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胰、肾同期联合移植治疗糖尿病合并尿毒症40例被引量：1: 2008年; 目的报告40例胰、肾同期移植（SPK）治疗糖尿病合并尿毒症的结果及经验。方法共40例糖尿病合并尿毒症病人接受SPK，平均年龄为（45.8±82）岁。供肾先植入左侧髂窝。供胰植入右下腹腔，移植胰动脉与右侧髂外动脉端侧吻合，移植胰静脉与右侧髂外静脉端侧吻合。其中胰液膀胱引流术式2例，改进的胰液空肠引流术式38例。移植肾平均冷血时间为（7．13±2．02）h，移植胰平均冷缺血时间为（9．95±2．01）h。术后早期采用皮质激素＋霉酚酸酯＋他克莫司（36例）／环孢素A（2例）＋抗淋巴细胞球蛋白（ALG）或抗CD25抗体四联诱导治疗，以后改为三联维持。结果受者、移植肾和移植胰6个月存活率均为97．5％，1年存活率均为94．8％，受者、移植胰和移植肾3年存活率分别为94．8％、84．3％和84．3％。39例停用胰岛素，平均停用胰岛素时间为（6．87±6．80）d，空腹血糖平均恢复正常时间为（13．68±9．05）d。术后3周口服糖糖耐量试验、胰岛素和C肽释放试验显示移植胰功能完全正常。血淀粉酶恢复正常时间平均为（10．24±7．72）d。肾功能延迟恢复（DGF）8例，血肌酐恢复正常时间平均为（52．75±20．01）d，其余30例血肌酐恢复正常时间平均为（8．03±7．39）d。术后主要外科并发症为移植胰伤口感染、胰十二指肠-空肠出血和移植肾周出血，3例（7．9％）因并发症再次手术，未发生与胰液引流术式相关的并发症如胰漏、肠漏、腹腔脓肿及肠梗阻等。结论（1）SPK是治疗糖尿病合并尿毒症的有效方法；（2）改进的胰液空肠引流术式更简化、安全，更符合生理。; 明长生陈文伟宫念樵曾凡军张伟杰陈知水林正斌魏来刘斌蒋继贫徐逸陈忠华; 关键词：胰腺

含人p27基因的重组腺病毒的构建及鉴定: 2008年; 目的:构建并鉴定含有人p27基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP;酶切、PCR鉴定重组腺病毒质粒;利用293细胞包装重组腺病毒载体PAd-p27-EGFP,通过荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:经酶切和PCR鉴定,成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP,利用脂质体转染人293细胞后,转染腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应(CPE)。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的Flag-p27和EGFP基因的腺病毒载体,为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功之间的关系,并为寻找慢性移植物失功的基因治疗的途径奠定基础。; 徐逸朱舟吴柯陈曦林何文涛曾宁陈忠华; 关键词：P27 腺病毒细胞周期慢性移植肾失功

转染真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27对星形胶质细胞增殖的抑制作用被引量：2: 2007年; 目的:探讨脂质体介导真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染体外培养星形胶质细胞后对其增殖的影响。方法:利用脂质体将质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染入纯化培养的星形胶质细胞,通过免疫荧光化学标记观察转染质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27后星形胶质细胞内外源基因EGFP、p27的表达情况,并观察其对星形胶质细胞Ki67表达的影响。结果:脂质体介导质粒pGFAP-IRES2-EGFP-p27转染后24 h即开始有EGFP的表达,48-72 h EGFP表达达高峰;通过免疫荧光标记发现,表达EGFP的细胞同时有p27表达水平明显增高;和EGFP阴性细胞相比,EGFP阳性细胞中Ki67的阳性率明显下调(P<0.01)。结论:GFAP启动子能启动目的基因p27和EGFP在星形胶质细胞的表达;连于p27的下游EGFP可作为报告基因,通过观察EGFP的表达可了解外源性p27的表达情况;导入外源性p27能有效抑制星形胶质细胞的增殖。; 朱舟潘邓记徐逸喻志源徐沙贝王伟; 关键词：真核表达载体

大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：1: 2010年; 目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础。方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble。分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体。用Pac I酶切鉴定重组菌。将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况。将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞,并检测星形胶质细胞CX43的表达。结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞。结论:成功构建表达大鼠CX43特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据。; 汪琦徐逸王伟朱舟; 关键词：CX43 腺病毒载体缺血性脑损伤

