被引量：1: 2013年; 以往的研究表明,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对Wistar大鼠胶原诱导性关节炎(colla-gen-induced arthritis,CIA)模型无治疗作用。本研究进一步探讨细胞裂解物是否具有CIA治疗作用。在造模4周后,裂解物治疗组CIA大鼠腹腔内注射1×107人骨髓MSC裂解物,阳性对照组CIA大鼠腹腔注射甲氨蝶呤(meth-otrexate,MTX)1 mg/kg,阴性对照组CIA大鼠腹腔注射生理盐水,以上各组治疗频率皆为每周1次,连续治疗4周。治疗4周后,记录大鼠踝关节肿胀程度变化,并进行病理学及X线摄片检查。结果表明:所有实验组大鼠都出现了关节炎症状,并在实验后期出现了关节畸形。治疗组关节炎综合评分均显著高于正常对照组(P<0.01),治疗4周后综合评分分别为6.87±0.83,6.44±1.13和7.33±0.77,治疗组之间无显著差异。病理学分析显示,MSC裂解物治疗组和对照组炎症综合评分分别为2.28±0.48和2.28±0.55,显著高于MTX组(0.71±0.48,P<0.05)。然而,踝关节X线分析显示,对照组评分为4±0.57,显著高于裂解物治疗组(2.71±0.75)和MTX治疗组(2.57±0.78,P<0.05)。结论:MSC裂解物对大鼠CIA有一定的治疗作用,但效果不及MTX。; 曹小芳王勇奇李志勇郭子宽王恒湘; 关键词：间充质干细胞胶原诱导关节炎细胞治疗

人骨髓间充质干细胞对胶原诱导的大鼠关节炎无预防和治疗作用被引量：4: 2012年; 为探讨间充质干细胞(MSC)在类风湿性关节炎治疗与预防中的作用,以胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)Wistar大鼠模型为研究对象,分别于胶原免疫次日(预防组)和造模2周后(治疗组),腹腔内注射107人骨髓MSC,每周1次,连续2周(预防组)或4周(治疗组)。对照组相应注射生理盐水(NS)。自第2周始,每周记录大鼠踝关节肿胀程度,6周时进行病理学检查及脾脏单核/巨噬细胞活性测定。结果表明:所有实验组大鼠都出现了关节炎症状,而且在后期出现了关节畸形。MSC预防组与治疗组关节炎评分均显著高于NS对照组(P<0.01),6周时分别为9.5±0.5,9.4±0.6和7.6±0.6,MSC预防组和治疗组之间无差异。病理学分析显示,MSC预防与治疗组膝关节滑膜炎和关节炎评分均高于模型组。此外,MSC预防组、治疗组和NS对照组大鼠脾脏有核细胞中,CD86+分别为(4.16±1.48)%,(4.06±1.97)%,(4.15±2.04)%,各组CD11b/c+CD86+分别为(1.04±0.68)%,(0.95±0.56)%,(0.98±0.44)%,3组之间没有显著差异,但均高于健康大鼠〔(0.97±0.18)%和(0.30±0.17)%,均P<0.05。结论:MSC输注对大鼠CIA没有预防及治疗作用,反而加重了关节病理损伤,其机制尚需进一步探讨阐明。; 王勇奇曹小芳何梓铭肖凤军王恒湘郭子宽; 关键词：骨髓间充质干细胞胶原诱导关节炎

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曹小芳

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