徐燕
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 供职机构：石河子大学医学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 端粒酶与骨髓间充质干细胞被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨导入外源性端粒酶逆转录酶能否使骨髓间充质干细胞生命周期延长,维持干细胞的自我更新能力和多向分化潜能,从而为其临床应用提供种子细胞。资料来源:应用计算机检索PubMed1980-01/2006-06期间有关端粒酶和骨髓间充质干细胞的文献,检索词“telomere,telomerase,bone marrow cell,mesenchymal stem cell”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索CNKI数据库1994-01/2005-12和万方数据库2003/2006期间的相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“端粒,末端转移酶,骨髓细胞,间充质干细胞。”资料选择:选取试验包括间充质干细胞自身端粒酶活性组和间充质干细胞中外源性端粒酶逆转录酶的活性组比较的文章,进行初审,删除明显不相关的试验研究,然后查找余下的文献全文,进一步判断是否为端粒酶对间充质干细胞的作用。纳入标准:①与端粒酶有关,无论是组成或是功能相关的。②与间充质干细胞有关,并涉及其分化潜能研究。排除标准:端粒酶与间充质干细胞之间没有建立关联的试验。质量评价主要考察资料的真实性和试验的严谨性。资料提炼:共检索到256篇相关文献,其中30篇文献根据相应标准采纳,其余文献均被删除。资料综合:端粒酶的表达对于维持骨髓间充质干细胞自我更新能力和复制潜能具有重要意义。利用端粒酶逆转录酶修饰骨髓间充质干细胞,可有效地体外长期扩增并维持干/祖细胞的多向分化潜能特性;通过异位表达端粒酶逆转录酶使骨髓间充质干细胞永生化,可为骨髓间充质干细胞基础研究及临床应用提供药物筛选模型或细胞模型。结论:随着组织细胞工程学的兴起,体外定向诱导干/祖细胞分化为各种所需组织细胞已经成为研究的焦点,因此诱导和增加端粒酶的活性,维持干细胞分化、自我更新和增殖能力,延长干细胞的寿命有重要意义。
- 徐燕慕晓玲
- 关键词：骨髓细胞干细胞
- 慢性砷暴露人骨髓间充质干细胞的生物学特性观察
- 2010年
- 目的观察抗砷细胞模型慢性砷暴露人骨髓间充质干细胞（CAsE—hFBMSCs）的生物学特性，探讨长期低剂量砷暴露对人骨髓间充质干细胞（hFBMSCs）的影响。方法常规条件培养hFBMSCs，48h急性砷毒性实验MTs法检测不同剂量砷刺激条件下[0（对照）、0．25、0．50、1．00、2．00、4．00、8．00、20．00、40．00、80．00、120．00μmol／L]第2代（P2）hFBMSCs细胞生存率，根据检测结果用1．00μmol／L亚砷酸钠刺激hFBMSCs14周，建立抗砷细胞模型CAsE—hFBMSCs，作为实验组，同时设立对照组，并采用荧光激活细胞分选术鉴定诱导前后细胞表型，流式细胞术检测第2、9、16代（P2、P9、P16）细胞周期，软琼脂克隆形成实验检测细胞是否发生恶性转化。结果〈10μmol／L时，急性砷刺激促进hFBMSCs增殖，而≥10μmol／L时．急性砷刺激则抑制细胞的生长。14周时实验组半数致死剂量（LC50）为（89．42±0．64）μmol／L，对照组为（52．48±0．71）μmol／L，组间比较差异有统计学意义（t=123．89，P〈0．05）；抗砷细胞模型CAsE—hFBMSCs的细胞表型CD34、CD45表达阴性，CD29、CD90、CD166表达阳性，与对照组比较细胞表型未见明显改变；CAsE—hFBMSCs的细胞周期变化较大，与对照组f（8．44±0．45）％、（9．14±0．14）％、（82．42±0．60）％]比较，P2实验组G2／M期[（17．72±5．47）％]和S期细胞[（25．34±3．36）％]增加，GO／G1期细胞减少[（56．96±8．83）％]，P16细胞周期恢复至与对照组相近的水平；软琼脂克隆形成实验中，抗砷细胞CAsE—hFBMSCs未见克隆形成。结论长期低剂量砷刺激对hFBMSCs生物学特性无明显影响。
- 冉玉琴冯丽娜徐燕唐琪慕晓玲
- 关键词：间质干细胞表型细胞周期
- 外源性端粒酶催化亚基不影响人骨髓间充质干细胞的特性被引量：2
- 2008年