胃肠复合术式治疗病态性肥胖症的疗效观察被引量：2: 2013年; 目的探讨行胃肠复合术式一胃袖状切除附加改良空回肠旁路术（Sleeve Gastrectomy and Modified Jejunoileal Bypass，SG—MJIB）治疗病态性肥胖症的疗效。方法对本科室治疗的7例病态性肥胖症伴有多种合并症的患者进行疗效随访分析。结果7例患者SG—MJIB术后仅出现1例切口液化裂开，术后随访10-39（27．13±11．33）个月，多余体重减少百分比（Percent Excess Weight Loss，％EWL）为（53．15±19．18）％，SG—MJIB术后4例肥胖症患者的高血压或血糖异常均恢复正常；7例高脂血症中5例缓解或好转；7例脂肪肝中5例好转；7例高尿酸血症术后5例缓解，2例好转；4例呼吸睡眠综合征患者3例缓解，1例好转。结论SG—MJIB对病态性肥胖伴有多种合并症的患者疗效较好，并发症轻微，但目前病例偏少，值得进一步研究。; 张建军徐逸任玉萍吴毅平; 关键词：胃切除术肥胖症外科学

Galeetin-9（Tim-3L）显著减弱小鼠移植排斥: 2009年; 目的探究Galectin-9（即Tcell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 lig-and，Tim-3L）的真核定位与功能，及其对同种异基因排斥反应的影响。方法PCR扩增Galectin-9片段，插入到pEGFP—N1质粒，转染中国仓鼠卵巢癌细胞系（CHO）行G418筛选，分选增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性细胞。免疫组化检测Galectin-9的表达，Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响，ELISA检测IL-2水平。给予BALB／c→C57BL／6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7d。结果Galectin-9表达于细胞浆，稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生。上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转。Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[（22．7±1．2）d，（7．2±0．4）d）]。结论真核细胞中Galectin．9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫；Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物。; 何文涛袁劲方泽民汪峰徐逸周鸿敏高英张维娜王璐陈忠华; 关键词：TIM-3 GALECTIN-9 免疫抑制小鼠

NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析: 2008年; 目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。; 徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华; 关键词：双顺反子 P27基因

聚丙烯酰胺水凝胶隆乳术后取出及乳房畸形修复方法被引量：5: 2014年; 目的探讨聚丙烯酰胺水凝胶（polyacrylamide hydrogels,PAHG）注射隆乳术后取出PAHG及修复术后乳房畸形的手术方法和时机.方法经乳晕下缘1/2长切口,利用内镜辅助进行注射物清除术,根据注射物侵蚀范围确定是否行同期硅凝胶乳房假体（以下简称假体）置入术,利用生物修补膜固定假体并重塑乳房下皱襞.结果 46例中,39例注射物及其包膜被完全取出,7例取出游离PAHG,而包膜因广泛且单薄致有残留.14例同期置入乳房假体,其中5例应用生物修补膜;4例Ⅱ期置入假体;切口均Ⅰ期愈合,切口瘢痕不明显;1例伴发乳腺癌患者切除患侧乳房;1例同期置入假体及生物修补膜,术后3个月出现假体移位,再次手术重新固定;1例应用生物修补膜,术后出现注射物残腔积液,最终取出生物修补膜.结论采用经乳晕下缘1/2长切口内镜辅助下行PAHG取出并完整去除包膜的手术,注射物取出彻底,可应用假体同期或延期修复取出术后乳房的畸形,必要时应用生物修补膜固定假体并重塑乳房下皱襞形态.; 任玉萍花卉周阎施婧余晶徐逸吴毅平; 关键词：聚丙烯酰胺水凝胶乳房畸形 POLYACRYLAMIDE HYDROGELS

CD25单克隆抗体在临床肾移植中的应用被引量：11: 2005年; 陈忠华徐逸; 关键词：CD25单克隆抗体 IL-2受体肾移植嵌合型受体结合 T细胞增殖

Olomoucine对星形胶质细胞增殖及活化分泌的影响被引量：1: 2008年; 目的观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞机械损伤后增殖和活化分泌的影响。方法建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),分为对照组、划痕组和olomoucine干预组。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后GFAP表达;利用RT-PCR观察细胞因子IL-6和TNF-a的表达情况。结果划痕损伤刺激能使培养AS反应性增生活化。损伤早期出现IL-6、TNF-α表达水平增高,从损伤后12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大,数目增加;给予olomoucine干预后,细胞数目减少、体积明显减小,损伤后IL-6和TNF-α表达也显著下降。结论损伤刺激可促使AS活化,并发生反应性胶质增生;CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期,有效抑制损伤后星形胶质细胞的反应性增生,并能对AS的活化起到抑制作用。; 潘邓记朱舟陈华先徐逸夏友华王伟; 关键词：星形胶质细胞细胞周期 OLOMOUCINE 增殖活化

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徐逸

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