施腾鑫
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：华侨大学化工学院工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化被引量：8
- 2010年
- 以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.
- 刘治江贺淹才李红然刘嘉施腾鑫
- 关键词：粘质沙雷氏菌分子定向进化包涵体
- 重组粘质沙雷氏菌几丁质酶C的纯化及酶学性质被引量：1
- 2010年
- 为从已构建的重组大肠杆菌pET-22b-chiC获得高纯的几丁质酶C,通过降低培养温度,提高粘质沙雷氏菌几丁质酶C的可溶性表达.表达产物经镍柱亲和层析(IMAC)和Phenyl-Sepharose疏水层析(HIC)分离纯化后,得到电泳纯的几丁质酶.酶学性质研究表明,纯化的几丁质酶C为单体蛋白,相对分子质量为51.8ku;最适pH值为5.0,最适温度为55℃,在55℃的条件下保温4 h后仍有90%以上的酶活力.研究结果还表明,Cu2+,Hg2+,Co2+,Mg2+对酶活力均有明显抑制作用,而Fe2+,Zn2+,Sn2+,Ba2+对酶活力有一定促进作用,Mn2+对酶活力明显促进作用.
- 刘嘉贺淹才施腾鑫李梓君王珍珠
- 关键词：粘质沙雷氏菌分离纯化酶学性质
- 黏质沙雷氏菌产几丁质酶二步发酵工艺的优化
- 2009年
- 采用二步发酵法对…株黏质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的产几丁质酶发酵条件进行研究，以期在已优化的一步发酵的基础上酶活力得到进一步提高。在二步发酵产酶的过程中，通过单因素法优化得到二步发酵培养基的最适碳源、氮源浓度和菌龄，同时选取发酵时间、初始pH、接种菌体量和装液量4个因子进行正交试验。最终得到的最优条件为：胶体几丁质0．8％，酵母粉1．0％，菌龄12h，发酵时间72h，初始pH8．5，菌体干重90mg，装液量20mL。在此条件下，酶活力可达1．021U·mL^-1。在二步发酵工艺中另添加0．1％纤维素，酶活力可提高至1．128U／mL，比一步发酵提高了1．27倍。
- 贺淹才施腾鑫刘嘉舒静波周娟
- 关键词：几丁质酶二步发酵法发酵时间发酵培养基
- 重组基因工程菌几丁质酶C的可溶性表达研究
- 2013年
- 在不同培养温度条件下对产几丁质酶C的基因工程菌BL21(DE3)进行诱导,使其表达可溶性蛋白。随后在较佳培养温度诱导条件的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱等成分来更进一步的提高几丁质酶C的可溶性表达。其结果是在25℃诱导条件下,以添加2 g/L葡萄糖的LB培养基作为基础培养基进行培养,在基础培养基中添加3 g/L甘油的总酶活最高,达到了18.17 U/mL,较之仅含2 g/L葡萄糖的LB培养基在37℃及25℃诱导培养条件下酶活力分别提高了41.6%和20.3%;添加0.3%甘氨酸约90%的可溶性几丁质酶表达到了胞外,胞外酶活达到14.68 U/mL;添加0.5 M山梨醇/2.5 mM甜菜碱工程菌胞内酶活达到最高,为8.43 U/mL。结果表明适当降低工程菌诱导表达时的培养温度提高了几丁质酶C的可溶性表达,在较佳温诱导表达的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱更进一步的提高了几丁质酶C的可溶性表达。
- 刘嘉黄芳施腾鑫贺淹才
- 关键词：可溶性表达
- 黏质沙雷氏菌产几丁质酶二步发酵工艺的优化被引量：1
- 2011年
- 采用二步发酵法,研究黏质沙雷氏菌的产几丁质酶发酵条件.在二步发酵产酶的过程中,通过单因素法优化得到二步发酵培养基中最适碳源、氮源的质量分数和菌龄,同时选取发酵时间、初始pH值、接种菌体量和装液量4个因子进行正交试验.最终得到的最优条件:胶体几丁质质量分数为0.8%,酵母粉质量分数为1.0%,菌龄为12h,发酵时间为72h,初始pH值为8.5,菌体干质量为90mg,装液量为20mL.在此条件下,酶活力可达17.020μkat.L-1.另外,在二步发酵工艺中添加0.1%纤维素,酶活力可提高至18.804μkat.L-1,比一步发酵提高1.27倍.
- 施腾鑫贺淹才刘嘉舒静波周娟
- 关键词：黏质沙雷氏菌几丁质酶二步发酵
- 黏质沙雷氏菌产几丁质酶的发酵工艺优化被引量：4
- 2010年
- 利用均匀设计法,优化一株黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)产几丁质酶培养基的组分;同时,利用正交设计法优化其摇瓶发酵产酶的条件.研究结果表明,最佳培养基组分(质量分数):0.504%胶体几丁质,1.178%酵母粉,0.025%MgSO4.7H2O,0.095%K2HPO4,0.001%FeSO4.7H2O,0.005%山梨醇,0.030%KH2PO4;最佳摇瓶发酵工艺条件:培养时间为48 h,发酵温度为30℃,初始pH值为9.0,装液量为30 mL,接种量为1%.在此优化条件下,酶活力可达9.39μkat.L-1,比未优化的产酶条件下酶活力提高了81.6%.
- 施腾鑫刘嘉贺淹才
- 关键词：黏质沙雷氏菌几丁质酶均匀设计正交设计