- 目的研究稳定表达端粒酶催化亚基的人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)生物学特性。方法用含有人端粒酶返转录酶(hTERT)基因的反转录病毒质粒pBabepuro-hTERT感染hBMSCs,经嘌呤霉素(puro)筛选出转基因细胞,我们将其命名为hTERT-hBMSCs。采用TRAP-ELISA法检测hBMSCs细胞转染前后端粒酶活性的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,染色体核型分析,测量平板克隆形成率,成骨诱导等方法对hTERT-hBMSCs细胞生物学特性进行分析。结果TRAP-ELISA法检测转染hTERT的hBMSCs的端粒酶为阳性;hTERT-hBMSCs细胞表面抗原CD44表达阳性,CD34阴性;hTERT-hBMSCs比hBMSCs增殖活跃,目前已传了11代,尚未见衰老迹象,其染色体数目和结构正常,未见畸变;克隆形成率较低,为正常细胞;并保持干细胞成骨分化潜能。结论将外源性hTERT基因转入hBMSCs后,不影响其生物学特性和分化功能。
- 徐燕冯丽娜唐琪冉玉琴慕晓玲
- 关键词：人骨髓间充质干细胞端粒酶催化亚基永生化四甲基偶氮唑蓝法
- 人骨髓间充质干细胞表型及其增殖特性被引量：4
- 2007年
- 目的:分离培养及纯化人骨髓间充质干细胞,鉴定其表型与增殖特性。方法:实验于2006-11在上海复旦大学遗传工程国家重点实验室完成。①由上海浦东妇幼保健医院协助,骨髓标本采自因意外事故流产死亡的正常胎儿,产妇及其家属均签署知情同意书,实验经过医学伦理委员会批准。②无菌操作分离死亡2h内的胎儿下肢股骨、胫骨,贴壁筛选法分离培养胎儿骨髓间充质干细胞。细胞长满80%左右用胰酶消化传代,1∶4传于新的培养瓶中,原代培养结束。传代培养细胞长满后均按1∶3或1∶4传代,用a-MEM+胎牛血清+二甲基亚枫冻存备用。③倒置相差显微镜下观察原代及传代培养的人骨髓间充质干细胞的生长情况及形态变化。MTS法绘制细胞生长曲线,荧光激活细胞分选术鉴定细胞表面分子,流式细胞术检测细胞周期,Real-timePCR分析不同代次细胞转录因子oct-4的表达丰度。结果:①人骨髓间充质干细胞的生长情况及形态观察:接种48h后,贴壁细胞呈梭形、多角形成纤维细胞样形态,大小均一。传代培养细胞已看不到血细胞贴壁,形态更加均一,呈克隆样生长。传至18代后生长减慢,20代后出现胞浆空泡化、胞体变大等老化现象。②人骨髓间充质干细胞的生长曲线:细胞贴壁48h基本无增殖,处于潜伏期;对数增殖期为3～5d,第6天后进入平台期,细胞出现接触抑制现象。③人骨髓间充质干细胞表面标记鉴定:第2代人骨髓间充质干细胞纯度可达98%以上,其细胞表型CD29,CD90,CD166呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达。④人骨髓间充质干细胞周期检测结果:培养的第2代人骨髓间充质干细胞82%以上处于G0/G1期,处于S期的细胞比例不到10%,8%左右的细胞处于G2/M期,保持了较高的增殖潜能。⑤转录因子oct-4在人骨髓间充质干细胞中的表达:oct-4在第3,7,12,18代人骨髓间充质干细胞中的表达丰度呈略下降的趋势(0.68�
- 冉玉琴慕晓玲何大为徐燕秦波
- 关键词：骨髓细胞间质干细胞细胞分离
- 建立永生化骨髓间充质干细胞株被引量：6
- 2007年
- 目的:将外源性人端粒酶反转录酶基因转入人骨髓间充质干细胞,以建立永生化细胞株。方法:实验于2006-01/2007-01在石河子大学新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室完成。①实验材料:骨髓标本采自因意外事故引产死亡的8个月正常胎儿,家属均签署知情同意书。大肠杆菌DH5α分子克隆的受体菌由本室保存。质粒pBabepuro-hTERT由美国Weinberg博士惠赠。PA317细胞和Hela细胞由郭志儒博士惠赠。NIH3T3细胞由黄瑾博士惠赠。②实验方法:无菌条件下将骨块置于α-MEM培养液中,分离及扩增培养人骨髓间充质干细胞。提取并纯化质粒pBabepuro-hTERT,转染包装骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选后获得抗性克隆,选取病毒滴度最高的细胞克隆感染生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞。③实验评估:采用端粒酶重复序列扩增法-酶链免疫吸附法检测人骨髓间充质干细胞转染前后端粒酶活性的变化,样本的△A值高于0.2视为端粒酶阳性。结果:①骨髓间充质干细胞的形态观察:第3代人骨髓间充质干细胞形态不规则,体积较大的细胞逐渐死亡,以梭形为主。②基因转染包装细胞和克隆筛选结果:嘌呤霉素筛选7d后,转染的细胞出现抗性克隆。待细胞克隆长至肉眼可见时将细胞克隆消化后扩增培养,挑选出4个抗性克隆,分别命名为克隆1,2,3,4。③病毒滴度的测定:1～4号细胞克隆的病毒滴度分别为3×106,7×105,4×105,9×106cfu/L。④端粒酶活性变化的检测:未转染的第3代骨髓间充质干细胞△A值为0.121±0.043,端粒酶活性为阴性。第3代人端粒酶反转录酶-骨髓间充质干细胞的△A值为1.741±0.103,端粒酶活性为阳性。结论:导入外源性人端粒酶反转录酶基因后可激活骨髓间充质干细胞的端粒酶活性。
- 徐燕慕晓玲
- 关键词：骨髓间充质干细胞永生化
